猪胎儿卵母细胞发生早期的细胞凋亡变化

为研究猪卵母细胞发生早期卵巢上细胞的凋亡情况,制作妊娠33、40、46、54、61 d母猪胎儿卵巢的石蜡切片,并进行荧光染色。结果发现,母猪妊娠到33 d时,胎猪卵巢上即可见原始生殖细胞和卵原细胞的凋亡,随着妊娠时间的延长,凋亡也逐渐增加,妊娠33、40、46、54和61 d母猪胎儿卵巢上卵原细胞的凋亡率分别为3.13%、4.32%、5.50%、9.43%和11.10%,同时,颗粒细胞的凋亡率则分别为8.89%、12.45%、14.74%、17.96%和22.81%。结果说明,在猪胎儿卵母细胞发生早期,即开始发生了卵原细胞和颗粒细胞的凋亡,且有逐渐增加的趋势。     

二花脸猪卵巢卵泡形成和早期发育过程中雌二醇和孕酮含量变化及其受体定位

为了研究雌二醇(E_2)和孕酮(P_4)在猪卵巢卵泡形成和早期发育过程中可能的作用,本试验以胎70日龄、90日龄和新生1日龄3个阶段的母猪为试验动物,通过免疫组织化学方法对胎猪和新生仔猪卵巢组织中的雌二醇受体(ER)和孕激素受体(PR)进行定位分析。通过放射免疫测定法对胎猪和新生仔猪的卵巢组织和血清中E_2及P_4含量进行测定,并分析E_2和P_4水平与猪的卵泡形成的相关性。结果显示:在猪早期阶段卵巢中ER主要在卵巢表皮细胞,卵母细胞巢中的卵原细胞和卵母细胞,以及原始卵泡、初级卵泡和次级卵泡的卵母细胞和颗粒细胞的核中表达,PR主要在卵巢表皮细胞,卵母细胞胞核,原始卵泡和初级卵泡的颗粒细胞的核中表达;随着胎龄的增加,卵巢中的E_2和P_4水平下降,并且与卵泡的形成和发育呈负相关。说明出生前猪卵巢组织中的E_2和P_4含量变化可能影响猪卵巢卵泡的形成和早期发育。     

不同生理时期小鼠卵巢的Ghrelin定位研究

研究生长素(Ghrelin)在青春期、妊娠期、哺乳期和泌乳后期小鼠卵巢上的定位,采用免疫组化PV-9000二步法观察Ghrelin在卵巢上的分布。Ghrelin阳性细胞主要分布于4个生理时期小鼠卵巢的卵母细胞、间质细胞、髓质和黄体细胞上。但表达强度和分布范围不同,妊娠期8d黄体与哺乳期18d的卵巢髓质呈强阳性表达。妊娠8d的小鼠卵巢的生殖上皮细胞出现阳性表达。Ghrelin在小鼠卵巢青春期、妊娠期、哺乳期和泌乳后期时期均有表达,妊娠期黄体呈强表达,揭示Ghrelin可能对小鼠不同生理时期尤其是妊娠有一定的调节作用。     

PCV2对仔猪胸腺IL-2、IL-6和IL-10及其受体mRNA的影响及NO-NOS系统的调控

为了解猪圆环病毒Ⅱ型(porcine circovirusⅡ,PCV2)引起仔猪免疫抑制的机制,研究了胸腺中抗感染免疫相关基因的动态表达变化及其调控机制.选取19头PCV2和猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)血清抗体阴性的普通断奶仔猪,分为对照组(4头)和试验组(15头),试验组每头仔猪接种PCV2病毒悬液,分别在感染后0、14、21和35 d扑杀采集胸腺.用硝酸还原酶法检测一氧化氮(NO)的含量,用比色法检测总一氧化氮合酶(TNOS)和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的活性,用TQ-PCR方法检测胸腺中IL-2、IL-6、IL-10及其受体mRNA的表达变化.结果显示:感染猪胸腺中TNOS和iNOS的活性在试验期间均显著高于对照猪(P＜0.05),NO含量在感染后14 d极显著升高(P＜0.01),IL-2和IL-6 mRNA的表达在感染后各时间点均低于对照猪,尤其在感染后21 d均极显著降低(P＜0.01);IL-10 mRNA的表达在感染后14 d极显著升高(P＜0.01);IL-6和IL-10与各自受体mRNA的表达变化均呈显著负相关(P＜0.05),NO与iNOS mRNA呈显著正相关(P＜0.05).研究表明:胸腺在感染早期表现出较强且适度的抗PCV2感染的免疫应答,感染中期呈现一定的免疫抑制,感染后期有所恢复;胸腺中细胞因子及其受体与NO-NOS系统的相互调节表现出复杂性与多层次性.     

早期流产大鼠子宫中IL-18和NF-κB及iNOS的表达

[目的]检测了早期流产、正常妊娠和非妊娠大鼠子宫中白细胞介素-18(Interleukin-18,IL-18)、核转录因子(Nuclear factor-kappa B,NF-κB)及诱导型一氧化氮合酶(Inducible nitric oxide synthase,iNOS)的分布与表达,探讨IL-18、iNOS和NF-κB的表达与流产的关系.[方法]采用阴道涂片法将经过自然交配的大鼠分为流产组、正常妊娠组和非妊娠组3组,每组10只.流产组大鼠于妊娠第7天和第8天分别灌服米非司酮4 mg/(kg·d).各实验组大鼠均于交配后第9天处死,取子宫,切片,免疫组织化学SP法染色后进行图像分析.[结果]IL-18、NF-κB和iNOS在正常妊娠组、非妊娠组和流产组大鼠子宫腔上皮细胞、腺上皮细胞、子宫基质细胞或蜕膜细胞、子宫肌层平滑肌细胞及部分血管内皮细胞中均有表达.与正常妊娠组相比,流产组大鼠子宫中IL-18和iNOS的表达极显著减弱(P<0.01),NF-κB表达极显著增强(P<0.01),血管内皮细胞和平滑肌细胞中IL-18、NF-κB和iNOS的表达均极显著增加(P<0.01).[结论]IL-18、NF-KB和iNOS的异常表达可能与流产有关.     

