葫芦种子传黄瓜绿斑驳花叶病毒的检测*

从感染黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV）的葫芦植株上收取种子,通过苗期症状观察法、双抗体夹心酶联免疫吸附法（DAS-ELISA）、免疫捕获反转录PCR（IC-RT-PCR）法测定葫芦种子的带毒情况,并用生物学接种方法测定葫芦种子携带病毒的侵染活性。苗期症状观察法结果表明,199株幼苗有2株表现花叶斑驳症状,种子传毒率为1.01%;而利用DAS-ELISA和IC-RT-PCR法随机检测30粒葫芦病株种子,CGMMV检出率为100%。种子各部位携带的CGMMV接种葫芦表现典型的花叶斑驳症状,表明葫芦种子携带的CGMMV具有侵染活性。DAS-ELISA检测葫芦种子CGMMV的灵敏度为1/5120种子研磨液。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒单克隆抗体的研制

将纯化的黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV)制剂免疫BALB/c小鼠,最后一次免疫后第3天取其脾细胞与SP2/0细胞融合,经采用选择性培养基、有限稀释法克隆和间接ELISA方法进行筛选,成功获得了3株分泌CGMMV特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株并分别命名为3C9,3F7,2G10。用ELISA方法对所获得的3个杂交瘤细胞株进行亚型鉴定均为IgG2a,kappa链。 间接ELISA效价测定结果分别为3C9：1.024×107,3F7：2.56×106,2G10：1.28×106。此3株杂交瘤细胞所分泌的单克隆抗体均能与本研究室保存的其他3种不同的CGMMV分离物发生特异性反应,而不与其他3种同属成员病毒 烟草花叶病毒(Tobacco mosaic virus, TMV)、辣椒轻斑驳病毒(Pepper mild mottle virus, PMMoV)、齿瓣兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV) 发生反应。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒疫情处置效果的研究

通过对经焚烧深埋处理的CGMMV染疫甜瓜植株和用土壤消毒剂处理的土壤的连续取样;提取土壤和病残植株样品的RNA;经RT-PCR检测和汁液摩擦接种植株的方法,检测了带有CGMMV植株残体和土壤中病毒核酸的存在和其侵染活性。结果表明:经过通常检疫销毁的病植株残体和土壤可以检到病毒RNA,但已没有侵染活性。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒低风险参照物质的研制

采用RT-PCR方法扩增黄瓜绿斑驳花叶病毒的外壳蛋白基因与3,非编码区,并将其构建到马铃薯X病毒(PVX)载体中.重组质粒经线性化及体外转录后接种烟草,获得含有病毒外壳蛋白基因的感病植株.感病组织可用于分子检测的质控,也可作为毒源来繁殖阳性参照物质.基于PVX载体制备的参照物质可降低检疫性病毒的生物安全风险,尤其对稳定性强、可造成严重经济损失的高风险病毒的检疫更具实用价值.     

利用RT-PCR快速检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

根据黄瓜绿斑驳花叶病毒（CGMMV）的外壳蛋白基因（CP基因）保守序列设计、合成引物,以感病西瓜、南瓜、玉米叶片组织总RNA为模板,进行cDNA合成和PCR扩增,并将扩增产物连接到pMD18-T载体上测序鉴定。核苷酸序列测定结果表明,此CP基因全长为654个核苷酸,与已报道的CGMMV的CP基因同源性为97%-100%。RT-PCR方法为检测CGMMV提供了操作更为简便、特异性更强的快速、准确的检测鉴定方法,是一种控制该潜在危险性有害生物蔓延的有效途径。     

新入侵的有害生物——黄瓜绿斑驳花叶病毒

黄瓜绿斑驳花叶病毒是我国局部地区新发现的病毒病害，对部分地区葫芦科作物造成严重危害。2006年国家有关部门启动了铲除计划，疫情得到了有效控制。本文在收集了国内外资料的基础上描述了该病毒的分类地位、分布、寄主范围和症状、传播途径等生物学特性，并介绍了国内外发生情况及防控措施。为控制和防止该病的发生和蔓延提供参考。     

实时荧光RT-PCR方法检测黄瓜绿斑驳花叶病毒

根据黄瓜绿斑驳花叶病毒不同分离物外壳蛋白基因(CP)的保守序列,设计合成引物和TaqMan荧光探针,建立了黄瓜绿斑驳花叶病毒的实时荧光RT-PCR(Real time RT-PCR)检测方法.该方法利用TaqMan探针水解产生的荧光信号实时监测目标基因的扩增,实现PCR扩增与检测同步进行.结果表明,实时荧光RT-PCR方法检测灵敏度比普通RT-PCR高约10倍,并且具有快速、简便、准确的优点,适合于CGMMV的快速、高效检测.     

