人工合成六倍体小麦与其亲本间淀粉酶活性的比较

研究小麦多倍化初期幼苗中α-淀粉酶和β-淀粉酶的活性变化,以模拟普通小麦的人工合成异源六倍体小麦为材料,采用3,5-二硝基水杨酸（DNS）法分别测定发芽96.5h的人工合成六倍体小麦（第五代）及其亲本中这两种淀粉酶的活性。结果表明,人工合成六倍体小麦中淀粉酶的活性显著低于其亲本中该酶的活性。     

转反义trxs基因小麦籽粒蛋白组分的巯基含量与α-淀粉酶活性的关系

利用反义trxs基因特异引物,对扬麦5号转反义trxs基因株系00TY5的T4和T5代进行了PCR分子鉴定,并对其纯合株系籽粒蛋白质组分的巯基含量、α-淀粉酶活性及二者的相关性进行了测试.结果表明,00TY5的T4和T5代PCR分子检测均呈阳性.与非转基因植株相比,在籽粒成熟和后熟过程中,籽粒清蛋白巯基含量在开花后30 d至成熟后5 d平均降低33.2%,球蛋白巯基含量在开花后20d至成熟后5 d平均降低42.5%,均达极显著水平（P＜0.01）;醇溶蛋白和谷蛋白巯基含量有下降的趋势,但降低幅度较小;α-淀粉酶活性低,变异小,尤其在开花后35 d至成熟后10 d,平均比非转基因植株下降36.5%.各种蛋白质组分的巯基含量与α-淀粉酶的活性呈正相关关系,清蛋白巯基含量在成熟前与α-淀粉酶活性相关性达极显著水平（P＜0.01）;球蛋白巯基含量在成熟前10 d至成熟后10 d达显著水平（P＜0.05）;贮藏蛋白巯基含量与α-淀粉酶活性的相关性在各时段均较高.     

电场对α-淀粉酶紫外光谱及其活性的影响

用不同电场强度处理α-淀粉酶,测试电场处理前后的紫外光谱和酶活性.结果表明:α-淀粉酶紫外光谱发生了明显变化,说明电场可以改变酶的构象;电场处理可使酶活性增加,活性的增加可能是由酶构象的改变引起.研究结果对解释静电宏观生物效应具有重要意义.     

转反义trxs基因对小麦种子α-淀粉酶活性的影响

通过PCR检测，转基因小麦植株均出现474bp的目的带，说明反义trxs基因已整合到小麦基因组上。经测定在种子萌动过程中转基因种子的α—淀粉酶活性低于未转基因种子，证明该基因能够正常表达，从而使转基因品种具有抗穗发芽的能力。     

转反义Trxs基因小麦籽粒蛋白组分的巯基含量与α-淀粉酶活性的关系

利用反义trxs基因特异引物，对扬麦5号转反义trxs基因株系00TY5的T₄和T₅代进行了PCR分子鉴定，并对其纯合株系籽粒蛋白质组分的巯基含量、α-淀粉酶活性及二者的相关性进行了测试。结果表明，00TY5的T₄和T₅代PCR分子检测均呈阳性。与非转基因植株相比，在籽粒成熟和后熟过程中，籽粒清蛋白巯基含量在开花后30 d至成熟后5 d平均降低33.2%，球蛋白巯基含量在开花后20 d至成熟后5 d平均降低42.5%，均达极显著水平(P<0.01)；醇溶蛋白和谷蛋白巯基含量有下降的趋势，但降低幅度较小；α-淀粉酶活性低，变异小，尤其在开花后35 d至成熟后10 d，平均比非转基因植株下降36.5%。各种蛋白质组分的巯基含量与α-淀粉酶的活性呈正相关关系，清蛋白巯基含量在成熟前与α-淀粉酶活性相关性达极显著水平(P<0.01)；球蛋白巯基含量在成熟前10 d至成熟后10 d达显著水平(P<0.05)；贮藏蛋白巯基含量与α-淀粉酶活性的相关性在各时段均较高。     

