圈养虎源大肠杆菌耐药性和整合子特性分析

对东北虎林园分离的具有耐药性的大肠杆菌进行了整合子-基因盒的研究,结果表明:61株分离菌中整合酶Ⅰ检出率为52.46%,整合酶Ⅱ和整合酶Ⅲ均没检出。分离株对阿莫西林/克拉维酸、氨曲南和安普霉素较敏感;对氨苄青霉素、四环素和复方新诺明高度耐药。序列分析表明,含有3种基因盒,分别是dfr A15、dfr A12和aad A2。     

健康畜禽肠道大肠杆菌耐药性及整合子-基因盒检测

采用微量肉汤稀释法检测455株大肠杆菌对24种抗菌药物的敏感性;多重PCR检测菌株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因;采用PCR-RFLP和PCR-测序法对整合子-基因盒进行序列分析。结果显示,455株菌除对头孢唑啉、头孢曲松、头孢噻呋和阿米卡星耐药率低于40%外,对其余药物表现出高耐药率,99.23%菌株呈多重耐药性;455株菌Ⅰ型整合子阳性率87.69%,Ⅱ型整合子1.98%,未检出Ⅲ型整合子;随机选取的204株整合子阳性菌中174株(85.29%)扩增出了基因盒可变区。基因盒主要以编码氨基糖苷腺苷基转移酶和二氢叶酸还原酶的aadA、dfrA基因为主,耐药基因排列成Ⅰ型整合子8种基因盒,Ⅱ型整合子3种基因盒。Ⅰ型整合子以dfrA1-aadA1(32.76%)基因盒为主,其次是aadA22(24.14%)和dfrA17-aadA5(24.14%)。Ⅱ型整合子以dfrA1-sat2-aadA1(66.67%)为主,Ⅱ型整合子阳性菌含有Ⅰ型整合子-基因盒;菌株含整合子-基因盒越复杂,其多重耐药性越严重。结果表明,本次分离的健康动物肠道大肠杆菌耐药非常严重,整合子-基因盒分布广泛,已成为耐药基因储库,对耐药基因扩散起重要作用。     

健康畜禽肠道大肠杆菌耐药性及整合子-基因盒检测

采用微量肉汤稀释法检测455株大肠杆菌对24种抗菌药物的敏感性;多重PCR检测菌株Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因;采用PCR-RFLP和PCR-测序法对整合子-基因盒进行序列分析。结果显示,455株菌除对头孢唑啉、头孢曲松、头抱噻呋和阿米卡星耐药率低于40％外,对其余药物表现出高耐药率,99．23％菌株呈多重耐药性;455株菌Ⅰ型整合子阳性率87．69％,Ⅱ型整合子1．98％,未检出Ⅲ型整合子;随机选取的204株整合子阳性菌中174株（85．29％）扩增出了基因盒可变区。基因盒主要以编码氨基糖苷腺苷基转移酶和二氢叶酸还原酶的aadA、dfrA基因为主,耐药基因排列成Ⅰ型整合子8种基因盒,Ⅱ型整合子3种基因盒。Ⅰ型整合子以dfrA1-aadA1（32．76％）基因盒为主,其次是aadA22（24．14％）和dfrA17-aadA5（24．14％）。Ⅱ型整合子以d厂rA1-sat2-aadA1（66．67％）为主,Ⅱ型整合子阳性菌含有I型整合子-基因盒;菌株含整合子-基因盒越复杂,其多重耐药性越严重。结果表明,本次分离的健康动物肠道大肠杆菌耐药非常严重,整合子-基因盒分布广泛,已成为耐药基因储库,对耐药基因扩散起重要作用。     

猪源大肠杆菌耐药性与I型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中I型整合子的流行情况,探讨I型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌I型整合酶基因（int11）并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含I型整合子,检出率77．31％。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp-3149bp。7类I型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78．15％大肠杆菌菌株的I型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因（aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB）最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因（dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27）,此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因1nuF、cm1A6、aar-3、off.结论I型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;I型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。     

