用原位杂交检测基因枪轰击小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内分布规律

将小鹅瘟病毒(Goose Parvovims,GPV)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只6、3、1μg的剂量基因枪轰击免疫4周龄BALB/c小鼠,于免疫后不同时间采集小鼠心、肝、脾、肺、肾、肠、脑和免疫部位皮肤等组织,用原位杂交方法检测pcDNA-GPV-VF3在小鼠体内的分布规律.结果显示,pcDNA-GPV-VP3在免疫后1 h即分布于小鼠除脑外各个组织,脑组织于免疫后3 h呈阳性,各组织阳性信号随时间的推移逐渐减弱;pcDNA-GPV-VP3在不同组织中持续时间依次为肝脏>心>脾>免疫部位>肾、肠>肺>脑;pcDNA-GPV-VF3不同剂量组信号强弱和持续时间存在的总体规律依次为6μg组>3 μg组>1μg组.基因枪轰击pcDNA-GPV-VP3于免疫后能快速而广泛的分布于小鼠各个组织且持续存在达63 d.     

原位杂交检测鹅细小病毒VP3基因方法建立及肌注VP3基因疫苗在小鼠体内的动态分布

将100μgpcDNA-GPV-VP3基因疫苗肌肉注射4周龄BALB/c小鼠,并以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,建立并应用寡核苷酸探针原位杂交方法检测pcDNA-GPV-VP3在免疫小鼠各组织器官(心、肝、脾、肺、肾、肠、脑、免疫部位肌肉)的动态分布规律。结果表明,所建立的原位杂交方法具有特异性强、敏感性高、定位准确等特点,能检测约13pg的同源DNA。pcDNA-GPV-VP3基因疫苗在肌注后1h可分布到除脑以外的所有组织,肌注后3h脑呈阳性,21d除脑外的其他组织仍呈阳性,105d仍能在肌注部位检测到pcDNA-GPV-VP3;pcD-NA-GPV-VP3在小鼠各组织中持续时间为肌注部位肝脾、心肾肺、肠脑。     

荧光定量PCR检测小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在小鼠体内的动态分布

小鹅瘟是由小鹅瘟病毒(GPV)引起的一种主要侵害30日龄以内雏鹅和雏番鸭的急性、高度接触性传染病,是目前危害养鹅业的主要传染病之一,传统的小鹅瘟弱毒苗在免疫预防小鹅瘟中发挥了重要作用,但仍存在潜在毒力易返强、不易区分自然感染与疫苗抗体等不足[1].     

雏鹅小鹅瘟的防治

小鹅瘟是雏鹅的高度接触性传染病,主要侵害出壳后4~30日龄的雏鹅,本病传播快,死亡率高。据报道,1956年发生于江苏等地,随后在广西、广东等省发生,全国各养鹅地区均有发生。世界有若干国家对该病作了报道,但其将该病误认为鹅流感,有人在1961年分离到该病毒,测得其直径为20~25纳米,称做小鹅瘟病毒。匈牙利有人在1971年建议将其称做为鹅细小病毒。     

雏鹅暴发小鹅瘟的诊断与防治

1999年5月我旗从河北平泉等地先后引进草鹅鹅雏7批，17000只，分布在4个乡、8个村、102户，引进后相继发病，死亡、12900只，死亡率75．8％，该病以精神萎靡、食欲不振、鼻孔流出浆性分泌物、便稀呈灰白或淡黄绿色、传播快、发病和死亡率高为主要特征。根据流行病学调查、发病情况、临床症状、病理剖检、实验室病理检验等，最后诊断为小鹅瘟。     

鹅细小病毒VP3基因疫苗两种不同免疫方式对细胞免疫的影响

将构建的鹅细小病毒（GPV）VP3基因疫苗（pcDNA-GPV-VP3）转染鹅胚成纤维细胞（GEF），每隔12h检测VP3蛋白的表达情况，同时以不同剂量分别通过基因枪轰击和肌肉注射免疫28日龄健康雏鹅，于免疫后第3、7、14、21、28、35、49、63、77和105d采血，进行淋巴细胞增殖试验（MTT法）。结果，转染后第24h即可在GEF中检测到GPVVP3蛋白，第60h表达量达到高峰。试验组鹅外周血T淋巴细胞D490nm值在免疫后第35d达到最大。肌肉注射组和基因枪组免疫后第14～63d、第7～63d的D490nm值分别与PBS对照组差异板显著；肌肉注射组及基因枪组免疫后第21～49d的D490nm值显著高于弱毒疫苗对照组；肌肉注射组及基因枪组免疫后第14～63d的D490nm值板显著高于空质粒对照组。表明，基因枪轰击和肌肉注射pcDNA—GPV—VP3均能诱导雏鹅产生良好的细胞免疫应答。     