葡萄糖和ABA对小麦胚萌发过程中α-淀粉酶表达的调控

为了探讨种子的萌发特性与胚对ABA的敏感性和α-淀粉酶表达之间的关系,比较了葡萄糖和ABA 对不同生理状态的小麦离体胚萌发过程中α-淀粉酶表达的调控作用.结果表明,葡萄糖对未成熟胚、休眠成熟胚和不休眠成熟胚的萌发均有促进作用;葡萄糖能够抵消ABA对胚萌发的抑制作用,对于不休眠成熟胚,葡萄糖可以减轻ABA对胚根发生的抑制作用,但对随后的形态发生无影响.葡萄糖可以抑制小麦胚萌发过程中α-淀粉酶的表达;ABA可以抑制未成熟胚与休眠成熟胚中α-Amy-1的表达,但在不休眠成熟胚中则诱导α-Amy-1表达.因此,小麦离体胚的萌发特性、胚对ABA敏感性和α-淀粉酶的表达均与生理状态有密切关系.     

与抗穗发芽相关的小麦α-淀粉酶抑制因子基因的序列分析

小麦穗发芽与内源α-淀粉酶活性的提高密切相关，抑制内源α-淀粉酶活性是解决小麦穗发芽问题的关键。本研究对11份普通小麦以及1份人工合成抗穗发芽六倍体小麦RSP的α-淀粉酶抑制因子基因，进行了分离克隆与序列测定。并与核酸数据库中已知序列进行比对分析发现，α-淀粉酶抑制因子基因相当保守，一致性达到94．83％，仅在少数位置出现单碱基的替换或单个碱基的插入。在22份对比材料中，编码序列的229、272、397、415、427、430bp位置处，发生频率为9．1％的单核苷酸替换，是潜在的单核苷酸多态性（SNP）位点。     

赤霉素对不同温度下沙芥种子萌发特性及α-淀粉酶活性的影响

以筛选出不同温度下促进沙芥种子萌发的最适赤霉素(GA3)浓度为目的,为其在自然环境下种子萌发及播前处理提供指导.以沙芥种子为材料,在15,25,35℃条件下,研究赤霉素(GA3)对沙芥种子萌发特性及α-淀粉酶活性的影响,结果表明:在适温25℃下,外源GA3浓度超过20 mg/L,均抑制种子萌发;在15℃和35℃条件下,...     

测定枯草芽孢杆菌生产中温α-淀粉酶方法的研究

通过在60℃,pH值7.0条件下采用3种不同的方法,即QB/T 1803—1993测定法、3,5-二硝基水杨酸比色法(DNS法)、Phadebas amylase test法检测中温α-淀粉酶活力,分析用于检测中温α-淀粉酶活力快捷、方便、准确的方法,从而为其广泛的应用及测定提供依据。结果表明,QB/T 1803—1993测定法准确性高、精密度好,且操作简便、测定快捷,适于测定中温α-淀粉酶活力;3,5-二硝基水杨酸比色(DNS法)测得酶活力范围小,适于定性分析;同样的稀释度Phadebas amylase test法在37,60℃下的测定结果基本一致,而又由于中温α-淀粉酶的最适反应温度在60℃左右,说明该法不适于测定中温α-淀粉酶活力。     

GA处理下咖啡黄葵种子萌发及与α-淀粉酶相关性研究

[目的]研究不同浓度赤霉素处理对咖啡黄葵种子萌发的影响,以及种子萌发与α-淀粉酶的相关性.[方法]以蒸馏水为对照,选用不同浓度GA(1、5、10、50、100 mg/L)处理咖啡黄葵种子,发芽7d,每2d测定发芽率、胚根-胚轴总长、α-淀粉酶活性.[结果]随GA处理浓度增加,咖啡黄葵种子的发芽势、发芽指数及发芽率均呈先增后减的趋势;GA处理下,胚根-胚轴的伸长生长在萌发中期最快;α-淀粉酶活性随GA处理时间增加先升高后降低,发芽初期,α-淀粉酶活性极显著高于对照;赤霉素显著缩短其发芽时间,至少缩短2 d;综合考虑,5 mg/LGA处理对种子萌发效果最佳.[结论]不同GA浓度及处理时间对咖啡黄葵种子萌发有显著影响,低浓度的GA可以对咖啡黄葵种子萌发起促进作用,高浓度GA处理表现为抑制作用,且持续高浓度处理,抑制作用逐渐增强;促进胚根-胚轴伸长生长,发芽中期促进作用尤为明显;还显著提高发芽初期α-淀粉酶活性,从而影响咖啡黄葵种子萌发.     

