宜兴百合脱毒技术

1997～2000年以宜兴百合为试材，对3种脱毒方法(茎尖培养、热处理结合茎尖培养、花药培养)进行研究。结果表明，珠芽经(50±1)℃热水处理40min，培养30d后，切取0.8～1.0mm茎尖培养的脱毒效果最好，脱毒率达100%；(38±1)℃热空气处理后切取茎尖培养也能提高脱毒效果。只有通过病毒鉴定的试管苗，方能用于生产。     

龙牙百合脱毒技术的研究

[目的]探讨生产脱毒龙牙百合种苗的最佳途径。[方法]以龙牙百合无菌小苗和小鳞茎为材料,研究了茎尖大小来源与成活率和脱毒率之间的关系,高温预处理、化学抑制剂病毒唑预处理等对其茎尖存活率和脱毒效果的影响。[结果]茎尖分生组织的大小与脱毒率呈负相关,分生组织越大,脱毒率越低,诱导率越高;高温对4种病毒的抑制作用依次为CMV、LSV、TBV、LRV;一定浓度的病毒唑可有效地使病毒钝化,提高脱毒率。单一的脱毒处理技术或难以完全脱除病毒或需要较长的时间。[结论]2种或3种脱毒技术的组合使用是生产脱毒龙牙百合种苗的首选方法。     

东方百合茎尖组培技术研究

[目的]研究东方百合索蚌（Sorboune）、元帅（Acapulco）、西伯利（Siberia）茎尖分生组织分化,生产脱毒种苗。[方法]利用MS培养基和外源激素,对东方百合品种进行茎尖组织培养。[结果]鳞片诱导小仔球的最适培养基为MS＋6-BA 1.0mg／L＋NAA 0.2mg/L。茎尖诱导和分化的最适培养基为MS＋6-BA 1.0mg／L＋NAA 0.5mg／L。[结论]在百合种球产业化生产中,该方法是获得百合复壮原种的主要手段。     

百合脱毒及病毒检测技术研究进展

百合是重要的观赏花卉，百合的繁殖主要通过无性繁殖方式进行，由于病害的侵染，常常造成植株体内的病毒积累。导致植株发生病毒病，最终严重降低百合植株的经济价值和观赏价值。因此，防止百合感染病毒病的应对策略是采用脱毒培养技术获得脱毒苗，并在各个生产环节进行严格的病毒检测。作系统地介绍了常用的脱毒技术——茎尖培养、珠芽培养、化学处理和热处理，以及主要病毒检测方法一指示植物法、电镜技术、酶联免疫法和分子生物学技术。     

茎尖培养及热处理技术在百合脱毒中的应用研究

针对目前百合花卉栽培存在病毒侵害、品种退化严重的状况,以东方百合"Tiber"品种经过初代培养的无菌苗为材料,采用茎尖培养结合热处理的脱毒方法进行脱毒试验,并在试验过程中采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测法对百合黄瓜花叶病毒(Cucumber mosaic virus,CMV)和百合潜隐病毒(Lilysymptomless virus,LSV)进行检测。证明了茎尖培养结合热处理的脱毒技术的可行性。试验结果表明,对于CMV的脱毒,仅用茎尖培养即可达到很好的脱毒效果。对于LSV的脱毒,茎尖培养结合30 min热处理的脱毒效果优于普通组织培养和茎尖培养。     

百合脱毒种苗工厂化快繁技术研究

以带有CMV病毒的亚洲百合栽培品种Elle的无菌植株为试验材料，进行直接剥取茎尖培养、茎尖培养与病毒唑处理相结合、热处理与茎尖培养相结合三种方法脱毒效率和茎尖成苗率的差异比较，结果表明，加热处理与茎尖培养相结合的方法是最有效的百合脱毒方法。对脱毒材料快速繁殖条件优化的研究表明，生长调节剂组合对百合愈伤组织分化和小鳞茎增殖有较大的影响，MS BA1．0mg／L NAA0．1mg/L最适宜愈伤组织分化；用MS BA0．5～1．0mg/L NAA0．2～0．5mg／L处理，小鳞茎增殖率最高；适当提高蔗糖浓度对鳞茎形成有促进作用，以8％～10％的效果较佳。     

