3株放线菌对致病疫霉抑制作用的比较研究

采用对峙培养法、菌悬液混合法和块茎切片法分别比较了3株拮抗放线菌Sy11、NB8和A5295对致病疫霉(Phytophthora infestans)的抑制作用及其对马铃薯晚疫病的预防效果。结果显示,放线菌活体菌株以NB8对致病疫霉菌丝生长的抑制作用最强(87.18%),Sy11次之(76.92%),A5295无明显抑制作用。3株拮抗株菌对致病疫霉游动孢子释放和孢子囊直接萌发的抑制作用均随菌液浓度下降而减弱。其中,Sy11的抑制作用最强,A5295最弱;其原液对游动孢子释放的抑制率分别为92.3%、79.0%和63.7%,对孢子囊直接萌发的抑制率分别为75.8%、72.4%和55.8%。在块茎切片上对马铃薯晚疫病的预防效果也以Sy11最高(75.90%),显著优于NB8和A5295。受Sy11和NB8抑制致病疫霉部分菌丝体形态发生畸变,而A5295对菌丝形态未表现出明显的致畸作用,表明Sy11防治马铃薯晚疫病潜力最大。     

杀菌剂对昆虫病原真菌块耳霉孢子萌发的影响

研究了10种杀真菌剂在田间使用浓度的中间浓度及其10倍稀释液下,对昆虫病原真菌块耳霉孢子萌发的影响。结果表明各杀菌剂对块耳霉孢子萌发有不同程度的抑制,浓度愈高,抑制作用愈大。多菌灵、普力克对孢子的抑制作用最小,与块耳霉表现出良好的相容性,是与块耳霉实施菌药合用的候选药剂。施保功、大生、达科宁3种杀菌剂对块耳霉孢子的杀伤力最大,在两种浓度下孢子萌发率均为0。施佳乐、速克灵和敌力脱在低浓度下,与块耳霉的相容性良好,处理后24～48 h与对照无显著性差异;但在中间浓度水平下,处理后48 h孢子萌发率分别为12.45％,0,0。其余药剂随处理时间和浓度不同,对块耳霉孢子萌发有不同程度的抑制。     

一种高效分离荔枝霜疫霉病菌的新方法

作者将常规植物病原菌组织分离法改进成一种适合于荔枝霜疫霉病菌分离的简便、高效的新方法。分离的荔枝果实经过100 μg/mL多菌灵及36 μg/mL链霉素的混合药液浸泡处理,在无菌保湿的条件下采用病果对健果进行病害诱发后进行病原菌的分离纯化。该新方法分离荔枝霜疫霉病菌的成功几率大于传统组织分离法。     

一种适于分离荔枝霜疫霉的选择性培养基

为提高荔枝霜疫霉Peronophythora litchii Chen ex Ko et al.的分离成功率,筛选一种适于分离该病原菌的选择性培养基,采用菌丝生长速率法测定了3种杀菌剂和8种抗生素对荔枝霜疫霉及9种常见非目标真菌菌丝生长的抑菌活性.结果表明,以PSA为基础培养基,在其中添加多菌灵、咪鲜胺、异菌脲、利福平和制霉菌素使其浓度分别至10、2、200、10和50 μg/mL所配制成的选择性培养基,可有效抑制非目标真菌炭疽菌 Colletotrichum sp.、拟茎点霉Phomopsis sp.、链格孢菌Alternaria sp.、镰刀菌Fusarium sp.、拟盘多毛孢Pestalotiopsis sp.、毛霉Mucor sp.、地霉Geotrichum sp.、酵母菌Saccharomyces sp.、裂褶菌Schizophyllum sp.的生长,但对荔枝霜疫霉的生长影响较小.分离实践表明,采用该选择性培养基,不管病组织是否经表面消毒,均可成功分离获得荔枝霜疫霉纯菌落,大大提高了分离的成功率和效率.     

