鸡回肠中T淋巴细胞及其亚群发育的试验

为探寻鸡回肠中T淋巴细胞及其亚群的发育规律,本试验通过免疫组织化学方法,应用CD3、CD4和CD8单克隆抗体研究鸡回肠中T淋巴细胞及其亚群出现、迁移、定位分布及数量变化过程.结果显示,CD3+、CD8+T淋巴细胞最初于18胚龄时出现,CD4+T淋巴细胞于出壳后1日龄时出现.在定位分布上,CD3+细胞在黏膜上皮内以及固有层中均匀分布,CD4+细胞以固有层中的分布为主,黏膜上皮内的分布较少.CD8+细胞最初主要分布在黏膜固有层中;随后,CD8+细胞逐渐向上皮内迁移;最终,黏膜上皮内出现广泛的CD8+细胞浸润.在数量变化上,CD3+、CD4+及CD8+整体呈逐渐增加趋势,第2周时阳性细胞数量稍有下降,21日龄时显著增加到达较高水平后保持稳定.结果表明,鸡出壳后,回肠的细胞免疫功能逐渐增强,并在21日龄时到达成熟水平.     

鸡直肠中T淋巴细胞的发育研究

通过免疫组织化学方法,应用CD3、CD4和CD8单克隆抗体研究了CD3＋、CD4＋和CD8＋B淋巴细胞在鸡直肠中的出现、迁移、组织定位分布以及数量变化规律等一系列发育过程。T淋巴细胞均在雏鸡出壳后7日龄时出现。在定位分布变化上,出壳后1～4日龄时,T淋巴细胞数量没有明显增加,7日龄时,CD4＋大量分布在肠绒毛皮下固有层中,少量分布在黏膜肌层和黏膜固有层中,CD3＋分散分布在黏膜肌层和黏膜固有层中,极少数的CD8＋出现在黏膜肌层中。随着日龄的增长,T淋巴细胞的数量持续增多,多数位于黏膜固有层,雏鸡生长至21日龄时,T淋巴细胞的数量维持稳定,其中数量以CD4＋细胞最多,CD3＋细胞次之,CD8＋细胞最少。鸡出壳后初期直肠的体液免疫逐渐增强,并在21日龄时达到成熟水平。     

鸡脾脏中T淋巴细胞及其亚群的发育

利用免疫组化法结合计算机图像分析技术研究鸡不同生长发育阶段T淋巴细胞及其亚群在脾脏中的发育过程。研究发现,CD3+和CD8+T淋巴细胞最早出现在18日龄鸡胚,CD4+细胞出现在20日龄鸡胚。随着日龄增长,CD3+、CD4+和CD8+T淋巴细胞的数量均呈上升趋势,在21日龄雏鸡脾脏中达到稳定。CD3+和CD8+细胞在动脉周围淋巴鞘和红髓中大量分布,而CD4+细胞主要分布在动脉周围淋巴鞘中。脾小体中也存在CD4+细胞,但不存在CD8+细胞。CD4+细胞数量始终少于CD8+细胞,两者的比值基本维持在0.3～0.5。结果表明,鸡出壳后初期,脾脏的细胞免疫功能迅速增强,并在21日龄时达到成熟水平。     

糖萜素对固始鸡免疫器官发育及T淋巴细胞亚群的影响

应用流式细胞仪技术检测固始鸡CD3⁺、CD4⁺和CD8⁺ T淋巴细胞含量来研究添加不同剂量的糖萜素对固始鸡免疫器官及T淋巴细胞亚群的影响。结果表明,500、700 mg/kg糖萜素组的免疫器官指数及CD4⁺／CD8⁺比值显著(P<0.05)高于其余各组。因此,一定剂量的糖萜素可以促进固始鸡免疫器官发育,提高T淋巴细胞亚群的水平。     

固始鸡免疫器官内T淋巴细胞亚群动态变化

应用流式细胞仪结合免疫荧光抗体技术对固始鸡和固始鸡胚胎免疫器官内T淋巴细胞亚群的动态变化和发育分化规律进行了研究.结果发现,(1)胚胎时期,胸腺内T淋巴细胞发育分化低,表现为成熟的T淋巴细胞(CD3~+)和不成熟的胸腺细胞均较少;出壳后,固始鸡胸腺内成熟T淋巴细胞增多,占胸腺细胞的30%左右,但大部分仍是未成熟的胸腺细胞.(2)脾脏内T淋巴细胞为成熟的T淋巴细胞(CD3~+),占淋巴细胞的60%左右.胚胎时期脾脏内CD3~+水平低,出壳后2周已达脾脏内正常水平(60%左右).(3)法氏囊内有少量的成熟T淋巴细胞(10%左右).结果表明,T淋巴细胞在固始鸡胸腺内增殖分化和成熟,脾脏和法氏囊内的成熟T淋巴细胞均来源于胸腺.     