猪源大肠杆菌耐药性与Ⅰ型整合子关系研究

目的为了解猪源大肠杆菌中Ⅰ型整合子的流行情况,探讨Ⅰ型整合子与大肠杆菌耐药表型的相关性。方法采用微量肉汤稀释法测定119株猪源大肠杆菌对8类14种抗菌药物的耐药性,并采用PCR法检测猪源大肠杆菌Ⅰ型整合酶基因(int I1)并扩增其可变区,对PCR产物进行酶切分析,测序分析整合子可变区携带的耐药基因盒。结果 119株大肠杆菌耐药现象十分严重,对四环素、磺胺异恶唑、新诺明全部耐药,所有菌株均呈多重耐药。119株猪源大肠杆菌中有92株含Ⅰ型整合子,检出率77.31%。扩增出7类大小不同的基因盒插入区片段,范围为1008bp～3149bp。7类Ⅰ型整合子在119株猪源大肠杆菌中存在13种流行组合。78.15%大肠杆菌菌株的Ⅰ型整合子携带2种或2种以上的基因盒,其中以携带编码氨基糖苷类药物耐药基因(aadA1、aadA2、aadA5、aadA22、aadB)最多,其次为编码磺胺类药物耐药基因(dfrA1、dfrA12、dfrA17、dfrA27),此外还携带编码利福平、林可霉素和氯霉素的基因lnuF、cmlA6、aar-3、orf。结论Ⅰ型整合子普遍存在于大肠杆菌中,且呈流行上升趋势;Ⅰ型整合子参与耐药及多重耐药,但单株细菌携带的耐药基因盒与其耐药表型无对应关系。     

猪源大肠杆菌血清型耐药性整合子调查

分别在北京地区采集正常猪泄殖腔拭子50份,河南123份,分离到大肠杆菌150株,分离率为86.7%.菌株血清型分布广,呈地区性、多样性和可变性.北京菌株耐药率低,除对四环素为73.8%外,对其他21种药物耐药率均在16.7%以下;河南地区菌株耐药率高,对青霉素类、磺胺甲基异噁唑高达75.0%以上.北京地区菌株整合子携带率为18.6%,河南地区为75.7%.整合子携带频率与细菌耐药性相关.     

食品动物源大肠杆菌多重耐药菌株整合子-基因盒的分子特征

为研究分离自四川省食品动物源大肠杆菌多重耐药菌株整合子-基因盒分布及分子特征,采用多重PCR方法检测327株多重耐药菌株中I、Ⅱ、Ⅲ型整合酶基因,用PCR-测序法对整合子阳性菌进行基因盒序列分析.结果表明327株Escherichia coli中294株(89.91%)检出有I型整合子,未检出Ⅱ、Ⅲ型整合子.在随机选取的81株l型整合子阳性菌中,67株(82.72%)能扩增出800～3000 bp的耐药基因盒插入区.基因盒以编码对甲氧磺胺嘧啶类和氨基糖苷类药物耐药的dfrA、dhfrI和aadA基因家族为主,尤其以dfrA17+aadA5为优势基因盒.分别在2株菌中检出aacA4+catB3+dfrA1和aadA22基因盒.aadA22是四川分离菌株中首次报道,介导氨基糖苷类耐药.结果表明I型整合子普遍存在于大肠杆菌临床菌株中.尽管菌株携带的整合子-基因盒与其多重耐药谱间不存在对应关系,但不同来源菌株中检测出相同的耐药基因盒片段,说明了通过整合机制耐药基因可在不同菌株问水平传递.     