黄瓜绿斑驳花叶病毒在我国定殖和扩散的风险性分析

参照国际上有害生物风险性分析（pest risk analysis, PRA）方法,从定性分析和定量评估两个层面对黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus, CGMMV）的危险性进行了综合评价。从CGMMV的地理分布、侵入后定殖、扩散的可能性等对其进行研究分析,认为CGMMV具有广泛的适宜寄主、极强的适生性及多种传播方式,风险值R为2.39,已给我国葫芦科作物如西瓜造成巨大经济损失,因此断定其定殖、扩散的可能性极高,属于高度危险性的有害生物,应加强对其的风险管理。     

日本、韩国黄瓜绿斑驳花叶病毒发生及防控策略

本文简介日本、韩国黄瓜绿斑驳花叶病毒的发生情况,分析了日、韩黄瓜绿斑驳花叶病毒发生传播特点及其防控策略,认为其种子检疫、种子消毒处理、卫生栽培和土壤处理等综合控制措施是疫情关键防控技术,为我国控制该疫情提供有益借鉴。     

嫁接西瓜的大棚地杂草黄瓜绿斑驳花叶病毒染病性研究初报

为了明确棚栽嫁接西瓜黄瓜绿斑驳花叶病毒发病地杂草染病情况,采集3个镇(街道)5个村的发病地杂草样本进行种类识别与酶联免疫双抗体夹心(DAS-ELISA)法检测。结果发现82份杂草有18科39种,其中37种杂草78个样本染病,染病率分别为94.8%和95.1%;且在染病的杂草中有12种杂草表现着不同程度的黄瓜绿斑驳花叶病毒疑似症状,以繁缕症状表现最早,也较严重。说明棚栽西瓜田内杂草种类繁多,且很多都能感染或携带黄瓜绿斑驳花叶病毒。     

湖南首次检测到黄瓜绿斑驳花叶病毒

 黄瓜绿斑驳花叶病毒（Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV）自1935年首次报道^［1］以来,已广泛分布于亚洲、欧洲、南美洲的多个国家和地区,对葫芦科作物的生产造成了严重损失。CGMMV主要有两种重要的传播途径,一是带毒种子造成远距离传播,二是授粉、嫁接等农事操作造成的田间传播^［2］。     

侵染观赏南瓜的黄瓜绿斑驳花叶病毒的初步鉴定

从广西某农业展示中心观赏南瓜上分离到一种直杆状病毒,长约300nm,该病毒分离物P-3(NN)在测试的葫芦科作物上表现为系统花叶、褪绿斑及明脉症状,在曼陀罗上为局部褪绿斑,在测试的其它茄科作物及豆科和藜科作物上无任何症状反应.其致死温度为95～100℃.经DAC-ELISA测定,P-3(NN)与黄瓜绿斑驳花叶病毒有密切的血清学关系.根据以上结果,初步鉴定P-3(NN)为黄瓜绿斑驳花叶病毒(CGMMV)的一个分离物.     

人工接种CGMMV的增殖及其对西瓜 光合作用的影响

为明确西瓜感染黄瓜绿斑驳花叶病毒CGMMV后病毒的增殖过程及其对光合作用的影响,本研究以辽宁省田间主栽西瓜品种‘京欣’为试材,测定了人工接种CGMMV后,西瓜植株体内病毒含量、光合色素、光合作用相关指标以及参与光合作用的关键酶活性的变化,结果显示:接种3d后,即可检测到病毒,24d植株内病毒含量达最高;叶绿素a、叶绿素b及类胡萝卜素的含量均有所降低,叶绿素a在9d后均低于健康对照,而叶绿素b和类胡萝卜素在15d后明显低于健康对照,第18天时,健康对照的叶绿素b含量达接种处理的1.33倍;ALA脱水酶活性除第15天与对照无显著差异外,整个测定期间均低于健康对照,21d时健康对照的ALA脱水酶的活性达29.9U/h,为接种处理的2.18倍;PEP羧化酶的活性显著低于健康对照,测定期间接种处理的PEP羧化酶活性变化不大;乙醇酸氧化酶活性明显升高,测定期间其活性均显著高于健康对照;西瓜叶片的光合速率、气孔导度和蒸腾速率均远小于健康对照,而细胞间隙CO_2浓度却比对照高,本研究为揭示西瓜感染CGMMV后的光合作用变化规律奠定了基础。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒病防治研究进展

黄瓜绿斑驳花叶病毒(Cucumber green mottle mosaic virus,CGMMV)主要危害葫芦科作物,已被世界上许多国家和地区列为检疫性有害生物。CGMMV目前在我国23个省、市、区已有报道发生和危害,严重影响葫芦科作物的生产;近年来该病害在国内外呈现迅猛扩展的趋势并对生产造成危害。本文综述了防治该病害的种子处理、化学及生物防治、嫁接以及转基因等分子生物学方法;分析了CGMMV与寄主黄瓜互作研究的最新进展,对小分子RNA参与调控寄主对CGMMV病毒的防控策略提出了展望,并概述了下一代测序技术、基因编辑技术在植物新病毒的检测、鉴定以及培育抗病新品种等方面的应用。     

黄瓜绿斑驳花叶病毒磁免疫层析试纸条的研制

用磁性纳米颗粒标记黄瓜绿斑驳花叶病毒的兔多克隆抗体建立了简便快速的磁免疫层析试纸条检测方法。该方法检测提纯病毒的灵敏度为0.1 μg/mL,检测葫芦病汁液可稀释10 000倍(重量／体积)。试纸条和黄瓜绿斑驳花叶病毒具有特异性反应,和同属的烟草花叶病毒、番茄花叶病毒、辣椒轻斑驳病毒和齿兰环斑病毒,未出现交叉反应。该试纸条可用于田间病害检测和诊断。