雏鸡T淋巴细胞及其亚群的变化规律

白细胞分化抗原是白细胞在分化成熟为不同谱系和分化不同阶段以及活化过程中 ,出现或消失的细胞表面标记 [1]。鸡的 T淋巴细胞表面分化抗原的研究近年来进展较快 ,证明与哺乳动物的 T淋巴细胞表面分化抗原有许多相似之处 ,尤其以 CD3,CD4,CD8为突出。 CD3分子表达于所有成熟 T细胞表面 ,可与 TCR( T细胞抗原识别受体 )分子以非共价结合形成一个 TCR- CD3复合物 ,其中 TCR是识别异种抗原和自身 MHC分子多态性决定簇的受体 ,而 CD3分子具有稳定 TCR结构和传递活化信号的作用 [2 ] ,CD3是鉴定 T细胞的重要标记。T细胞可分为辅助…     

父母代固始鸡十二指肠的发育形态学观察

应用大体解剖学和组织切片技术,对0～20周龄父母代固始鸡的十二指肠进行了发育形态学研究.结果表明,十二指肠的长度、体质量、周长和肠绒毛的长度、肠腺隐窝的深度、肠腺宽度及各肌层厚度等指标随周龄的增加而增长;十二指肠相对生长率、肠腺密度和十二指肠指数则呈下降趋势;肠绒毛有分支现象;淋巴组织的发育比较缓慢,到6周龄后才出现有淋巴小结;通过建立Logistic方程模型模拟十二指肠重量的生长变化,得到其生长方程:♂:Y=9.72/(1 15.3le-0.33t),♀:Y=8.29/(1 12.50e-0.31t).     

鸡T淋巴细胞和B淋巴细胞分离纯化方法的建立

将鸡胸腺和腔上囊淋巴组织剪碎后与PBS磷酸盐缓冲液混合，通过密度梯度离心和尼龙棉柱过滤对T、B淋巴细胞进行了分离纯化。纯化的T、B淋巴细胞以FITC标记的鼠抗鸡CD4单抗，RPE标记的鼠抗鸡CD8单抗，FITC标记的鼠抗鸡Bu-1单抗染色，用流式细胞仪分类检测其纯度，用台盼蓝排斥试验检测T、B淋巴细胞的活力。结果表明，以本研究建立的方法分离到的T、B淋巴细胞纯度较高（均达90％以上），细胞活力强，与流式细胞仪分选的效果相当，且经济简便。     

The Localization Changes of CD4+ and CD8+ T Lymphocytes in Chicken Lung at Different Ages

The aim of this study was to investigate the immune state of chicken lung in different periods.With lung tissue of Hy-line White chicken at different ages,the distribution and quantity changes of CD4⁺ and CD8⁺T lymphocytes in lung were studied using immunohistochemistry staining.The results showed that CD8⁺T lymphocytes appeared firstly in embryonic at 18 d,while CD4⁺T lymphocytes appeared at 1-day-old chicken.At 4-day-old,there were aggregates of lymphocytes at the junction of the primary and secondary bronchi,which formed obvious broncho-associated lymphoid tissue (BALT).CD4⁺T lymphocytes of each age mainly occupied the central area of BALT,while CD8⁺T lymphocytes mainly surrounded the periphery.Since 56 days old,CD8⁺T lymphocytes are distributed in the inner wall of third-order bronchial airway,atrial septum,gas exchange area and interlobular connective tissue,and are distributed throughout the lung.In terms of quantity change,with the growth of daily age,the number of CD4⁺T lymphocytes and CD8⁺T lymphocytes gradually increased,and the number of CD4⁺ T lymphocytes was more than that of CD8⁺ T lymphocytes before 35 days of age,while the number of CD8⁺ T lymphocytes was significantly more than that of CD4⁺ T lymphocytes at the same age thereafter.The results showed that the distribution and number of CD4⁺ and CD8⁺T lymphocytes in the lungs of chickens were correlated with the age,and the changes could reflect that the lungs before the age of 35 days were dominated by humoral immunity,while the lungs after that tended to be cellular immunity.     

镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的研究

应用片段化DNA定量分析法和碱性单细胞凝胶电泳法，检测了10／μmol／L镉对体外不同时间培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤的情况，结果表明：10μmol／L的镉能够明显损伤鸡脾脏淋巴细胞DNA，并且呈现时间效应。提示镉致淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。     

鸡T淋巴细胞IL－2的体外诱生及活性检测

经Ｌ１６（４５）正交试验选择，并经实验验证，鸡脾脏Ｔ淋巴细胞白细胞介素２（ＩＬ－２）体外诱生和活性检测的最优水平组合及适宜条件为２．５μｇ／ｍＬ伴刀豆蛋白Ａ（ＣｏｎＡ）、ＩＬ－２体外诱生时间２０ｈ、１×１０７／ｍＬ淋巴细胞、１０％小牛血清、靶细胞培养时间４８ｈ、４×１０６／ｍＬ靶细胞、靶细胞接触时间３６ｈ、５ｍｇ／ｍＬＭＴＴ、ＭＴＴ加入时间３ｈ和甲溶解时间２ｈ；胸腺Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２体外诱生和活性检测的最优水平组合及适宜条件为５μｇ／ｍＬＣｏｎＡ、ＩＬ－２体外诱生时间４８ｈ，余同脾脏Ｔ淋巴细胞ＩＬ－２体外诱生及活性检测。比较试验表明，ＭＴＴ比色分析法和３Ｈ－胸腺嘧啶核苷（３Ｈ－ＴｄＲ）掺入法有显著的直线回归关系。     