烟草疫霉对甲霜·锰锌的抗性评价

为明确烟草疫霉对甲霜·锰锌的抗性水平,从云南省主要烟区采集、分离到28株烟草疫霉,采用菌丝生长速率法测定其对甲霜·锰锌的室内敏感性。结果表明,甲霜·锰锌对28株烟草疫霉的EC₅₀为1.00～5.54 mg/L,平均值为2.49 mg/L;敏感菌株数占供试总菌株数的67.86%,低抗菌株占32.14%,无中、高抗菌株;供试菌株中,菌株WS-12对甲霜·锰锌的抗性相对较强,抗性倍数为2.22,WS-2和QJ-74对甲霜·锰锌的敏感性较强,抗性倍数均为0.40。不同采集地菌株群体中低抗与敏感的比例差异明显,来自文山和临沧的菌株平均抗性水平为低抗,红河、昆明和曲靖的菌株均为敏感。总体看来,当前云南烟区烟草疫霉对甲霜·锰锌尚无明显抗性。     

荔枝霜疫霉自噬相关基因的鉴定与表达分析

 细胞自噬(Autophagy)是一种真核生物中高度保守的胞内物质降解和循环再利用的生理过程,其调控细胞动态平衡、压力适应和细胞程序性死亡,与植物病原真菌生长发育、孢子形成、侵染等一系列过程密切相关。荔枝霜疫霉(Peronophythora litchii)侵染引起的荔枝霜疫病严重危害荔枝生产及采后贮藏。本研究利用模式物种中已知的自噬相关蛋白,采用同源比对的方法在荔枝霜疫霉基因组数据库中鉴定到19个同源蛋白,分属16种蛋白类型。分析基因结构和蛋白保守功能域,发现荔枝霜疫霉自噬相关基因均具有内含子,且数目差异明显;所鉴定候选蛋白都具有相应分组的保守功能域,而PlATG1a在C端具有2个额外的ATG11功能域,PlATG11则在其N端包含1个APG17功能域。进一步对具有核心功能且多成员的自噬相关蛋白ATG1、ATG6、ATG8和ATG18进行系统进化和序列模块分析发现,这些蛋白在不同物种之间十分保守,但是其同源蛋白间存在分化。通过转录组数据分析和qRT-PCR验证结果显示,荔枝霜疫霉中自噬相关基因在生长发育和侵染阶段均有表达,与菌丝阶段相比,PlATG1a、 PlATG2、PlATG3、PlATG6a、PlATG8、PlATG18a基因在游动孢子阶段特异上调表达,其中PlATG8最为显著;PlVPS34在孢子囊阶段特异诱导表达,PlATG1b、PlATG12、PlATG17在孢子囊与游动孢子阶段上调表达但是在侵染阶段下调表达;PlATG6b、PlATG9、PlATG10、PlATG13、PlATG14及PlVPS15基因在生长发育和侵染阶段均表现出不同程度的上调表达,PlATG7、PlATG11、PlATG18b 则在侵染阶段显著下调表达。结果表明,细胞自噬可能参与调控荔枝霜疫霉的生长发育及致病过程。     

荔枝霜疫霉不同发育阶段对4种QoI类杀菌剂的敏感性

荔枝霜疫霉是荔枝上的严重病害。在离体条件下比较了4种QoI类杀菌剂烯肟菌酯、烯肟菌胺、SYP-2815和苯醚菌酯对荔枝霜疫霉不同发育阶段的影响。结果表明:供试药剂对荔枝霜疫霉病菌菌丝扩展及孢子囊产生量均表现出一定的抑制作用,EC50值分别在0.1970~1.2579 μg/mL和0.2127~0.8160 μg/mL之间,而对其游动孢子释放的抑制作用较低,EC50值在4.1448~7.4253 μg/mL之间;4种药剂在一定浓度下会加速游动孢子的消解,抑制休止孢的形成;对孢子囊和休止孢萌发具有优异的抑制活性,EC50值分别在0.0465~0.3424 μg/mL和0.0365~0.1877 μg/mL之间。     

荔枝霜疫霉中双组分信号转导系统的鉴定与表达分析

荔枝霜疫霉(Peronophythora litchii)隶属于茸鞭生物界卵菌门疫霉属,由其引起的荔枝霜疫病是目前荔枝生产上一种最重要的病害,严重影响荔枝产量和鲜果品质。双组分信号途径在微生物中参与多种生命活动,但是在卵菌中尚未有相关研究。本研究通过生物信息学分析在荔枝霜疫霉中鉴定到2个杂合型组氨酸激酶(PlHK1、PlHK2)和1个响应调控蛋白(PlRR1)。其在卵菌中是保守存在的,并且与真菌在进化上相对独立。功能域分析表明,PlHK1和PlHK2的C端额外的融合了1个磷酸转移功能域(Hpt),这与真菌和植物的存在显著差异。转录分析表明3个基因在荔枝霜疫霉侵染阶段上调表达,并且响应渗透胁迫和氧化胁迫。以上结果揭示了双组分信号系统可能在疫霉致病过程中发挥重要作用。     

