外源激素对紫穗狼尾草愈伤组织诱导及分化的影响

以紫穗狼尾草(Pennisetum alopecuroides)幼芽基部为外植体,研究了外源激素对其愈伤组织诱导及分化的影响,筛选适宜的激素种类及浓度配比,为狼尾草无性系抗性育种奠定基础。结果表明,2,4 D对愈伤组织诱导的作用最显著,生长素NAA和KT的作用相近,均以0.5~1.0 mg·L-1为宜;NAA对愈伤组织分化的作用较明显,以0.5~1.0 mg·L-1与3.0 mg·L-16 BA配合效果最佳,KT的作用不明显。最佳诱导培养基为MS+2,4 D 3.0 mg·L-1+NAA 1.0 mg·L-1 +KT 1.0 mg·L-1;最佳分化培养基为MS+NAA 0.5 mg·L-1 +6 BA 3.0 mg·L-1。     

长叶点地梅愈伤组织诱导和植株再生

以长叶点地梅（Androsace longifolia）的无菌实生苗的下胚轴和叶片为外植体,研究不同种类、不同浓度的激素组合培养对愈伤组织诱导、芽诱导和生根的影响。结果表明,诱导下胚轴基部愈伤组织的最佳培养基为MS+0.3 mg·L-1 6 BA+0.1 mg·L-1 NAA,诱导率达85%;诱导叶片愈伤的最佳培养基为MS+0.02 mg·L-1 NAA+0.3 mg·L-1 TDZ,诱导率为80%;下胚轴愈伤诱导芽的最佳培养基为MS+0.5 mg·L-1 6 BA+0.2 mg·L-1 NAA,分化率达92.5%;叶片愈伤诱导芽的最佳培养基为MS+1.0 mg·L-1 6 BA+0.2 mg·L-1 NAA,分化率达82.5%;最佳生根培养基为MS+1.0 mg·L-1 IBA,生根率达100%,移栽成活率达95%。     

钝叶瓦松带芽叶片的组织培养和快速繁殖

以钝叶瓦松（Orostachys malacophyllus）带芽叶片为外植体,MS为基本培养基添加不同质量浓度的6 BA、NAA和2,4 D,探讨了不同植物生长调节剂对钝叶瓦松带芽叶片启动的影响,以期筛选出最佳培养基配方,建立钝叶瓦松组织培养再生体系。结果表明,叶片腋芽最佳启动培养基为MS+6 BA 3 mg·L-1+NAA 0.1 mg·L-1,腋芽增殖的最佳培养基为MS+6 BA 1.5 mg·L-1+2,4 D 0.2 mg·L-1,腋芽的增殖倍数为5.35。最佳生根培养基为1/2MS+NAA 0.3 mg·L-1,生根率为96.67%,移栽后成活率为76.67%。     

垂花百合花器官离体培养

以垂花百合（Lilium cernum）的花器官(花瓣、花托、子房)为外植体进行组织培养,结果表明,3种花器官外植体的愈伤组织的诱导能力和分化能力各不相同,花瓣愈伤组织的诱导率及分化率最高,分别可达57.65%和81.12%;诱导愈伤组织由易到难依次为花瓣>花托>子房;花瓣外植体诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6 BA 2.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1,子房外植体诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6 BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.5 mg·L-1,花托外植体诱导愈伤组织的最适培养基为MS+6 BA 1.0 mg·L-1+NAA 0.2 mg·L-1;最适生根培养基为1/2 MS+IBA 1.0 mg·L-1+ NAA 0.3 mg·L-1+AC 0.5 g·L-1。     

多年生黑麦草高频再生体系的建立及优化

从外植体预处理方式、基本培养基、激素浓度等方面着手,对多年生黑麦草愈伤组织诱导、继代、不定芽分化及再生过程中的影响因素进行了研究,提高了再生频率。结果如下：切取胚端半粒种子,经75%乙醇处理1min,0.1%HgCl处理15min,在经无菌水清洗4～6次后接种方式较好;愈伤组织诱导培养基以MS＋2,4—D 8.0 mg/L（或另添加甘露醇25 g/L）为佳;愈伤组织接种于MS＋2,4—D 8.0mg/L＋甘露醇25 g/L上进行1～2次继代后于NB＋6—BA2.0 mg/L上进行分化;不定芽转接至MS＋6—BA2.0 mg/L上进行扩繁或于1/2MS＋NAA0.5mg/L＋IAA0.5mg/L上进行生根。     

