从感染叶片中提取柑橘衰退病毒总核酸3种方法的比较

用分光光度计检测微量抽提法、 Trizol法和氯化锂法提取的CTV总核酸, 再用RT-PCR和实时RT-PCR法检测, 结果表明: 3种抽提方法均可以获得CTV的总核酸, 其中Trizol法获得的总核酸质量最好, 平均浓度为329.352 1(μg/mL), A260/A280平均值为1.805 2; 进行RT-PCR反应后电泳条带亮度最强; 实时RT-PCR显示其Ct值最小. 氯化锂法与微量抽提法获得的总核酸质量差异不大, 但是微量抽提法更为简便快捷.     

不同提取方法对检测单头白背飞虱携带SRBSDV灵敏度的影响

为找到较好的白背飞虱RNA提取方法用于大规模带毒率检测、SRBSDV的早期监测及科学防控提供参考,采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA,进行检测比较其提取速率和稳定性。结果表明:采用Trizol试剂盒法、改良Trizol法、改良CTAB-LiCl法、改良异硫氰酸胍法和NaOH粗提法5种方法提取单头白背飞虱的总RNA浓度分别为113.08ng/μL、222.43ng/μL、57.68ng/μL、102.16ng/μL和31.06ng/μL,改良Trizol法和改良CTAB-LiCl法提取的RNA纯度较高。5种方法提取的RNA均能用于SRBSDV的检测,其中改良Trizol法RT-PCR扩增的灵敏度最高,稀释梯度为10-4,NaOH粗提法灵敏度最差,稀释梯度仅为10-1,其余3种均能达到10-3。改良Trizol法提取的虫体RNA较完整且扩增效果稳定,但试剂价格较昂贵,不适合做大量样品提取;NaOH粗提法的灵敏度虽相对较低,但由于操作简便,经济快速,更适合用于大量样品的检测。     

番茄叶片小RNA提取方法的优化

以番茄叶片为材料提取小RNA,比较分析UNlQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒+LiCl法,常规Tr-izol+LiCl法和改进的Trizol法+LiCl法的提取效果。结果表明,改进的Trizol+LiCl法能从番茄叶片中提取高质量的小RNA,总RNA琼脂糖凝胶电泳条带完整清晰,核酸蛋白测定仪显示RNA的浓度为1 026.8ng/μL,A260/A280比值为2.00;A260/A230比值为2.31。15%聚丙烯酰胺-7mol/L尿素凝胶电泳显示小RNA带型区域清晰。用该方法提取的高质量的番茄叶片小RNA符合RT-PCR,Northern blot等分子生物学试验的标准。     

CTAB法用于染病烟草植株中烟草丛顶病毒RNA的提取

 CTAB法是一种广泛用于从染病植物中提取总核酸,并用于后续相关病原物PCR检测的核酸提取法,已普遍运用于DNA病毒、植原体、细菌、真菌侵染植物的总DNA提取和病原检测。本文尝试将CTAB法用于一种由RNA病毒（烟草丛顶病毒）引起的烟草丛顶病染病组织总核酸的提取,以总核酸进行烟草丛顶病毒的RT-PCR检测,并与常规RNA病毒核酸提取法——Trizol法作比较。结果表明CTAB法和Trizol法提取的核酸用于烟草丛顶病毒RT-PCR检测时,均能扩增到目的条带,检测结果一致。在对复合侵染材料进行检测时发现,CTAB法提取的染病植物组织总核酸既包括DNA也包含RNA,有利于对DNA和RNA病原物同时进行检测;CTAB法所用试剂较Trizol法便宜,毒性小,且提取的核酸量较多、保存时间较长。因此CTAB法是一种高效、简便、经济的从烟草丛顶病染病组织中提取烟草丛顶病毒RNA的方法。     

玫瑰花柱总RNA提取方法的比较研究

为获得一种玫瑰(Rosa rugosa)花柱总RNA提取的理想方法,为后续相关基因工程研究奠定基础。以玫瑰花柱为材料,用核酸蛋白仪和凝胶电泳法比较了改良CTAB 法、Trizol 法以及EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的玫瑰花柱总RNA的纯度、浓度及完整性,利用RT-PCR反应检测了其反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明：改良CTAB法提取的总RNA纯度、浓度较高,但存在严重降解现象;Trizol 法提取的总RNA纯度和浓度极低;EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法提取的总RNA纯度和浓度较高,条带清晰,且28S 条带亮度是18S 条带亮度的2 倍,将其反转录获得的cDNA用于RT-PCR,能够扩增出清晰的特异性条带。综上所述：EASY spin Plus 植物RNA提取试剂盒法从玫瑰花柱中提取的RNA质量最好,完全能够满足后续的玫瑰分子生物学研究要求。     