百合组培球茎尖剥取技术研究

[目的]研究百合组培球茎尖剥取技术。[方法]对不同直径大小的组培球对百合剥取茎尖的影响及不同大小的茎尖对百合脱毒效果的影响进行研究。[结果]大于0.5 cm的百合组培球适合茎尖剥取;在组培球剥取茎尖过程中,剥取0.4~0.7 mm大小的茎尖适合百合脱毒的培养。[结论]为百合种球生产提供技术支撑。     

龙牙百合热处理及茎尖培养技术研究

以组织培养获得的龙牙百合小鳞茎为试验材料，研究了热处理方式、茎尖的剥取大小、培养基状态和蔗糖含量对小鳞茎生长膨大的影响。结果表明，热处理方式以白天40～42℃、夜晚35℃，处理60d较好；茎尖剥取大小为0．2～0．3mm时的成活率高；有利于提高分化率的最佳培养基为：MS 1．0mg／L NAA 2．5mg／L 2，4-D，小鳞茎膨大增重的最佳培养基为：Ms 1．0mg／L BA 0．2mg／L NAA 0．5mg／L 2，4-D 8％蔗糖，培养方式为液体振荡培养。     

东方百合综合脱毒技术研究

以带有百合无症病毒（LSV）、百合斑驳病毒（LmoV）的东方百合品种“sorbonne”种球为试验材料,分别进行热处理时间、茎尖切块大小、病毒抑制剂浓度三方面的试验。结果表明：种球在39℃（±1℃）恒温下处理15d,剥取茎尖切块大小为0．4～0．5mm,病毒抑制剂浓度为10mg／L时,脱除病毒效果最好。     

提高百合茎尖组织培养脱毒效率研究

以带有CMV病毒的东方百合栽培品种Siberia鳞茎为外植体,常规消毒后在MS BA 1.0 mg/L NAA 0.5 mg/L培养基中培养成苗,热处理后剥取较大的茎尖(0.4～0.6 mm)进行培养,待茎尖长成植株后再次剥取较大茎尖进行二次脱毒,经检测脱毒率可达80%.研究结果表明,茎尖二次脱毒培养方法简单,易于操作,脱毒率高.     

车前草花叶病毒衣壳蛋白的原核表达和多克隆抗体制备

为制备车前草花叶病毒(Plantago asiatica mosaic virus,PlAMV)衣壳蛋白(capsid protein,CP)及其多克隆抗体,采用RT-PCR方法从甘肃省种植的切花百合上克隆了PlAMV cp基因的部分序列,连接表达载体pET-28a(+),转化Escherichia coli BL21...     

食用百合脱毒快繁技术研究

食用百合(卷丹)鳞茎球经28～30℃高温催芽处理,剖取小于0.2 mm的微生长点,接种在培养基MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA 0.1 mg/L,经3～4 d暗培养后,转光培养30～40 d,经启动、增殖,扩繁成脱毒无性系.经酶联免疫吸附法检测,无病毒率达100%.无病毒百合再生鳞茎球的鳞片在MS+6-BA 0.8 mg/L+NAA0.1 mg/L条件下,诱导丛生芽的效率最高;且使用该培养基,丛生芽增殖率最高.培养基糖浓度提高到10%时,再生鳞茎球的诱导率最高;NAA浓度为0.1 mg/L时具有最佳的鳞茎球诱导效果.     