荔枝霜疫霉中双组分信号转导系统的鉴定与表达分析

 荔枝霜疫霉(Peronophythora litchii)隶属于茸鞭生物界卵菌门疫霉属,由其引起的荔枝霜疫病是目前荔枝生产上一种最重要的病害,严重影响荔枝产量和鲜果品质。双组分信号途径在微生物中参与多种生命活动,但是在卵菌中尚未有相关研究。本研究通过生物信息学分析在荔枝霜疫霉中鉴定到2个杂合型组氨酸激酶(PlHK1、PlHK2)和1个响应调控蛋白(PlRR1)。其在卵菌中是保守存在的,并且与真菌在进化上相对独立。功能域分析表明,PlHK1和PlHK2的C端额外的融合了1个磷酸转移功能域(Hpt),这与真菌和植物的存在显著差异。转录分析表明3个基因在荔枝霜疫霉侵染阶段上调表达,并且响应渗透胁迫和氧化胁迫。以上结果揭示了双组分信号系统可能在疫霉致病过程中发挥重要作用。     

大白菜霜霉病菌寄生霜霉对氟吡菌胺的敏感性

为探明大白菜霜霉病病原菌寄生霜霉Peronospora parasitica对氟吡菌胺的敏感性,采用凹玻片保湿法和离体子叶浸泡法测定了氟吡菌胺对寄生霜霉不同生长发育阶段的抑制作用。结果表明:氟吡菌胺对寄生霜霉孢子囊萌发、芽管伸长、病斑扩展、孢囊梗形成及孢子囊产生均有不同程度的抑制作用,其中对孢子囊萌发和芽管伸长的抑制效果最显著,EC50值分别为0.113 3和0.291 8μg/m L;当氟吡菌胺质量浓度为8.00μg/m L时,对病斑扩展和产孢量的抑制率分别达到86.08%和72.48%,且对孢囊梗的产生也有显著的抑制作用。选用离体子叶浸泡法,测定了氟吡菌胺对从山东省不同地区采集分离的60株寄生霜霉菌株的毒力,发现菌株之间对药剂的敏感性差异较小,敏感性频率呈近似正态分布,其EC50值范围为0.163 2~0.802 2μg/m L,因此可以将其EC50平均值0.405 3μg/m L作为寄生霜霉对氟吡菌胺的敏感基线。     

糖对稻曲病菌薄壁分生孢子萌发的影响

 以琼脂平板为萌发基质,测定了10种糖化合物(木糖、果糖、山梨糖、核糖、甘露糖、葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、乳糖和蔗糖)对稻曲病菌薄壁分生孢子萌发的影响。结果发现,在浓度为1%时,除蔗糖外,其余9种糖对孢子萌发均有不同程度的抑制作用,其中木糖、果糖、山梨糖和核糖的抑制作用强烈;孢子经木糖或果糖处理6h后,并未丧失活力;多种糖混合仍表现为抑制孢子萌发。当各种糖与起刺激作用的马铃薯煮汁分别混合时,表现出明显相反的两种效应,一是马铃薯汁的刺激作用可掩盖甘露糖、葡萄糖、麦芽糖、半乳糖、乳糖和蔗糖的抑制作用;二是木糖、果糖、山梨糖和核糖的抑制作用可掩盖马铃薯汁的刺激作用。表明外源糖化合物及某些生命活性物质可影响薄壁分生孢子萌发。     

影响柿树炭疽菌孢子萌发、附着胞形成及致病性的环境因子

 在凹玻片上测定了不同浓度的葡萄糖溶液对柿树炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)的分生孢子萌发和附着胞形成率的影响,结果表明:分生孢子萌发率随葡萄糖浓度升高而增加,但附着胞形成率下降,芽管长度增加,附着胞的直径几乎没有变化;随着时间的延长,孢子萌发率和附着胞形成率都有所增加。不同pH对分生孢子萌发和附着胞形成率的影响结果显示,分生孢子在pH 2.0~9.0的溶液中可以萌发,并产生附着胞;最适分生孢子萌发和附着胞形成的pH是在5.0~6.0。不同pH处理的致病试验结果说明。在23℃时病斑在pH 4.0~8.0条件下都可产生;致病试验结果也发现,17℃时,pH6.0处理能发病,但不形成分生孢子团,pH 5.0处理不发病;15℃时,pH 5.0和pH 6.0的处理都不能发病。温度对菌丝生长的影响显示,菌落生长最适温度是25℃左右,高温抑制菌落生长。寄主表面侵染结构扫描电镜观察结果表明,芽管长度变化很大,芽管可以纵向沿着脊或沟延伸,也可横向通过脊沟;附着胞均在沟底或近底部形成。     

