雌激素与前列腺素受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白合成和分泌的影响

旨在研究雌激素与前列腺素受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白合成与分泌的调控作用。用荧光定量PCR检测了奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白mRNA的表达;采用Western blot检测了奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达。同时,加入雌激素(10~(-10)mol/L)和butaprost(PE受体激动剂,10~(-6)mol/L),雌激素(10~(-10)mol/L)和fluprostenol(PF受体激动剂,10-6mol/L),分别观察对输卵管蛋白表达的影响。结果表明:雌激素与PGE_2受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的分泌调控具有协同作用;雌激素与PGF_(2α)受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的分泌调控具有间接拮抗作用。     

前列腺素F_(2α)受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌细胞因子表达的影响

为验证前列腺素类化合物对输卵管分泌细胞因子有调控作用,以前列腺素F2α受体激动剂fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌细胞因子TGF-α、TGF-β3、FGF-2、LIF和GM-CSF的调控机制为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术检测吲哚美辛(10-5 mol/L)作用不同时间(2,4,8,16,24,48h)对奶牛输卵管上皮细胞TGF-α、TGF-β3、FGF-2、LIF和GM-CSF mRNA表达的影响。结果显示,fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中TGF-α和FGF-2mRNA有正调控的作用,均在4h时mRNA的表达量达到峰值;fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中LIF和GMCSF mRNA有双重调控作用,均是先短暂显著促进(P<0.05)其mRNA的表达,之后表现为极显著抑制(P<0.01),并均在2h时达到表达量峰值;fluprostenol对奶牛输卵管上皮细胞中TGF-β3mRNA起到正调控作用,作用48h时与空白对照组相比极显著升高(P<0.01),达到峰值。     

EP2受体和FP受体对奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的影响

采用免疫荧光法,使用角蛋白鉴定奶牛输卵管上皮细胞;采用荧光定量PCR法检测奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白mRNA的表达;采用Wsetern blot法检测了奶牛输卵管上皮细胞输卵管蛋白的表达。结果显示:加入butaprost(EP2受体激动剂,10~(-6) mol/L)能促进输卵管蛋白的表达,加入fluprostenol(FP受体激动剂,10~(-6) mol/L)能抑制输卵管蛋白的表达。结果表明:PGE2在奶牛输卵管上通过激活EP2受体上调输卵管蛋白的表达,PGF2α通过激活FP受体下调输卵管蛋白的表达。     

电针对家兔输卵管平滑肌电活动的影响

近年来,对输卵管生理、药理、生化、形态及临床进行了很多研究工作,对离体和在体输卵管平滑肌自发收缩运动也有报道。但关于输卵管平滑肌电活动尚未见报道。我们的工作表明:家兔输卵管平滑肌电活动与发情周期相关,可反映输卵管活动强弱和功能状态。电针穴位防治疾病的研究较多,对针刺效应机制的研究也比较深入。本实验目的旨在以输卵管平滑肌电活动为指标,观察电针三阴交、催情穴对家兔输卵     

中华鳖输卵管雄激素受体的分布

在观测了中华鳖输卵管形态特征的基础上,应用免疫组织化学反应技术研究雄激素受体(AR)在中华鳖输卵管中的分布特点。结果显示,中华鳖输卵管组织存在一定的季节性变化,生殖季节输卵管上皮增厚,腺体肥大,分泌活动增强;而在非繁殖季节,上皮相对较薄,腺体处于收缩状态。AR免疫阳性细胞在输卵管蛋白分泌部、峡部、子宫部各段均有分布。阳性AR分布于输卵管黏膜上皮细胞游离面(腔面)、固有膜腺体以及储精小管上皮中。生殖季节AR反应强阳性,而在非繁殖季节AR反应较弱。中华鳖精子储存在输卵管的蛋白分泌部后部到子宫部,AR在这些区段的分布及其季节性变化的结果提示,雄激素受体可能参与输卵管精子储存部位特殊微环境的稳定,进而与精子储存有关。     