鹅致病性大肠杆菌耐药性与整合子研究

为研究鹅致病性大肠杆菌(E.coli)耐药性及其整合子,本实验采用Kirby-Bauer法检测1株鹅致病性E.coli对22种抗菌药物的敏感性,并对Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因进行PCR检测及序列分析。结果表明该菌株只对阿莫西林/棒酸、头孢孟多、氧氟沙星、左氧氟沙星4种药物敏感,对环丙沙星、洛美沙星中度敏感,而对其他16种药物表现多重耐药性。PCR检测结果表明Ⅰ类整合子和qacE△1-sul1基因为阳性,Ⅰ型整合子扩增出约1 200 bp的基因盒插入区片段,将该片段测序与GenBank中的相关序列进行比对,结果表明该基因盒插入区携带arr-3和dfrA27的基因盒,它们分别是编码对利福平和甲氧氨苄嘧啶耐药的蛋白,这提示我们应从基因水平上监测细菌的耐药情况。     

动物源大肠杆菌整合子携带氨基糖苷类耐药基因盒的研究

收集540株不同动物源大肠杆菌,采用微量肉汤稀释法检测其对22种药物的耐药性;利用多重PCR方法检测菌株携带3型整合子的情况;采用χ2检验分析1型整合子阳性菌及阴性菌的耐药性;采用PCR—DNA测序法对整合子阳性菌株携带的氨基糖苷类耐药基因盒进行分析。结果显示,540株菌对链霉素等20种药物耐药率超过37％,全部菌株均呈多重耐药;1型整合子检出率为86．48％,未检出2及3型整合子;整合子阳性菌株对头孢唑啉等13种药物耐药率显著高于整合子阴性菌;随机选择的67株1型整合子阳性菌株中,有92．54％菌株携带有编码氨基糖苷核苷转移酶和乙酰转移酶基因（aadA2、aadA5、aadA22、aacA4）,共有5种类型基因盒,其中以介导对甲氧苄啶、链霉素和大观霉素耐药的dfrA17＋aadA5组合最为常见;在2株茵中分别发现介导对阿米卡星、氯霉素及甲氧嘧啶耐药的aacA4＋catB3＋dfrA1组合,和介导链霉素、大观霉素耐药的aadA22基因盒,是在四川分离菌中首次发现这2种基因盒。结果表明,1型整合子广泛存在于大肠杆菌临床菌株中,大肠杆菌耐药性与整合子相关,菌株中广泛携带氨基糖苷类及甲氧苄胺嘧啶耐药基因盒。     

奶牛子宫内膜炎大肠杆菌耐药性及其与整合子关系的研究

为阐明奶牛子宫内膜炎大肠杆菌的耐药性及其与细菌携带整合子之间的关系,采用微量稀释法测定药物对各菌株的最小抑菌浓度,以确定菌株的耐药性;运用PCR方法检测细菌携带Ⅰ类整合子的情况。结果：所有菌株对头孢噻呋、呋哺唑酮以及喹诺酮类药物的耐药率较低,均小于35％,而对磺胺类和抗菌增效剂的耐药率较高,均在97％以上;57株大肠杆菌中有21株携带Ⅰ类整合子,阳性率为36．8％,且Ⅰ类整合子阳性菌株均为多重耐药菌株（耐8种以上抗菌药物）;整合子阳性菌株对链霉素、阿莫西林、氨苄西林、头孢噻吩、四环素、土霉素的耐药率均显著高于整合子阴性菌株。结果表明奶牛子宫内膜炎致病性大肠杆菌的耐药性和多重耐药性与整合子携带有着密切关系。     

奶牛乳房炎大肠杆菌整合子与耐药表型的相关性研究

为研究自乳房炎奶牛分离的大肠杆菌整合子携带情况与其耐药表型之间的相关性，在获得菌株对20种抗菌药物耐药谱的基础上，设计Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ类整合子简并引物扩增菌株的整合酶基因，并结合内切酶限制性片段长度多态性分析，调查菌株携带的各类整合子，然后进一步扩增菌株整合子的基因盒插入区，测序分析其携带的基因盒。结果发现，80株自奶牛乳房炎病例分离的大肠杆菌中有37株检出Ⅰ类整合子（检出率46．25％），未检出Ⅱ类和Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子阳性菌中31株扩增出3种不同大小的基因盒插入区片段，插入基因盒主要是二氢叶酸还原酶基因（dfr）和氨基糖苷类抗生素耐药基因（aadA），最主要的基因盒排列为dfrA17-aadA5。分析表明，Ⅰ类整合子集中分布在耐受7种以上抗菌药物的菌株中，与菌株的多重耐药性高度相关，而菌株Ⅰ类整合子携带的耐药基因盒与其耐药谱缺乏对应关系。     