甘薯茎尖脱毒及组培快繁技术

[目的]研究甘薯茎尖分生组织的分化培养基配方及快繁培养的影响因素。[方法]以甘薯茎尖作为外植体,总结出茎尖分化培养前的灭菌方法,筛选出适宜的分化培养基配方、快繁培养基配方以及影响快繁的各因素。[结果]75%的乙醇30 s+0.1%升汞10 min能取得较好的灭菌效果,降低污染率;适宜的茎尖分化培养基配方为:MS+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L NAA+0.25 mg/L GA3+10 mg/L病毒唑;快繁培养基配方为:Ms+0.1~0.2 mg/L NAA+2 mg/L泛酸钙;适宜的糖用量为30 g/L;培养条件为温度28℃、光照强度2 000lx、光照时间16 h/d时脱毒苗茎段生根较快,侧芽萌发后节间适中,有利于提高繁殖系数。[结论]为脱毒苗工厂化生产提供技术支持。     

百合病毒脱除技术研究

为了探究生产脱毒百合种球的最佳途径,通过对5种百合进行茎尖切块大小、热处理方式以及病毒唑浓度三方面的试验,探茎尖培养、茎尖培养结合热处理、茎尖培养结合病毒唑、茎尖培养加热处理结合病毒唑4种方法对LVX,CMV,LSV 3种病毒的脱除效果。结果显示:综合考虑存活率和脱毒率,单纯的茎尖培养难以脱除病毒,3种方法结合脱毒的效果最好。即茎尖培养(0.5～0.8mm)加热处理(变温热处理)结合病毒唑(10mg/L)的方法脱除病毒的效果最好。     

龙牙百合茎尖脱毒快繁及种球培育技术

当龙牙百合鳞茎在58℃下处理10~20 min,再在40℃下处理72 h;茎尖大小为0.2~0.4 mm时的诱导成活率达60%~66.7%。继代增殖培养基为MS 1.0 mg/L BA 0.1 mg/L NAA时,其增殖系数是3.36。培养基中4.5%~5.5%的食用糖和60 d的培养时间利于鳞茎数量和质量的增加。移栽后的小鳞茎培育8个月可达鲜重22 g/个以上的脱毒种球。     

龙山卷丹百合黄瓜花叶病毒的检测

以龙山卷丹百合的病叶为试材,采用DAS-ELISAS检测法对样品进行百合黄瓜花叶病毒的检测,检出率为75%;提取总RNA为模板,通过RT-PCR扩增其外壳蛋白基因大小为514 bp,和预期条带大小一致。经Blast比对发现,该基因片段与Genbank上发表的CMV CP基因序列同源性达96.7%。     

利用愈伤组织培养和茎尖培养去除甘蔗花叶病毒

用甘蔗心叶愈伤组织和茎尖组织培养进行花叶病脱毒，供体发病率为１００％，而愈伤组织培养和茎尖培养后代的发病率分别为０和４．６％。本文还就分蘖数、有效茎数、株高、茎径和锤度等进行了剖析，并采用主成分分析法对群体进行综合评价，作为选种的理论依据。     

栝蒌脱毒苗组培快繁技术体系研究

对栝蒌脱毒苗组培快繁技术体系进行了研究。剥取0.2 mm大小经人工接种CMV的栝蒌植株茎尖培养,经RT-PCR检测,能近100%的脱除CMV,获得了脱毒栝蒌苗。以脱毒栝蒌苗带腋芽的茎段为材料,于MS+6-BA 2.0 mg/L培养基中培养,可使栝蒌以侧芽丛生方式实现继代和增殖;3叶以上的栝蒌小苗,采用1/2MS+NAA 0.2 mg/L配方生根培养基,可使栝蒌产生健壮根系,20～30℃移栽于珍珠岩基质苗床,成活率高于90%。剪取苗床中3～4叶侧枝或茎尖扦插于珍珠岩苗床,生根率90%,可大幅度降低脱毒苗扩繁费用。1 a以上大田栝蒌侧枝或顶芽扦插成活率极低,不能进行扦插繁殖。大规模生产试验表明,脱毒繁殖的栝蒌种苗在生长势、单株结果数等方面呈现明显优势。