传染性支气管炎病毒感染对蛋雏鸡输卵管雌激素受体及孕激素受体表达的影响

以不同传染性支气管炎病毒（肾型IBV-河北分离株与呼吸型IBV-M41）分别感染蛋雏鸡,通过测定输卵管蛋白分泌部及子宫雌激素受体（Estrogen receptor,ER）和孕激素受体（Progesterone receptor,PR）的表达水平,来探讨IBV早期感染（10d）对抑制蛋鸡输卵管发育的作用机制。结果显示,IBV感染降低子宫和蛋白分泌部ER mR-NA、PR mRNA的表达水平,即致子宫ER mRNA和PR mRNA的表达低于检测水平;蛋白分泌部ER mRNA和PR mRNA的表达水平显著降低（P〈0.01）,且M41的作用幅度较肾型IBV更为显著（P〈0.01）。结果表明,IBV可通过降低ER和PR的表达水平,抑制输卵管对雌激素的应答能力而影响输卵管的发育。     

乙酸及其钠盐对奶牛离体真胃平滑肌收缩的影响

随着奶牛集约化饲养规模的扩大和产奶量的提高,奶牛真胃变位的发病率逐渐增多。大多数研究者认为,真胃中挥发性脂肪酸(VFA)能明显抑制真胃平滑肌的收缩,导致真胃弛缓。VFA中对动物体代谢作用最为重要的有乙酸、丙酸和丁酸,其中乙酸含量最高,占VFA总量的70%～75%。试验进行了不同浓度的乙酸及其钠盐对真胃平滑肌收缩影响的研究,表明8～20mmol/L和21～35mmol/L的乙酸能显著抑制真胃平滑肌的收缩强度(P0.01);40～50mmol/L乙酸能增大真胃平滑肌的收缩强度(P0.05);60～75mmol/L的乙酸和2～5mmol/L乙酸钠对离体真胃平滑肌的收缩均没有显著影响(P0.05)。     

雌激素对奶牛输卵管上皮细胞中mPGES-1表达的影响

观察雌激素(β-雌二醇)对奶牛输卵管上皮细胞膜结合型前列腺素E2合酶-1(mPGES-1)表达的影响,并探讨β-雌二醇对奶牛输卵管上皮细胞合成分泌PGs调控的作用机制。采用胰酶消化法及机械法分离培养奶牛输卵管上皮细胞,应用荧光定量RT-PCR技术检测β-雌二醇对奶牛输卵管上皮细胞mPGES-1 mRNA表达的影响,应用Incell Western技术检测β-雌二醇对奶牛输卵管上皮细胞mPGES-1蛋白表达的影响。结果显示,与空白对照相比,β-雌二醇能够显著和极显著地促进奶牛输卵管上皮细胞中mPGES-1基因和蛋白的表达。本试验结果表明,β-雌二醇能够对奶牛输卵管上皮细胞中mPGES-1产生调节作用。     

牛输卵管上皮对小鼠胚胎发育的影响

模拟发情期（0～6 d）母牛外周血雌激素和孕酮浓度的变化，添加17β-雌二醇和孕酮至TCM-199中，体外培养间情期牛输卵管上皮细胞（BOECs），同时观察了BOECs分泌蛋白（BOEP）、发情期母牛输卵管冲洗蛋白（BOP）和小牛输卵管冲洗蛋白（COP）对小鼠胚胎发育的影响。结果表明：①类固醇激素可以调节和启动体外培养的间情期牛输卵管上皮细胞的分泌活动；②BOEP比BOP和COP能极显著地促进胚胎的分裂和发育（Ｐ<0.001）；③与对照组（未添加外源蛋白质，只添加胎牛血清）相比，BOEP的囊胚形成率极显著低于对照组（Ｐ<0.01），可能是缺乏某些分子量低于10 kD蛋白因子的协同作用，同时30～56kD分泌蛋白的存在，也可能参与了抑制和阻碍胚胎分裂和发育的过程。     