一起雏鹅小鹅瘟的诊治

小鹅瘟是由鹅细小病毒引起的雏鹅急性败血性传染病。雏鹅患病日龄多为2￣30天,以5￣30天多发,死亡率高达75%￣100%,1个月以上极少发病。现     

雏鹅感染小鹅瘟的诊治

20 0 1年 4月 ,贵阳清镇市某个体户鹅场饲养的 6日龄雏鹅突然发病。发病雏鹅精神沉郁、步行艰难、缩颈、食欲废绝 ,严重下痢 ,排黄白色水样混有气泡的稀便 ,严重者抽搐、瘫痪 ,随即死亡。发病病程快 ,感染率 90 %以上 ,死亡率约为30 %。根据流行病学特点、临床症状、剖解病理变化和实验诊断等综合分析 ,确诊为小鹅瘟暴发。1　临诊症状该个体户饲养的为四川白鹅 ,共 12 0 0只 ,未进行任何免疫预防措施。饲养管理较差 ,圈舍内较潮湿 ,有害气体浓度高。发病时很突然 ,发病率很高 ,发病后该养殖户曾用恩诺沙星、阿莫西林等治疗无效 ,9日龄又误诊…     

不同剂量小鹅瘟病毒VP3基因疫苗肌肉注射诱导小鼠细胞免疫

将小鹅瘟(Gosling plagne,GP)VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3)分别按每只50、100、200 μg肌肉注射免疫BALB/c小鼠,以pcDNA3.1( )和生理盐水为对照,于免疫后7、14、21、28、35、63、105 d采血用淋巴细胞转化实验(MTT法)和流式细胞仪(FACS)分别检测小鼠外周血T淋巴细胞转化效果和CD4 、CD8 T淋巴细胞动态变化.结果表明,pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠能够诱导机体产生良好的细胞免疫应答.50、100 μg pcDNA-GPV-VP3免疫后小鼠外周血T淋巴细胞对ConA刺激的反应显著或极显著高于200 μg组、空载体和生理盐水对照组,且以100 μg组最优,而200 μg组的转化效果比空载体组差;100 μg pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后所诱导的CD4 T淋巴细胞免疫功能最强,50 μg组次之;50 μg pcDNA-GPV-VP3免疫小鼠后所诱导的CD8 T淋巴细胞免疫功能最强,100 μg组次之.     

皖西白鹅催乳素基因Exon2克隆及多态性研究

以皖西白鹅为材料,用PCR-SSCP法分析了PRL基因外显子2的多态性。结果表明,PRL基因外显子2存在1个SNP位点。等位基因A频率为0.423 7,B频率为0.576 3。χ^2分析表明,基因型在群体内分布存在极显著差异（P〈0.01）。     

荧光定量PCR方法检测IBV病毒在CEK细胞中的动态变化

为揭示鸡传染性支气管炎病毒（IBV）在鸡胚肾细胞（CEK）中复制增殖的动态变化规律,通过实时荧光定量PCR（FQ-PCR）检测IBV病毒感染CEK3、6、12、24、36、48、72h后病毒增殖量的动态变化。结果显示,随着时间增加,IBV病毒增殖出现规律性变化,3～12h时IBV增殖不明显,36h时IBV开始大量复制,48h时达到高峰,但72h后有所下降。试验表明IBV在细胞内复制增殖的最佳时间在接毒后48h,其复制增殖情况与细胞状态负相关。     

棘球蚴基因工程苗免疫羊血清抗体的检测

2000年5－12月用ELISA法对青海省贵南县的棘球蚴基因工程苗免疫羊血清抗体进行了检测。结果：免疫前抗体阳性率为30．3％，保护率为3．03；一免后阳性率为40．40％，保护率为2．02％；二免后阳性率为89％，保护率为72％。说明对羔羊加强免疫后可获得痕好的群体保护力。     