几种匍匐翦股颖品种植株再生的研究

以匍匐翦股颖Agrostis stolonifera潘娜1号、海滨和普特的成熟种子为外植体,进行愈伤组织诱导、分化及生根研究。结果表明：在MS培养基上,以不同浓度2,4 D诱导潘娜1号、海滨和普特的愈伤组织时,普特的愈伤组织诱导率均高于潘娜1号和海滨。2 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为潘娜1号和海滨诱导愈伤组织的最适激素组合,3 mg/L 2,4 D+0.1 mg/L 6 BA为普特愈伤组织诱导的最适激素组合。诱导率分别为45.2%、76.5%和87.0%;MSO(MS培养基的大量、微量元素和铁盐+B5培养基的有机元素)为最适合的分化培养基,分化率分别为50.0%、59.0%和57.6%。1/2 MS +1.0 mg/L IBA为生根培养基。     

2,4-D和6-BA对早熟禾愈伤组织诱导的影响

早熟禾愈伤组织的诱导是建立早熟禾高频再生体系的前提和基础。本试验以早熟禾成熟种子作为外植体,MS为基本培养基,在不同的2,4 D和6 BA浓度下诱导愈伤组织。结果表明早熟禾不同品种间,愈伤组织诱导率显著不同。在2,4 D和6 BA配合使用的情况下,愈伤组织的质量和诱导率要优于单独使用2,4 D的情况。     

肯塔基草地早熟禾愈伤组织的诱导及再生体系的建立

以肯塔基草地早熟禾成熟种子为外植体,研究了影响愈伤组织诱导、分化以及再生苗生根、移栽的主要因素,建立了肯塔基草地早熟禾高频再生体系。结果表明,在MS培养基上,低浓度的BA(0.1mg/L)配合2,4-D(3.0mg/L)诱导肯塔基草地早熟禾种子出愈率达到74.9±7.35%;0.1mg/L2,4-D在SH培养基上诱导愈伤组织分化成芽,分化率平均每块愈伤可达8.1±0.36个芽;最适生根条件为1/2MS 1.0mg/LNAA。     

结缕草‘Zenith’离体培养植株再生体系优化研究

以结缕草Zoysia japonica栽培品种‘Zenith’的成熟种子为外植体,通过调整2,4 D浓度和凝固剂种类及其浓度,进行结缕草离体培养植株再生体系优化的研究。结果表明：愈伤组织诱导的适宜培养基为MS+2,4 D 4.0 mg/L,愈伤组织诱导率为69.97%,其中胚性愈伤组织诱导率达28.78%。胚性愈伤组织包括2种类型：淡黄色、湿润的小颗粒聚集状愈伤组织(27.36%)和黄色、干燥、颗粒状愈伤组织(1.42%)。以结冷胶为凝固剂,有利于提高愈伤组织的诱导率。提高愈伤组织继代培养基中的琼脂浓度,有利于保持胚性愈伤组织的植株再生能力。适宜的愈伤组织分化培养基为MS+KT 4.0 mg/L或MS+6 BA 3.0 mg/L,绿苗分化率达90%以上。适宜的生根培养基为1/2MS ,生根率100%。     

Establishing regeneration systems of Gannong No.4 alfalfa

为实现对甘农4号紫花苜蓿Medicago sativa cv.Gannong No.4的遗传改良,研究拟建立一个操作简便、可重复性强、遗传性稳定、培养周期短和再生率高的转基因受体系统,为其遗传改良奠定基础。研究以MS为基本培养基,在不同浓度的2,4 D与6 BA的诱导培养基上,以甘农4号紫花苜蓿下胚轴为外植体,诱导愈伤组织,诱导率为86.85%～99.56%,其中MS+2 mg/L 2,4 D+1 mg/L 6 BA诱导率最高;浅黄色至淡绿色的愈伤组织在MS+0.5 mg/L KT+0.1 mg/L NAA培养基上的分化最好且植株颜色嫩绿。丛生芽在1/2MS+0.5 mg/L NAA的生根培养基上可再生成完整的苜蓿植株。     