温度变化对家兔离体小肠平滑肌运动的影响

为了探究温度变化对动物消化道平滑肌运动的影响,本试验用生物信号处理系统测定了浴槽不同温度（39→32℃、32→39℃、39→42℃和42→39℃）对家兔离体小肠各段（十二指肠、空肠、回肠）平滑肌运动的影响。结果显示,当温度在39和32℃之间变化时家兔离体十二指肠和空肠运动的收缩频率同温度变化呈正相关,而十二指肠收缩幅度和收缩张力同温度变化呈负相关,但回肠仅表现在收缩频率同温度变化呈正相关;当温度从39℃升高到42℃时,十二指肠的收缩频率、收缩幅度和收缩张力变化与温度在39和32℃之间变化情况相同,但是空肠和回肠的规律性较差;当温度从42℃高温降低到39℃时,3段离体小肠运动不能恢复到39℃时的运动状态,家兔小肠离体试验浴槽最适温度为37℃。本研究结果提示,在进行动物小肠离体试验时应注意浴槽温度对小肠运动的影响,同时本研究结果也为探究由于环境温度变化导致的动物胃肠运动异常的机理提供参考。     

Effects of Temperature Changes on the Contractility of Isolated Small Intestinal Smooth Muscle in Rabbits

In order to explore the influence of temperature changes on animal digestive tract smooth muscle,the contractility of isolated rabbit small intestine (duodenum,jejunum and ileum) were measured at different temperatures (39→32℃,32→39℃,39→42℃ and 42→39℃) using the biological signal processing system.The results showed that the contraction frequency of duodenum and jejunum was positively correlated with temperature changes between 39 and 32℃,while the amplitude and tension of duodenum were negatively correlated with temperature changes.Only the contraction frequency of ileum was positively correlated with temperature changes between 39 and 32℃.Changes of frequency,amplitude and tension of duodenum between 39 and 42℃ were similar with those changes between 39 and 32℃.However,the contraction of jejunum and ileum was irregular.When the temperature was decreased from 42 to 39℃,the contraction of small intestine could not return to the condition in 39℃.The results suggested that the optimal bath temperature was 37℃ in contraction test of rabbit small intestine in vitro,and the present results could be referenced to explore the disorder of gastrointestinal movement due to the change of environment temperature in animals.     

牛输卵管上皮细胞培养、纯化及其生物学特性的研究

对牛输卵管上皮细胞进行了原代及传代体外纯化培养,并对输卵管上皮细胞的生物学特性通过普通光镜、扫描电镜、免疫组化、流式细胞技术进行观察、鉴定和检测等相关研究,建立了一种稳定的制备纯度较高的牛输卵管上皮细胞体外培养方法,为进一步研究胚胎共培养和核移植供体细胞奠定了基础。     

几种化学药物对家兔十二指肠平滑肌的作用

为了观察各种化学药物对家兔离体十二指肠的作用机制 ,采用常规离体灌流小肠平滑肌标本舒缩运动的实验方法 ,记录用药前后肠段平滑肌自发收缩活动的特点及其变化规律。结果表明 :不同浓度的肾上腺素、盐酸和氢氧化钠对十二指肠平滑肌自发收缩活动有抑制效应 ,其幅值变化与用药前比较有显著性差异(P <0 .0 1 ) ,呈剂量依赖性关系 ;而不同浓度的乙酰胆碱、氯化钙与磷酸组织胺对十二指肠平滑肌收缩幅度有增强效应 (P <0 .0 1 )。     

家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养

本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L雌二醇(E2)、7.14nmol/L孕酮(P4)的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度。结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长。本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20?S、100μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L E2、7.14 nmol/L P4的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃5%CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内膜细胞和平滑肌细胞的生长。     