维生素K_3对五龙鹅生长性能、屠宰性能及养分表观利用率的影响

本试验旨在研究饲粮中维生素K3添加水平对五龙鹅生长性能、屠宰性能及养分表观利用率的影响。试验分为2个阶段。1~4周龄阶段,选用1日龄五龙鹅360只,随机分为6个组,每个组6个重复,每个重复10只鹅。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮(维生素K3含量1.23 mg/kg),Ⅱ~Ⅵ组在基础饲粮中分别添加1、2、4、8、16 mg/kg的维生素K3。5~16周龄阶段,选用28日龄五龙鹅324只,随机分为6个组,每个组6个重复,每个重复9只鹅。A组为对照组,饲喂基础饲粮(维生素K3含量1.18 mg/kg),B~F组在基础饲粮中分别添加2、4、8、16、32 mg/kg的维生素K3。试验期16周。结果表明:1)经回归分析得出,1~4周龄阶段五龙鹅饲粮中添加4.81 mg/kg维生素K3,平均日增重最大;5~16周龄阶段饲粮中添加11.59 mg/kg维生素K3,平均日增重最大。2)与对照组相比,1~4周龄阶段,饲粮中添加4 mg/kg维生素K3能显著或极显著提高鹅的全净膛率和腹脂率(P0.05或P0.01);5~16周龄阶段,饲粮中添加8 mg/kg维生素K3能显著或极显著提高屠宰率、半净膛率、全净膛率和腿肌率(P0.05或P0.01)。3)与对照组相比,5~16周龄阶段,饲粮中添加8 mg/kg维生素K3能极显著提高钙的表观利用率(P0.01),显著提高干物质、粗蛋白质、粗脂肪、中性洗涤纤维、酸性洗涤纤维和磷的表观利用率(P0.05)。由此可见,本试验条件下,1~4周龄和5~16周龄五龙鹅饲粮中维生素K3适宜添加水平分别为4.81和11.59 mg/kg。     

流行性乙型脑炎病毒GI型毒株SD12在C57BL/6小鼠体内的动态分布研究

为了解流行性乙型脑炎病毒基因I型毒株SD12在感染C57BL/6小鼠体内的病毒分布,应用qRT-PCR 方法检测该毒株在小鼠体内各组织的动态分布情况。结果显示腹腔感染组中2 dpi仅能在心脏和脾脏检测出病毒核酸,5～7 dpi能够在心脏、肝脏、脑部、盲肠和扁桃体检测到病毒核酸。血脑屏障受损的腹腔感染组中最早2 dpi在肠系膜淋巴结中检测到病毒核酸,3 dpi基本能在各组织中检测到病毒核酸,5～7 dpi在大脑中检测到大量病毒核酸。所有对照组没有检测到病毒阳性核酸。本研究表明基因I型流行性乙型脑炎病毒感染血脑屏障受损的C57BL/6小鼠后能迅速入侵各组织脏器,主要浸染肝脏、肺脏、肾脏、盲肠和大脑。拥有完整血脑屏障的小鼠对病毒具有一定抵抗能力,病毒在各组织中的含量相对比较低。     

饲粮维生素K3添加水平对五龙鹅胫骨发育、免疫器官指数及抗氧化性能的影响

本试验旨在研究饲粮维生素K3添加水平对五龙鹅胫骨发育、免疫器官指数及抗氧化性能的影响。试验分为2个阶段,1~4周龄阶段,选用1日龄五龙鹅360只,随机分为6个组,每组6个重复,每个重复10只鹅。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮(维生素K3含量为1.23mg/kg),Ⅱ~Ⅵ组在基础饲粮中分别添加1、2、4、8和16mg/kg的维生素K3。5~16周龄阶段,选用28日龄五龙鹅288只,随机分为6个组,每组6个重复,每个重复8只鹅。Ⅰ组为对照组,饲喂基础饲粮(维生素K3含量为1.18mg/kg),Ⅱ~Ⅵ组在基础饲粮中分别添加2、4、8、16和32mg/kg的维生素K3。试验期16周。结果表明:1)与对照组相比,1~4周龄阶段,饲粮中添加4mg/kg维生素K3显著提高了胫骨粗灰分含量、骨密度、骨强度和骨重(P<0.05),极显著提高了胫骨钙、磷含量(P<0.01);5~16周龄阶段,饲粮中添加8mg/kg维生素K3极显著提高了胫骨粗灰分、钙、磷含量及骨密度、骨强度(P<0.01),骨小梁和成骨细胞发育更好。2)饲粮中添加维生素K3对胸腺指数、脾脏指数和法氏囊指数无显著影响(P>0.05)。3)与对照组相比,1~4周龄阶段,饲粮中添加4mg/kg维生素K3显著提高了血清总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性(P<0.05),显著降低了血清丙二醛(MDA)含量(P<0.05),极显著提高了血清总抗氧化能力(T-AOC)(P<0.01);5~16周龄阶段,饲粮中添加8mg/kg维生素K3显著提高了血清T-SOD和过氧化氢酶(CAT)活性(P<0.05),显著降低了血清MDA含量(P<0.05),极显著提高了血清T-AOC(P<0.01)。由此可见,1~4周龄和5~16周龄五龙鹅饲粮中维生素K3添加水平分别为4和8mg/kg时,提高了胫骨粗灰分、钙、磷含量及骨密度、骨强度,改善胫骨发育状况;提高了血清T-SOD活性和T-AOC,降低了血清MDA含量,进而提高了五龙鹅抗氧化性能。     