应用正交试验法优化‘新农1号’狗牙根再生体系

以‘新农1号’狗牙根(Cynodon dactylon(L.)Pers.)成熟颖果为材料,通过正交法探讨激素、外源添加物等对狗牙根愈伤诱导、继代及分化的影响,优化‘新农1号’狗牙根再生体系。结果表明:各因子对‘新农1号’狗牙根愈伤诱导的影响程度为2,4-D6-BA脯氨酸;优化诱导培养基为添加2,4-D(2.0 mg·L~(-1))+6-BA(0.01mg·L~(-1))+脯氨酸(200mg·L~(-1))的MS培养基,此时愈伤诱导率达69.5%;对继代增殖而言,各因子对胚性愈伤诱导率、愈伤增殖率、褐化率的影响程度不同,对胚性愈伤诱导率的影响程度为2,4-DABA6-BA,对愈伤增殖率的影响程度为6-BAABA2,4-D,对褐化率的影响程度为2,4-D6-BAABA。综合3个指标结果认为,‘新农1号’狗牙根愈伤继代的优化培养基为2,4-D(2.0mg·L~(-1))+6-BA(0.20 mg·L~(-1))+ABA(2.0 mg·L~(-1))的MS培养基,其胚性愈伤率和愈伤增殖率分别可达71.67%和61.67%,且褐化率较低;对分化而言,优化的分化培养基为MS+6-BA(1.0mg·L~(-1)),小植株形成强度可达49.44%。     

红三叶新品系组织培养和植株再生

利用红三叶(Trifolium pratense L.)新品系无菌苗不同部位,通过愈伤组织诱导及分化途径获得再生植株。结果表明:子叶、下胚轴、叶柄、叶片及根段在MS+0.5mg·L^-1 6-BA+1～2mg·L^-1 2,4-D培养基上都极易诱导出愈伤组织。最佳继代培养基为MS+0.5mg·L^-1 6-BA+1.0mg·L^-1 2,4-D,添加2,4-D比NAA更利于愈伤的增长和保存;最佳分化培养基为MS+0.75mg·L^-1 6-BA+0.5mg·L^-1 NAA,最高分化率为16.67%,且分裂素6-BA优于KT,6-BA与NAA组合比与IBA组合更有利于红三叶愈伤组织的分化;茎芽增殖最佳培养基为MS+0.5mg·L^-1 6-BA+1.0mg·L^-1 IBA,再生苗的增殖效果IBA>NAA,2,4-D不利于茎芽生长;最佳生根条件为50mg·L^-1浓度的IBA中浸泡1h后植入含0.5mg·L^-1 IBA的MS中,生根率达80%,红三叶新品系IBA生根最大极限浓度为0.75mg·L^-1,浓度过高表现出对根系生长的毒害。     

野生黄花苜蓿组织培养及再生体系研究

以呼伦贝尔草原野生黄花苜蓿(Medicago falcata L.)无菌苗的子叶和下胚轴为外植体,对其组织培养及再生体系进行系统的研究,以期为其下一步转基因试验提供良好的受体。结果表明:最佳愈伤诱导培养基为MS+1.5 mg·L^-1 2,4-D+0.4 mg·L^-1 6-BA+3%蔗糖+0.7%琼脂,下胚轴和子叶的最佳愈伤诱导率均可达到100%。最佳胚性愈伤形成培养基为MS+0.5 mg·L^-1 KT+0.1 mg·L^-1 NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂,胚性愈伤形成率为81.5%;最佳分化芽形成培养基为MS+0.25 mg·L^-1 KT+0.05 mg·L^-1 NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂,分化芽形成率为36.5%。最佳生根培养基为1/2MS+0.5 mg·L^-1 NAA+1.5%蔗糖+0.7%琼脂,生根率为93.3%。愈伤诱导结果显示,供试黄花苜蓿材料个体间组织培养再生性存在较大差异,在同一激素水平上有大约1/3植株的愈伤状态优于其他植株。     

美洲狼尾草组织培养再生体系的建立

构建美洲狼尾草(Pennisetum glaucum)的组织培养再生体系对于该物种的育种研究具有重要意义。以美洲狼尾草的种子、幼叶、幼穗和茎节作为外植体，研究这几种外植体的最佳消毒方式并挑选最合适的外植体进行组织培养,在组培体系中添加不同浓度的植物激素,研究其对愈伤组织诱导与分化的影响。结果表明:以种子作为外植体效果最好，5%NaClO消毒5 min后污染率为1.33%;诱导种子产生愈伤组织的最佳培养基为MS+3 mg·L^-1 2,4-D + 1 mg·L^-1 6-KT+0.1 mg·L^-1 6-BA,诱导率为93.3%;诱导胚性愈伤组织分化的最佳培养基为MS+3 mg·L^-1 6-BA+1 mg·L^-1 NAA,分化率为81.4%。     