稻曲病菌分生孢子的生物学研究

 本文对稻曲病菌分生孢子的一些生物学特性进行了研究,结果表明,基质养分对分生孢子萌发影响较大,纯水不利于孢子萌发,PSA最适于孢子萌发,葡萄糖则强烈抑制孢子萌发,马铃薯煮汁既可抵消葡萄糖的抑制作用,又可刺激孢子萌发。分生孢子在琼脂面上比在液滴中萌发率高。分生孢子萌发的适宜温度为22~31℃,以28℃最好。分生孢子萌发对pH值敏感,以pH 6~7最适宜。用振荡培养法获取分生孢子,培养10 d后,孢子的萌发力开始下降。分生孢子的存活对水的依赖性强,在水中保存8 d萌发力不变,在100% RH中8 d萌发力略有降低,而在25% RH中5 h萌发力即迅速下降。根据这些特性,作者对分生孢子在田间的动态作了一些推测。     

Assessment of viable conidia of Monilinia fructicola in flower and stone fruit combining propidium monoazide (PMA) and qPCR

Brown rot is the most economically important fungal disease of stone fruits and is primarily caused by Monilinia laxa and M. fructicola. Conventional methods used to identify M. fructicola are mainly based on phenotypic characteristics and pathogen quantification is not always accurate. In contrast, methodologies based on molecular tools improve pathogen characterization and identification but are not able to differentiate between live and dead conidia. In this study the PMA‐qPCR methodology was optimized, validated and applied to quantify viable cells of M. fructicola in artificially and naturally infected samples. qPCR methodology showed good primer efficiency and sensitivity with quantification limits lower than obtained using a plate count method. The conditions of propidium monoazide (PMA) pretreatment were 60 μm PMA for 20 min incubation and 30 min of light‐emitting diode (LED) exposure that, combined with qPCR, measured live cells accurately without overestimation of dead cells. Using this methodology in naturally infected samples, M. fructicola live cells were quantified specifically, in contrast to other traditional methodologies that cannot distinguish among Monilinia spp. The developed methodology based on combined PMA‐qPCR will be a new tool to quantify viable M. fructicola in further epidemiological and ecological studies of this fungus.     

Effect of ensiling and in sacco digestion on the viability of seeds of selected weed species

The germinability and viability of mature seeds of five grass (Hordeum spp., Bromus diandrus, Vulpia spp., Avena fatua and Lolium rigidum) and seven broad‐leaved weed species (Echium spp., Physalis hederifolia, Solanum elaeagnifolium, Raphanus raphanistrum, Marrubium vulgare and Malva parviflora) that were either untreated, ensiled for a minimum of three months, underwent 48 h in sacco digestion in steers or ensiled prior to digestion were tested for germinability and viability. Ensiling and digestion both reduced seed viability, although the extent varied with species. The effect of ensiling was generally greater compared with digestion and differed between years for some species. Ensiling or ensiling plus digestion rendered all seeds of Hordeum spp., B. diandrus, Vulpia spp., A. fatua, Echium spp., P. hederifolia (in one year only), S. elaeagnifolium, R. raphanistrum and M. vulgare non‐viable; ensiling and ensiling plus digestion reduced viability of L. rigidum by 74.4% and 92.7% respectively. Viability of M. parviflora displayed the greatest tolerance to damage, with seed viability reduced on average by 31.4%, 27.6% and 27.4% for ensiling, digestion and ensiling plus digestion treatments respectively. These results indicate that ensiling can provide an effective non‐chemical weed management option, as a component of an integrated weed management package, for certain weed species responsible for significant crop and pasture production losses in Australian and world temperate and Mediterranean agricultural systems.     