宠物源大肠杆菌的血清型和毒力基因及耐药性调查

为研究宠物源致病性大肠杆菌(Escherichia coli)的血清型、毒力基因和耐药性之间的相关性,本研究由健康和患病犬、猫直肠拭子样品中分离177株E.coli,并采用玻片凝集法鉴定其血清型,结果显示分离株中定型菌株135株,分别属于20个不同的血清型,其中O1、O2和O8为主要的流行血清型。PCR方法检测11种毒力相关基因,并采用琼脂稀释法测定分离菌株对14种抗菌药的敏感性,结果表明3个血清型的菌株拥有相似的耐药表型,但毒力基因谱不同。62%的分离菌株携带fimH基因,并且毒力基因组合iroN+hlyF、iroN+fimH和traT+sitA比较流行。55%的O1血清型携带fimH基因,并且多数耐受四环素、多西环素、头孢噻吩和庆大霉素;20.8%的O2血清型菌株携带traT和sitA基因;50%的O8血清型携带traT和fimH基因。3个血清型分离菌株多数对安普霉素和阿米卡星敏感。     

貉源多重耐药大肠杆菌整合子的检测

为了解貉源大肠杆菌的耐药性及Ⅰ型整合子的携带情况,试验采用药敏试验对150株貉源大肠杆菌进行耐药性检测,采用PCR方法对其进行Ⅰ型整合酶intⅠ1、intⅠ2和intⅠ3和Ⅰ型整合子的检测。结果表明：150株貉源大肠杆菌对氨苄西林(AMP)、阿莫西林(AML)、头孢噻吩(KF)和四环素(TE)的耐药率均达到了80%以上;对亚胺培南(IPM)、庆大霉素(CN)、阿米卡星(AK)、诺氟沙星(NOR)、环丙沙星(CIP)、氧氟沙星(OFX)和多黏菌素B(PB)的敏感率均达到了70%以上;均表现出不同程度的耐药性,耐药种数为1～19种,多重耐药情况达到92.67%(139/150),其中,6重耐药菌株的比例最大,为12.00%(18/150)。整合酶基因intⅠ1的阳性样本数量为108株,检出率为72.00%(108/150);整合酶基因intⅠ2的阳性样本数量为14株,检出率为9.33%(14/150);均未检出整合酶基因intⅠ3。Ⅰ型整合子的阳性菌株数量为51株,检出率为34.00%(51/150),且存在1个菌株中含有最多3个基因盒的情况。Ⅰ型整合子基因盒包括aadA2、dfrA5、d...     

猪源大肠杆菌整合子与耐药性的相关性研究

为分析耐药大肠埃希菌中整合子的流行情况和分子特性,用K-B法分析134株耐药大肠杆菌的药敏情况,并应用PCR方法检测其整合酶基因（intI）和整合子基因盒。结果显示：117株（87.3%）菌株为整合子阳性。表明细菌的多重耐药性与整合子携带高度一致。     