应用碱性单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测镉致鸡脾淋巴细胞DNA的损伤效应

应用碱性单细胞凝胶电泳技术（single cell gel electrophoresis，SCGE）]检测了0～30μmol／L CdCl2对体外培养的鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤效应。结果表明，镉浓度在0～30μmol／L范围内，随着镉浓度的增加，对鸡脾脏淋巴细胞DNA的损伤作用逐渐增强，呈现显著的剂量效应（r=0．983，P=0．004）。结果提示，镉致鸡脾脏淋巴细胞DNA损伤是镉对禽类免疫毒性的重要机制之一。     

镉对体外培养鸡脾淋巴细胞膜物理特性的影响

为了探讨镉对鸡脾淋巴细胞膜物理特性的影响,以终浓度为10 μmol/L CdCl2对体外培养淋巴细胞进行染毒,培养12、24、36、48、72 h后,收集细胞上清液,提取细胞膜,分别检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性、淋巴细胞膜偏振度与微黏度和唾液酸(SA)含量.结果显示,淋巴细胞内的LDH漏出率增加(P＜0.01),淋巴细胞膜荧光偏振度和微黏度增加(P＜0.01或P＜0.05),SA含量降低(P＜0.01).研究结果表明,镉能改变淋巴细胞膜通透性,降低淋巴细胞膜的流动性.     

黏膜免疫和半胱胺对十二指肠生长抑素mRNA表达的影响

应用鸡新城疫弱毒苗单一口服和分别灌喂两种剂量半胱胺后再口服鸡新城疫弱毒苗,进行消化道黏膜免疫肉鸡,通过RT-PCR方法检测十二指肠中SS基因表达。结果表明,首免第4周后各个试验组SSmRNA的表达无显著差异。首免第5周后两种剂量半胱胺结合新城疫免疫组SSmRNA的表达比对照组显著增加(P<0.05),单一新城疫免疫组SSmRNA的表达虽然比对照组增加,但并不显著。提示黏膜免疫后淋巴细胞产生的细胞因子可刺激十二指肠SSmRNA的表达,半胱胺可增加十二指肠SSmRNA的表达。肠黏膜免疫可影响动物体内收稿日期:2002-06-17课题来源:国家自然科技基金(30070564)作者简介:杨　倩(1962-),女,南京农业大学动物医学院副教授,博士,主要从事动物免疫神经内分泌研究工作。神经内分泌系统中SSmRNA的表达。     

堆型艾美耳球虫子孢子和鸡十二指肠上皮细胞的共同抗原的研究

以抗堆型艾美耳球虫子孢子的单抗EASP-3G3作为工具,对鸡各段消化道上皮细胞切片和子孢子进行免疫组化染色,并利用蛋白质印迹技术来检测单抗所识别子孢子可溶性抗原的分子量,来确定子孢子和十二指肠上皮细胞之间是否存在共同抗原。结果表明单抗只与十二指肠上皮细胞发生反应,而与其他肠段无染色反应。而且单抗所识别的可溶性抗原分子量为35~48 ku。抗子孢子的单抗同时与十二指肠上皮细胞和子孢子反应,而不与其他肠段反应,证明堆型艾美耳球虫寄生的位点特异性与十二指肠上皮细胞表面的某种抗原分子有内在的关系。     

贫血病雏鸡Lasota疫苗免疫后免疫器官组织T细胞亚群变化

应用微波间接酶标抗体染色法(WIEAS)对鸡贫血病毒(CAV)感染雏鸡Lasota疫苗免疫后免疫器官组织的CD4^ 、CD8^ T细胞数量及CD4^-与CD8^ T细胞比值的变化进行了动态研究，结果发现，CAV感染1日龄雏鸡Lasota疫苗免疫后，其胸腺、脾脏和盲肠扁桃体的CD4^ 、CD8^ T细胞数量及CD4^ 与CD8^ T细胞比值均程度不同地低于CAV未感染Lasota疫苗免疫对照雏鸡。表明，CAV感染雏鸡免疫器官组织对Lasota疫苗的细胞免疫应答机能降低或减弱。     

流式细胞术在活化T淋巴细胞检测中的应用

免疫细胞的活化和增殖是免疫应答产生的一种标志.静止T淋巴细胞经过抗原刺激活化后,表现出一系列的特征,如细胞膜表面活化分子的表达、细胞分裂和产生细胞因子等.近年来,已有利用流式细胞术(FCM)通过检测免疫细胞活化后的特性,来分析抗原特异性免疫应答及其应答规律的报道.论文分别从几个不同的角度综述了FCM在活化T淋巴细胞检测中的应用.