改良Trizol法从灌浆期小麦胚乳中提取高质量总RNA的研究

[目的]在传统的Trizol法基础上进行改良,探索一种适合于灌浆期小麦胚乳高质量总RNA提取的方法.[方法]用改良的Trizol法从花后10、15、20 d的小麦胚乳中提取总RNA,经核酸分析仪及电泳检测其质量,进行RT-PCR扩增小麦SBEⅡa基因片段并测序比对.[结果]OD260/OD280:1.95～1.98,OD260/OD230:2.0～2.25,产率:544.00～645.46 μg/g,表明提取的总RNA浓度和纯度均达到要求.测序及Blast比对表明成功克隆小麦SBEⅡa基因片段.[结论]改良后的Trizol法可以高效的从灌浆期小麦胚乳中提取高质量的总RNA.     

辣椒叶片总RNA快速提取

采用改良的Trizol法对辣椒(Capsicum annuum)叶片的总RNA进行了提取,利用琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、RT-PCR进行RNA纯度、完整性检测.结果表明,Trizol法提取可获得较高质量的辣椒叶片总RNA,能满足后续的研究需要.     

发菜总RNA提取方法的比较与优化

发菜是一种具有丰富胶质鞘、色素、多糖的陆生蓝藻。采用Omega RNA提取试剂盒、Trizol RNA提取法、天根试剂盒及优化后的Omega RNA提取试剂盒、Trizol法、天根试剂盒法从发菜藻体中提取RNA,并用核酸浓度测定仪和琼脂糖凝胶电泳检测提取的总RNA质量。结果表明,优化前后的Trizol法均无法提取到发菜总RNA;利用Omega试剂盒获得发菜总RNA已降解;利用天根试剂盒可获得发菜总RNA,进一步改进和优化天根试剂盒的提取程序,获得的发菜总RNA 23S、16S条带清晰,D260 nm/D280 nm、D260 nm/D230 nm分别为2.06、2.08。研究结果为深入开展发菜转录组研究奠定了基础。     

鼠尾草属植物的DNA及RNA高效提取方法

以鼠尾草属植物为原料,采用CTAB法提取DNA,并在TSB法及氯化锂沉淀法的基础上改进并建立了一种高效高质量提取RNA的方法。用核酸测定仪测浓度和琼脂糖凝胶电泳检测质量,均获得了高浓度和高质量的DNA及RNA,为RT-PCR、分子克隆等分子生物学实验提供了很好的模板。     

BALB/C小鼠不同组织RNA提取方法的比较

为获得高质量BALB/C小鼠的核酸用于荧光定量RT-PCR分析,用某公司的RNA试剂盒、TRIzol试剂、氯化锂分别提取BALB/C小鼠心脏、肝脏和肾脏组织中的RNA。经紫外分光光度计检测发现,用TRIzol试剂在小鼠肾脏组织中获得的核酸片段具有更高的纯度及浓度,而1%琼脂糖凝胶电泳检测发现三种来源的RNA均具有较好的完整性。RT-PCR方法扩增小鼠主要组织相容性复合体蛋白H-2K编码基因,3个样品均可扩增出104 bp的特异性条带。试验验证了TRIzol试剂从不同组织中提取小鼠总RNA均可作为RT-PCR的模板,为后续试验工作奠定基础。     