应用RT-PCR检测人工感染番鸭体内番鸭呼肠病毒的动态分布

应用RT-PCR技术检测番鸭呼肠病毒在人工感染番鸭体内的动态分布情况.结果显示,1日龄感染番鸭呼肠病毒MW9710株,3 d后就可以从肝、脾等组织中检出病毒RNA,直到32 d不能从组织样品中检测到病毒RNA,检出高峰期为感染后7 d～14 d.在6种不同组织中均不同程度地检测到病毒核酸,其中以肝脏组织检出率最高(68.9%),其次为脾脏(62.2%)、心(48.9%)、肾(46.7%)和胰(35.6%);肛门棉拭子的检出率最低(17.8%),显示了番鸭呼肠病毒在感染机体内的动态分布情况.     

新城疫疫苗接种孔雀后抗体水平的检测

为了解孔雀使用新城疫疫苗免疫后的效果,分别于免疫前和免疫后15、30、60、90 d采血进行血凝抑制试验(HI),对孔雀体内的抗新城疫病毒抗体进行检测.结果显示,孔雀接种新城疫疫苗后15 d平均HI抗体水平达到高峰,并可持续到免疫接种后30 d,免疫接种后90 d,抗体平均滴度已经和免疫前的抗体水平基本持平.     

日粮粗蛋白质水平对伊犁鹅产蛋规律、繁殖激素分泌及相关基因mRNA表达的影响

为探讨日粮粗蛋白质水平对伊犁鹅的产蛋规律、繁殖激素分泌及生殖轴相关基因mRNA表达量的影响,本研究随机选取200只3岁伊犁鹅（年龄、饲养管理水平一致及体重相近）,随机分为4个组,每组10个重复。对照组及公鹅饲喂鹅场自配料（粗蛋白质水平11.20%）,试验组母鹅分别饲喂粗蛋白质水平为13.86%、15.20%和16.48%的日粮,其余营养指标基本一致。预试期1周,正试期9周。结果表明：①试验期内伊犁鹅的产蛋率呈波动变化,对照组伊犁鹅的产蛋率在第1~2周逐渐上升,第4~5周出现小幅度增长,其余阶段表现为下滑趋势;各试验组伊犁鹅的产蛋率在第1~2、4~5周出现较大幅度增长,且在第5周时达到产蛋高峰,此后逐渐下滑。15.20%粗蛋白质组伊犁鹅就巢率显著低于11.20%、13.86%粗蛋白质组。②与对照组相比,13.86%粗蛋白质组血清促性腺激素释放激素（GnRH）浓度极显著升高（P<0.01）,且血清雌二醇（E₂）、促黄体素（LH）浓度均显著升高（P<0.05）;15.20%、16.48%粗蛋白质组血清GnRH、E₂及LH浓度均极显著升高（P<0.01）,且血清促卵泡素（FSH）浓度显著升高（P<0.05）。各试验组血清催乳素（PRL）浓度均显著降低（P<0.05）。③与对照组相比,15.20%粗蛋白质组下丘脑GnRH、LHR基因表达量显著上调（P<0.05）,PRL、PRLR基因表达量显著下调（P<0.05）;垂体中LH基因表达量显著上调（P<0.05）;卵巢中LH与ESR2基因表达量显著或极显著上调（P<0.05,P<0.01）。综上所述,基于日粮粗蛋白质水平对伊犁鹅的产蛋率、就巢率、血清生殖激素浓度及生殖轴相关基因mRNA相对表达量影响的综合评估,建议产蛋期伊犁鹅日粮粗蛋白质水平为15.20%。