小鼠输卵管上皮细胞的原代培养及纯化方法研究

建立小鼠输卵管上皮细胞原代培养及纯化方法.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用组织块培养法和酶消化法.酶消化法于37℃分为4个处理组进行.处理1以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA消化5、10、20 min;处理2以0.5 g/L胰酶+0.08 g/L EDTA消化35、50、75 min;处理3以0.3 g/L的Ⅰ型胶原酶消化60、90、240 min;处理4以2.5 g/L胰酶+0.4 g/L EDTA和0.3 g/L Ⅰ型胶原酶(1∶2)消化60 min,150 min.原代细胞纯化采用差速贴壁和反复差速贴壁法.传代采用胰酶两步消化法进一步纯化输卵管上皮细胞.组织块法原代培养成纤维细胞生长优势明显,传代纯化细胞效果不佳.用酶消化法原代培养时,处理1效果不理想;处理2采用3个消化时间时均取得比较理想的结果;处理3消化240 min时结果较好;处理4消化150 min效果较好.原代细胞纯化,反复差速贴壁得到的上皮细胞较纯,进一步传代纯化细胞取得了理想的结果.小鼠输卵管上皮细胞原代培养采用酶消化法结合反复差速贴壁分离纯化细胞,传代采用两步消化法,可以成功地进行小鼠输卵管上皮细胞的分离纯化培养.     

中脑导水管周围灰质(PAG)对人工发情家兔子宫平滑肌电活动的影响

在急性实验条件下,以爆发波(BW)的频率、波宽、峰电位数、峰电位频率、幅值及单波的幅值、频率为指标,观察电刺激PAG外侧区或背侧区及外侧区注射雌激素对人工发情家兔子宫平滑肌电活动的影响。结果:1.刺激PAG外侧区后,子宫颈、体、角BW频率和峰电位频率增加非常显著,岭电位数增加显著;子宫颈、体BW波宽,颈、角的幅值增加显著。2.电刺激PAG背侧区后,子宫平滑肌电活动无明显变化。3.向PAG外侧区注入雌激素后,子宫颈、休、角平滑肌BW频率和峰电位频率减少非常显著。以上结果表明:PAG外侧区参与子宫活动的调节,将侧区对此无作用。雌激素在PAG外侧区对发情家兔子宫平滑肌电活动有负反馈调节作用。     

应激抑制妊娠母兔子宫平滑肌收缩时间的初探

催产素能使妊娠 1 5d后的母兔子宫出现收缩反应。但在妊娠母兔受到强应激刺激后立即注射催产素子宫不发生收缩。说明当应激达到一定强度时 ,母兔因紧张所分泌的肾上腺素足以封闭子宫平滑肌上的催产素受体 ,从而使催产素在一定的时间内不能使子宫收缩     

血根碱对大鼠离体子宫平滑肌收缩的影响及其机制研究

试验旨在研究血根碱对大鼠离体子宫平滑肌活动的影响。分离8周龄SD雌性未孕大鼠子宫平滑肌,通过BL-420F生物信号采集系统记录子宫平滑肌收缩频率和收缩幅度,计算子宫平滑肌活力。以硫酸阿托品、盐酸普萘洛尔、盐酸苯海拉明及盐酸雷尼替丁为阻断剂,观察血根碱对子宫平滑肌M、β、H₁、H₂受体的关系,探讨血根碱对子宫平滑肌的作用机制。结果显示,血根碱组和元胡止痛片组对缩宫素所致大鼠离体子宫平滑肌收缩频率、收缩幅度和活力均有显著的抑制作用（P<0.05）;应用H₁受体阻断剂苯海拉明和H₂受体阻断剂雷尼替丁后,血根碱对子宫平滑肌抑制作用基本被阻断,而应用M受体阻断剂阿托品,β受体阻断剂普萘洛尔后,血根碱对子宫平滑肌收缩仍具有显著的抑制作用（P<0.05）。综上所述,血根碱对大鼠子宫平滑肌活力具有显著的抑制作用,可能是通过抑制H₁、H₂受体实现,与M、β受体无关。