柑橘黄龙病入侵与疫情扩散模型研究

 为了提示柑橘黄龙病入侵发病扩散规律,评估防控成效,有效控制疫情,2002—2007年在柑橘黄龙病初发生区采用设立自然条件、治虫防病和综合防控三处理类型,监测柑橘黄龙病发生扩散动态,结合面上疫情普查资料,创建柑橘黄龙病自然条件下、治虫防病条件下以及综合防控条件下的疫情扩散模型,分别为：P₁=12.9690N₁-18.10（n=6,r=0.9945**）或P₁=0.2293N12+11.135N₁-14.89（n=6,r=0.9948**）,P₂=7.8857N₂-10.2667（n=6,r=0.9675**）或P2=1.4107N²₂-1.9893N2+2.90（n=7,r=0.9996**）和P3=-0.1398x N₃²+1.1248N3-1.141(n=6,r=0.8396*),结果表明柑橘黄龙病在自然条件下从发病到毁园需要9a时间,单一治虫防病措施难以达到持续控制效果,只有采取综合防控措施,才能达到可持续控制,保障柑橘优势产业持续健康发展。     

胡柚上柑橘衰退病毒的分子检测

胡柚是我国东部地区重要的柑桔栽培品种.近年来,一种以叶片黄化为主要症状的新病害在胡柚种植区暴发流行.通过血清学和分子生物学检测,研究首次从黄化的胡柚叶片中检测到柑橘衰退病毒.系统进化分析表明,分离的CTV CS-7分离物与P09.18、NZRB-TH30等分离物具有较近的进化关系,而与T30等强毒株系有较大的遗传距离,...     

中国野生柑橘上衰退病毒分离株分子特征分析

 【目的】了解中国野生柑橘上携带柑橘衰退病毒（CTV）分离株的CP/HinfⅠRFLP组群构成和分子特征。【方法】运用RT-PCR对采自中国云南、广西、四川、湖南、江西等省11个野生柑橘上CTV分离株的病毒衣壳蛋白基因(CPG)进行扩增，利用RFLP和SSCP对CPG进行分析，并将测定的CPG序列进行同源性比较和聚类分析。【结果】发现野生柑橘上11个CTV分离株以单一组群感染为主；这些CTV分离株CPG的核苷酸序列和相应的氨基酸序列同源性分别为92.5％～99.5％和95.0％～100％；与GenBank收录的9个全基因组CTV分离株的相应基因序列进行聚类分析，其核苷酸序列和氨基酸序列同源性分别为92.1％～98.8％和94.6％～100％。【结论】序列同源性比较说明CTV CPG具有高度保守性，同时系统进化分析表明收集到的野生CTV分离株与国外分离株分属5大类群，具有较复杂的亲缘关系。     

柑橘新品种金峡桃叶橙区域试验

桃叶橙[Citrus sinensis(L.)Osbeck cv.Taoyecheng]原产秭归县屈原镇龙马溪村,品质优良,被誉为"峡橙三秀"之一。然而,随着1990年脐橙产业发展壮大以来,桃叶橙种植面积逐渐萎缩,同时由于栽培品种混杂,品质性状表现参差不齐,阻碍了桃叶橙产业的稳定发展。为了复兴桃叶橙产业,推广地方特色品种,优化柑橘品种结构,项目组自2009年以来一直开展桃叶橙的提纯选优工作,通过长期调查搜集、品质测定和分子鉴定,最终筛选出果大、少核、高糖低酸的金峡桃叶橙(C.sinensis cv.Jinxia Taoyecheng),并在秭归县和武汉市开展了区域试验,旨在为桃叶橙新品种选育及桃叶橙产业的复兴奠定基础。     

柑桔锈螨种群密度简易估计法

本文根据Gerrard阈限密度法,对57组调查资料进行分析,建立了锈螨的经济预测模型: m=1.7479[-1n(1-P)]~(1.3994)式中m为虫口密度,P为有虫叶率。     

Phylogenetic Analysis of Citrus tristeza virus Isolates of Wild Type Citrus in China

The genetic variation and phylogenetic relationships of Citrus tristeza virus （CTV） isolates collected from Chinese wild type citrus were analyzed by comparing the sequences of nine genomic regions （p23, p20, p13, p18, p25, p27, POL, HEL and k17） with the CTV isolates of cultivated citrus from different countries. The results showed that the divergence pattern of genomic RNA of the CTV isolates from wild type citrus was similar to that of other isolates from cultivated citrus, the 3′ proximal region was relatively conserved, and the 5′ proximal region had greater variability. The nine genomic regions of CTV isolates analyzed were found to have been under purifying selection in the evolution process. Phylogenetic analysis showed that the eleven Chinese wild CTV isolates were located at different clades and did not relfect their geographical origins, suggesting genetic diversity among the Chinese wild CTV populations. These results will aid in the understanding of molecular evolution of the Chinese CTV populations.     