α-淀粉酶基因amyP的原核表达及酶学性质初步分析

α-淀粉酶作为一种十分重要的酶制剂,目前工业上都是以微生物发酵法大规模生产的。从耐高温菌株Geobacillus.POT-5基因组中,用PCR的方法扩增得到该菌的α-淀粉酶基因,此基因被克隆、测序,并在原核Escherichia coli表达系统中进行表达,并对该重组酶的酶学性质进行初步的分析。     

两个直链淀粉含量不同的小麦品种籽粒淀粉合成酶活性与淀粉积累特征的比较

以均含有3个Waxy蛋白亚基的普通小麦品种济麦20（低直链淀粉含量）和鲁麦21（高直链淀粉含量）为材料，对灌浆期籽粒淀粉合成相关酶活性的变化及淀粉积累特征进行了研究，并分析了两者之间的关系。结果表明，蔗糖合成酶(SS)、腺苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶(AGPP)、束缚态淀粉合成酶(GBSS)、可溶性淀粉合成酶(SSS)和淀粉分支酶(SBE)活性均呈单峰曲线变化。鲁麦21的上述酶活性均高于济麦20。相关分析表明，支链淀粉积累速率与SS、AGPP、SSS和SBE呈显著或极显著正相关；直链淀粉积累速率与SS、AGPP和GBSS呈极显著正相关。Logistic方程拟合淀粉积累过程发现，支、直链淀粉最终积累量的高低取决于积累启动时间的早晚和积累速率的高低，而积累持续期的调节作用较小。直链淀粉的积累速率除受GBSS活性影响外，还受SS和AGPP活性的影响，其中，GBSS活性的变化与2品种籽粒直链淀粉积累量的变化情况基本吻合。籽粒灌浆后期的GBSS活性对直链淀粉最终积累量的调节作用大于灌浆前期，说明对同时具有3个Waxy蛋白亚基的不同品种，Waxy蛋白亚基表达量(GBSS活性)的差异可能是导致品种间籽粒直链淀粉含量较大差异的一个关键原因。     

3，5-二硝基水杨酸法测定番茄废渣中糖分含量的研究

番茄废渣经微生物发酵可制成蛋白饲料。本试验以番茄废渣为原料,研究3,5-二硝基水杨酸（DNS）法测定番茄废渣及其发酵产物中还原糖及总糖含量的最优方案。结果表明,测定波长为520 nm,DNS试剂用量为1.5 mL,显色时间为5 min,盐酸浓度为6 mol/L,控制在20 min内完成测定。此方法测得的结果精密度高、重现性好,平均回收率可达99.85%,RSD为0.671%,表明采用DNS法测定番茄废渣中的糖分含量准确、可行。     

一株产α-淀粉酶细菌的分离、鉴定及酶学性质初步研究

利用纯培养和碘液显色从松毛虫幼虫肠道中分离筛选得到一株产α-淀粉酶细菌2N02,通过16S rDNA序列比对,鉴定为枯草芽孢杆菌。摇瓶发酵后,产生的α-淀粉酶酶活力20.0 U/mL;经硫酸铵沉淀、透析脱盐后,初步研究酶学性质,测得酶反应最适温度50℃,最适pH值6.5,Mg2+、Ca2+对酶具有激活作用,Zn2+和EDTA则抑制酶活性。研究表明,该菌株是产α-淀粉酶较好的材料,具有一定的应用前景。     

响应面法优化微波提取啤酒花α-酸的工艺研究

通过单因素试验筛选新鲜啤酒花的干燥方法,并以干酒花为原料,采用响应面法对微波提取α-酸的工艺参数进行优化研究,建立预测性良好的乙醇浓度、料液比和微波时间三因素与α-酸含量之间的数学模型.结果表明,常温鼓风干燥至新鲜啤酒花失重70%时适于α-酸的提取;微波提取啤酒花α-酸的最优工艺条件为:乙醇浓度70.74%,料液比1:...     