猪场大肠杆菌I型整合子及其基因盒的分子流行病学研究

对某猪场大肠杆菌I型整合子及其基因盒的分子流行病学进行了研究。结果表明：猪场大肠杆菌I型整合子流行普遍，192株分离菌中105株携带I型整合子，检出率达54．7％。共检出6种I型整合子，它们以8种组合形式在猪场大肠杆菌中流行。猪群、饲养员及饲养环境分离菌株I型整合子检出种类、检出率相近，但同耐药谱菌株I型整合子携带无一致性。各种I型整合子整合不同种类、不同数目的耐药基因盒，其中100％整合有氨基糖腺苷转移酶基因（aadA），77％整合有二氢叶酸还原酶基因（dhfr），仅少数整合有链丝菌素乙酰转移酶基因（sat）、p内酰胺酶基因（bla）及红霉素酯酶基因（ereA）。I型整合子携带菌株均表现多重耐药，其中100％耐受复方新诺明，90％耐受链霉素，75％耐受大观霉素。该猪场长期使用磺胺类、氨基糖苷类抗菌药物，尤其是将它们用作抗菌促长剂，造成了携带dhfr及aadA两种基因盒的I型整合子在猪场大肠杆菌中广泛流行。     

鸡源大肠杆菌整合子及基因盒分子流行病学研究

对河南省鸡源大肠杆菌Ⅰ类、Ⅱ类和Ⅲ类整合子及其携带的耐药基因盒进行了分子流行病学研究。结果表明：51株鸡源大肠杆菌中86．3％（44／51）检出Ⅰ类整合子,3．9％（2／51）检出Ⅱ类整合子,未检出Ⅲ类整合子。Ⅰ类整合子共检出5种类型的基因盒,分剐是sat基因盒（100％）,dfrAl＋aadAl基因盒（45．4％,20／44）,dfrAl7＋aadA5基因盒（22．5％,9／44）,dfrAl＋sat＋aadA2基因盒（6．8％,3／44）和4800bp未知基因盒（27．3％,12／44）,其中4800bp未知基因盒的下游携带有ESBLCTX-M基因,Ⅱ类整合子的基因盒携带dfrAl＋sat＋aadAl3种基因。     

宁夏地区鸡源耐药性大肠杆菌Ⅰ类整合子的研究

为了了解Ⅰ类整合子在宁夏地区鸡源大肠杆菌中的分布流行情况,采用琼脂扩散法测定宁夏地区临床分离的30株鸡源大肠杆菌对12种抗菌药物的敏感性;利用聚合酶链反应法检测整合酶基因,降落聚合酶链反应法对其阳性菌株可变区进行扩增,并对其产物进行测序分析。结果30株大肠杆菌中,Ⅰ类整合酶检出率为66.7%,Ⅰ类整合子中基因盒的检出率为75%。检出整合子中基因盒类型为dfr17+aad A5和dhfr+aad A2。表明Ⅰ类整合子在鸡源大肠杆菌中广泛流行,是导致多重耐药性的一个重要因素。     

猪致病性大肠杆菌耐药性与整合子-基因盒的相关性

为了解猪致病性大肠杆菌耐药性与整合子-基因盒的相关性,本研究采用腹腔注射法测定52株大肠杆菌对昆明小鼠的致病性;采用K-B法测定致病性大肠杆菌对15种抗菌药物的敏感性;对致病性大肠杆菌Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型整合子及其基因盒进行PCR检测及测序分析,并分析其整合子-基因盒与耐药性的相关性。结果显示,52株大肠杆菌对小鼠均具有较强致病性,96.15%分离株对15种抗菌药物表现为多重耐药性,61.54%分离株耐药性均在八重耐药以上。Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ型整合子阳性率分别为84.62%,15.38%和3.85%。Ⅰ型整合子检测到dfrA17-aadA5(18.18%)、dfrA12-orfF-aadA2(4.55%)和dfrA1-catB3-aacA4(4.55%)基因盒,Ⅱ型整合子检测到dfrA1-sat2-aadA1(50.00%)基因盒,Ⅲ型整合子未检测到基因盒,基因盒阳性率与细菌耐药性不存在相关性。     

大肠杆菌整合子检测与分析

近年来,细菌的耐药整合子系统正被广泛研究.大量的报道表明这一系统在传播及扩散细菌的耐药方面起着至关重要的作用,深入基因盒-整合子理论,可以用来解释细菌的耐药机理,丰富细菌基因捕获系统理论,为生物进化提供理论依据.本研究旨在分析国内大肠杆菌的耐药性情况,从分子水平上找出大肠杆菌的耐药原因.