柑橘溃疡病相关基因CsPGIP的克隆与表达

【目的】克隆CsPGIP并分析其表达特性,转化柑橘得到超表达转基因株系,并进行柑橘溃疡病抗性评价,为柑橘溃疡病分子育种提供理论依据。【方法】从晚锦橙和四季橘中克隆柑橘CsPGIP,使用MEGA6进行多序列比对并构建系统发育树;采用在线软件BaCelLo和SignalP 4.0进行亚细胞定位和信号肽预测并用GFP瞬时表达确定CsPGIP在细胞内的定位;利用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）比较接种溃疡病菌前后高感品种和高抗品种中柑橘CsPGIP的表达特性,分析溃疡病菌侵染与CsPGIP表达的相关性;农杆菌介导遗传转化晚锦橙,采用GUS染色初筛、PCR鉴定和qRT-PCR相结合的方法鉴定超表达转基因株系;观察转基因和野生型株系表型变化,分析其株高、叶片表型;离体针刺法对超表达转基因株系和野生型株系进行柑橘溃疡病抗性评价,统计病斑面积和病情指数,分析CsPGIP表达对柑橘抗、感溃疡病的影响。【结果】晚锦橙和四季橘CsPGIP均编码328个氨基酸,与已报道的柑橘中的PGIP同源性高达99.39%,都包含2个PGIP基因典型的LRR结构域（LRR_1和LRR_2）;构建系统进化树发现甜橙中的CsPGIP与葡萄中的PGIP（GSVIVT01033370001）遗传距离最近,相似度达到62.97%,推测CsPGIP与葡萄中的PGIP具有类似的抗病效果。亚细胞定位和信号肽预测结果表明CsPGIP属于分泌蛋白,GFP洋葱瞬时表达证明柑橘CsPGIP定位在细胞膜和细胞壁,与预测结果一致。高感品种晚锦橙和高抗品种四季橘接种溃疡病菌后CsPGIP的表达特性不同,在高感品种中表达显著下调,而高抗品种中表达显著上调且维持在较高水平,推测CsPGIP与柑橘溃疡病的抗性相关。构建CsPGIP超表达载体并转化晚锦橙,通过PCR鉴定和qRT-PCR确定其中9个（OE1、OE3、OE4、OE5、OE6、OE9、OE10、OE12和OE14）为CsPGIP超表达阳性株系。通过对转基因株系的表型观察发现OE3、OE14株系表型与野生型株系相比差异明显,植株表现为较矮小,其中OE14出现叶片卷曲、增厚的表型变化。对CsPGIP超表达转基因株系（8个株系）进行离体抗溃疡病评价,结果显示超表达转基因株系可以使柑橘溃疡病病斑面积降至野生型的24.11%—83.88%,其中OE1株系的病斑面积最小;从病情指数来看,除OE3株系外,其余株系的病情指数均比野生型显著下降（为野生型的23.12%—75.49%）,其中OE1下降最显著,综上结果可知超表达CsPGIP可以有效抑制柑橘溃疡病菌的生长。【结论】CsPGIP是柑橘响应溃疡病菌侵染的重要基因,可抑制或减轻柑橘溃疡病的发病程度,在柑橘抗溃疡病机理研究方面具有较大的应用价值,也可作为柑橘抗溃疡病分子育种的一个候选基因。     

柑橘类果汁的脱苦

介绍了柑橘类果汁的几种主要脱苦方法,并对今后柑橘类果汁的脱苦方法进行了展望。     

杀菌剂防治柚子柑橘黑斑病田间试验初报

柑橘黑斑病菌(Guignarida citricarpa)是欧盟和美国禁止进境的植物检疫性有害生物.近年,柑橘黑斑病成为阻碍我国柑橘出口欧盟的瓶颈,广东梅州名优鲜果--蜜柚出几基地黑斑病也遇到类似情况.为解决在柚子果实采摘前控制和减少柑橘黑斑病对果实的侵染,选择10种杀菌剂在柚子果实上进行柑橘黑斑病田间防控试验.试验结果可以初步确定嘧菌酯、甲基硫菌灵、苯嘧甲环唑等内吸性、具备对病原菌新型作用机制的杀菌剂能够在田间对柑橘黑斑病起到较好的防控效果.