α-茄碱对灰葡萄孢菌的体外抑菌活性研究

从马铃薯皮中提取分离出α-茄碱．通过牛津杯法研究α-茄碱对灰葡萄孢菌的体外抑菌活性,并采用平板涂布法测定其最低抑茵浓度（MIC）．结果表明,α-茄碱对灰葡萄孢菌具有较好的抑菌效果,且抑制强度呈剂量依赖性,当α-茄碱浓度为50μmol／L时．对灰葡萄孢菌表现出高度敏感性：α-茄碱对灰葡萄孢菌的最低抑菌浓度为15％。以灰葡萄孢菌为指示菌研究其稳定性．表明α-茄碱在中性（pH=7）条件下对灰葡萄孢菌的抑菌效力最强。当加热温度低于80℃时,α-茄碱的抑菌活性比较稳定,而当温度升高到121℃时．随着加热时间的增加．抑菌效果减弱。     

Amy6-4基因遗传多样性及其与α-淀粉酶活性的关联分析

α-淀粉酶活性是影响大麦种子发芽和麦芽制作及啤酒酿造的重要性状,Amy6-4为编码高等电点的α-淀粉酶基因,挖掘其高活性的等位变异对啤酒大麦的品种改良具有指导意义。通过对58份大麦品种中Amy6-4基因的重测序,研究了该基因的核苷酸序列以及在品种间的遗传多样性,并在群体结构分析的基础上,进行了核苷酸多态性与α-淀粉酶活性的关联分析。结果表明,Amy6-4基因共存在7个单核苷酸变异位点(SNP),构成5种单倍型。其中,H_3单倍型最普遍,发生频率为51.7%(30/58);其次为H_1单倍型,发生频率为39.7%(23/58);其他3种单倍型发生的频率约为10%。SNP位点及其构成的单倍型均与酶活性无关联性。     

郑丰5号α-醇溶蛋白基因的克隆与序列分析

α-醇溶蛋白是小麦籽粒贮藏蛋白的重要组分,其组成与含量对小麦加工品质具有重要影响。利用PCR从郑丰5号基因组中克隆α-醇溶蛋白基因,并对其序列进行分析。经克隆共获得32个α-醇溶蛋白新基因（ ZF5 A-1～ZF5A-32,GenBank注册序列号为JX828280～JX828311）,其中15个为假基因,17个（ZF5A-1～ZF5A-17）具有完整开放阅读框。17个α-醇溶蛋白新基因中,除ZF5A-1、ZF5A-3、ZF5A-6、ZF5A-9、ZF5A-10、ZF5A-11、ZF5A-15编码的蛋白在特征Ⅱ区含有1个额外的半胱氨酸（ C）外,其他10个基因编码的蛋白均具有α-醇溶蛋白的典型结构。根据推断氨基酸序列中4种主要T细胞优势多肽的分布及多聚谷氨酰胺区的长度,推测ZF5A-7和ZF5A-12可能定位于6A染色体,ZF5A-4、ZF5A-13、ZF5A-14和ZF5A-17可能定位于6B染色体,而ZF5A-1～ZF5A-3、ZF5A-5、ZF5A-6、ZF5A-8～ZF5A-11、ZF5A-15和ZF5A-16可能定位于6D染色体。17个新克隆α-醇溶蛋白基因及4个已知α-醇溶蛋白基因编码的蛋白的二级结构预测结果表明：α-螺旋、β-折叠的位置和核心序列是相对保守的,但不同蛋白α-螺旋和β-折叠的数量以及参与形成同一保守区域α-螺旋和β-折叠的氨基酸残基数却并不相同。克隆的17个α-醇溶蛋白基因中,除ZF5A-17编码的蛋白缺少α-螺旋（ H2）、ZF5A-2、ZF5A-8编码的蛋白在特征区Ⅰ均存在1个额外的α-螺旋（ HE1）、GQ891685和ZF5A-15编码的蛋白在多聚谷氨酰胺Ⅱ区存在1个额外的α-螺旋（ HE2）外,5个保守的α-螺旋（ H1～H5）恒定出现在其他基因的2个谷氨酰胺重复区和特征区中;此外,在C-末端特征区大部分基因（61．11％）还形成1个β-折叠结构（ E）。郑丰5号中具有较多额外半胱氨酸、α-螺旋和β-折叠的α-醇溶蛋白基因,可能与其良好的加工品质密切相关。