球孢白僵菌孢子萌发促进剂的筛选及其对杀蚜效果的增强作用

以生物学相容性较好的聚乙二醇辛基苯基醚为乳化剂,从五大类生化营养基质中筛选出海藻糖、葡萄糖、蛋白胨、酪氨酸和菜籽油作为孢子萌发促进剂的基本成份,采用5因子正交旋转组合设计并实施了36个组配试验以优化配方。将所获孢子萌发促进剂加入球孢白僵菌(Beauveria bassiana)孢子乳悬液中喷雾接种桃蚜(Myzus persicae)无翅成蚜,在20℃和12L:12D的条件下饲养并逐日观察发病死亡数。所获数据经时间-剂量-死亡率模型模拟分析,桃蚜接种后第4～6天为死亡高峰,在10~6～10~8个孢子/ml的浓度下喷雾处理6天后的累计死亡率为62.9％～88.7％,LT_(50)估计值为3.8～4.8天,接种后第4、5和6天的LD_(50)估计值分别为3.75×10~7、3.73×10~5和2.08×10~5个孢子/ml。在连续6天的观察中,接种成蚜日均产若蚜数比对照分别下降了40.7％～85.0％,下降幅度随孢子乳悬液浓度提高而增大。这些结果表明,以上孢子萌发促进剂具有作为球孢白僵菌孢子制剂添加剂的应用潜力。     

叶甜菜种子发芽特性的研究

研究了不同化学药剂和植物激素浸种处理及种球色泽、粒径、储藏时间等对叶甜菜种子发芽的影响。研究表明,用一定浓度的双氧水、硼酸、磷酸二氢钾浸种处理叶甜菜种子,可提高种子发芽率、发芽势与发芽指数,其中以10g/kgH2O2、0.5g/kgH3BO3和5g/kgKH2PO4处理效果最好。赤霉素处理(10、30、50、70、100mg/L)叶甜菜种子,促进种子发芽的效果不明显。吸湿-回干处理对叶甜菜种子发芽有良好的促进作用。叶甜菜种球色泽、粒径大小与发芽的关系密切,黄色或黄褐色的种球比黑色或褐色种球及大、中粒种子比小粒种子发芽力显著;叶甜菜种子不耐贮藏,发芽力下降较快,使用年限仅为1a。     

小麦白粉菌分生孢子离体后存活时间与温度的定量关系研究

<正>小麦白粉病是我国小麦生产上的重要病害之一,由专性寄生真菌Blumeria graminis f.sp.tritici引起。此病害是典型的气传病害,病菌分生孢子可借助高空气流远距离传播为害~([1]),高空传播距离与病菌的分生孢子存活时间有直接关系,而温度是     

橡胶树白粉病菌分生孢子在不同介质的萌发过程及其内容物的变化

 本研究采用不同的染色方法和显微技术观察橡胶树白粉病菌(Oidium heveae)分生孢子的超微结构,分生孢子在不同介质表面及不同介质溶液中的萌发情况,以及孢子萌发过程中孢内主要物质的变化,以明确O. heveae分生孢子在不同介质萌发的形态变化及萌发所需能量来源。结果表明：O. heveae 分生孢子表面具有较浅的花纹结构,呈椭圆形或者卵圆形,大小为26.1~45.1μm×13.5~21.9μm。O. heveae 分生孢子在亲水和疏水介质上均能萌发产生芽管和附着胞,在葡萄糖水中的萌发率略高于清水中,但萌发率无显著性差异 (P>0.05),芽管和附着胞形成与形态无明显差别。分生孢子萌发过程中,几个液泡会融合形成一个,最终消散而呈不明显可见的泡囊结构。孢子内的糖原、脂质及分裂后的核仁等可通过芽管向附着胞输送,表明O. heveae 分生孢子萌发所需能量物质主要来源于自身能量贮备。     

稻曲病不同抗性水稻品种的组织化学及分生孢子侵染途径的初步观察

 稻曲病菌分生孢子悬浮液对抽穗期水稻进行接种,观察分生孢子及其侵染途径.结果发现,分生孢子在颖壳表面可萌发形成菌丝,在颖口内侧可以见到菌丝伸向谷颖内部,可能为分生孢子直接侵染稻穗提供了一定证据.对抗、感品种谷粒的组织化学研究结果表明:抗病品种的颖壳中含有大量的木质素,感病品种中的木质素较少;在抗病品种谷粒的颖壳中的红色荧光物质远远多于感病品种;在抗病品种谷粒表皮的胚乳细胞中也含有多酚类物质,这层细胞较正常细胞大,在感病品种中没有发现.稻曲球切片的紫外光观察可发现每一个稻曲球中存在6个"蝴蝶"型荧光结构,染色剂染色后观察证明该结构不含过氧化物酶、单宁类物质、木栓质和木质素.