草地早熟禾午夜2号植株再生研究

以草地早熟禾(Poa pratensis L.)品种午夜2号成熟种子为外植体,进行植株再生研究,建立高频再生体系,为草地早熟禾进行原生质体培养和细胞融合奠定基础。结果表明:诱导愈伤组织的最佳培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂,其诱导率为52.3%;最佳继代培养基为MS+2,4-D(1mg/L)+6-BA(0.3mg/L)+3%蔗糖+0.7%琼脂;最佳分化培养基为MS+NAA(0.5 mg/L)+6-BA(1 mg/L)+3%蔗糖+0.6%琼脂、分化率为57.5%;生根培养基同分化培养基,供体材料经100d的培养后获得再生植株。     

新疆野生黄花苜蓿愈伤诱导及分化的研究

以新疆野生黄花苜蓿(Medicago falcata L.)为材料,通过愈伤组织诱导及分化途径获得再生植株;从种子硬实、外植体、激素(2,4-D和KT)、培养基方面探讨野生黄花苜蓿组织培养的影响因素。结果表明:4℃低温处理与浓硫酸浸种结合是破除黄花苜蓿硬实的较优方法,发芽率达90%;下胚轴为诱导愈伤组织的最佳外植体;MS培养基比改良的SH培养基对愈伤组织的诱导更有效,MS诱导培养基为MS+2,4-D 0.5 mg·L^-1+KT 0.8 mg·L^-1+蔗糖30 g·L^-1+琼脂粉7 g·L^-1,出愈率达到80%;浅绿色和浅黄色的愈伤组织在MS+2,4-D 0.2 mg·L^-1+KT 0.4 mg·L^-1+CH 1 g·L^-1+蔗糖20 g·L^-1+琼脂粉7 g·L^-1的培养基上分化较好,分化率为30%。研究结果将为黄花苜蓿生物技术育种奠定一定的基础。     

铁线莲‘Blekitny Aniol’组织培养及再生体系建立

对铁线莲(Clematis florida‘Blekitny Aniol’)的带芽茎段进行诱导产生无菌苗,并对其叶片和茎段进行愈伤组织诱导成苗的分化研究,成功建立了铁线莲组织培养再生体系。结果表明,带芽茎段诱导腋芽最佳培养基为MS+1mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA,腋芽萌发率为100.0%;茎段诱导愈伤最适宜培养基为MS+2 mg·L~(-1)6-BA+0.01mg·L~(-1)NAA,诱导率为78.3%;叶片诱导愈伤组织最适宜的培养基为MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA,诱导率为81.7%;愈伤组织分化的最佳培养基为1/2MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA,分化率可达25.0%;最适宜不定芽的增殖培养基为1/2MS+3 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA,增殖倍数为4.94;筛选出最优的生根培养基组合为1/2MS+0.05 mg·L~(-1)NAA,生根率为70.2%。本研究将为铁线莲的推广应用提供参考,也为其他铁线莲属植物引种和开发利用奠定了基础。     

多花黑麦草特高和多年生黑麦草四季高频组培再生体系的优化与建立

对在贵州地区广泛种植的多花黑麦草特高(Lolium multiflorum‘Tetragold’)和多年生黑麦草四季(L.perenne‘Four seasons’)的成熟种子进行了愈伤组织诱导及植株再生的研究,建立了两个品种的胚性愈伤组织高频诱导与再生体系。结果表明,剥去成熟种子的颖壳,切除1/3胚乳端,将特高接种于CC+7mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA、四季接种于CC+5mg·L~(-1) 2,4-D+0.5 mg·L~(-1) 6-BA的培养基中,在明显降低组培污染率的同时,能分别得到65.52%和63.55%的最高愈伤组织诱导率;将两个品种诱导出的愈伤组织转移在MS+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA+1.25mg·L~(-1) CuSO4+1.0g·L~(-1) CH的继代培养基上,能促进质量较好的Ⅱ型胚性愈伤组织的形成;根据后续转化试验所选用的植物表达载体pCAMBIA 1300的抗性特点,30~40mg·L~(-1)的潮霉素是两个品种愈伤组织最佳的筛选剂和临界浓度;特高的胚性愈伤组织接种在MS+2.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA+0.1mg·L~(-1) TDZ的培养基上,可以产生86.37%的最高分化率,四季的胚性愈伤组织接种在MS+6.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.3mg·L~(-1) NAA+5.0mg·L~(-1) KT的培养基上,能得到85.40%的最高分化率;生根培养基1/2MS+0.5 mg·L~(-1)NAA+0.5mg·L~(-1) IAA能让两个品种分化出的不定芽形成100%的生根率;以腐殖土∶蛭石∶砂壤土=1∶1∶1的混合材料作为营养土,能保证组培再生苗达到99%以上的成活率。优化建立的高频组培再生体系为下一步的遗传转化奠定了基础。