藏猪内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因的表达与低氧适应分析

为了解内皮型一氧化氮合酶(eNOS)在动物体内催化产生一氧化氮(NO),对动物低氧适应的重要作用,选取饲养在西藏林芝地区(海拔约3 000m)的藏猪、大约克猪(高原大约克猪)和饲养在北京(海拔约100m)的大约克猪(低地大约克猪),屠宰并采集心肌、肝脏和肺脏组织,采用荧光定量PCR技术测定eNOS基因的表达量。结果发现,高原藏猪、大约克猪和低地大约克猪在肝脏和肺脏中eNOS的总体表达量分别比心脏中要高1 000和400倍;在心脏中,高原藏猪和高原大约克猪eNOS基因的表达量均高于低地大约克猪的4.0和2.6倍(P<0.01),但是在肝脏和肺脏中的表达量却相反。大约克猪从低地移居高原,心肌组织eNOS表达量增加了2.6倍,但肝脏和肺脏组织中eNOS表达量分别下降了1.6和1.1倍。结果表明,藏猪eNOS基因表达量与低地大约克猪和移居高原的大约克猪存在差异,且在心肌、肝脏和肺脏组织表现不同,可能对其低氧适应起不同的调节作用。     

克氏原螯虾雌性生殖系统发育及组织结构观察

采用外观解剖观察和组织学方法,对克氏原螯虾雌性的生殖系统发育及组织结构进行了研究。结果表明:克氏原螯虾的雌性生殖系统由卵巢、输卵管组成,卵巢呈"Y"型;卵巢发育早期分布有卵室,分化生殖卵原细胞。卵子发生经历卵原细胞、卵黄合成前卵母细胞、卵黄合成期卵母细胞及成熟期卵母细胞4个时相;克氏原螯虾卵巢发育期可分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期(又分为早、中、晚期)、Ⅳ期、Ⅴ期5个时期。卵质内含有滑面内质网、致密小颗粒物质、线粒体,参与卵黄颗粒的合成。将卵巢呈黑色、卵黄充满卵母细胞、细胞核消失、卵母细胞与滤泡细胞分离等特征作为克氏原螯虾成熟的标志。克氏原螯虾个体性腺发育不同步,每年产卵1次,群体每年存在两个产卵高峰期,一个在9~10月份,另一个在4~5月份。     

高血压对大鼠脑内一氧化氮合酶表达量的影响

目的观察高血压对大鼠脑内一氧化氮合酶表达量的影响。方法分别取高血压大鼠和正常大鼠各3只,全身灌注,取脑,制成石蜡切片,分别用HE染色、亚甲基蓝染色、免疫组织化学方法观察高血压大鼠和正常大鼠脑内神经元形态及一氧化氮合酶的表达量。结果高血压大鼠脑内海马区、黑质区和纹状体区一氧化氮合酶表达量均低于正常大鼠,且差异显著,p0.05。结论高血压可导致大鼠脑内部分脑区一氧化氮合酶表达量下降。     

克氏原螯虾雌性生殖系统发育及组织结构观察

采用外观解剖观察和组织学方法,对克氏原螯虾雌性的生殖系统发育及组织结构进行了研究。结果表明:克氏原螯虾的雌性生殖系统由卵巢、输卵管组成,卵巢呈"Y"型;卵巢发育早期分布有卵室,分化生殖卵原细胞。卵子发生经历卵原细胞、卵黄合成前卵母细胞、卵黄合成期卵母细胞及成熟期卵母细胞4个时相;克氏原螯虾卵巢发育期可分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期(又分为早、中、晚期)、Ⅳ期、Ⅴ期5个时期。卵质内含有滑面内质网、致密小颗粒物质、线粒体,参与卵黄颗粒的合成。将卵巢呈黑色、卵黄充满卵母细胞、细胞核消失、卵母细胞与滤泡细胞分离等特征作为克氏原螯虾成熟的标志。克氏原螯虾个体性腺发育不同步,每年产卵1次,群体每年存在两个产卵高峰期,一个在9¹0月份,另一个在410月份,另一个在4⁵月份。     

蒙古绵羊胎儿卵巢发育的组织学研究

对37-99 d胎龄的蒙古绵羊胎儿卵巢进行组织学观察。结果表明,绵羊胎儿在37 d,可以从外观上分辨雌雄,雌性胎儿的性腺初步出现卵巢的组织学特征;37-51 d为卵原细胞的共质体期,卵原细胞数量增长加快;55~76 d卵巢中逐渐充满大量的合胞体样卵母细胞群;从58 d开始卵巢皮质深层出现少量的形态不典型的原始卵泡。胎龄73 d时,皮质深层出现真正的原始卵泡;81 d时皮质中层出现大量原始卵泡;99 d时皮质深层中可看到一些初级卵泡。与成体卵母细胞相比,胎儿时期的生殖细胞有活跃的增殖分裂特征;生殖细胞发育按卵原细胞增殖→卵母细胞分化→形成原始卵泡的步骤发育,在位置分布上由卵巢皮质外层逐渐向皮质里层分步发育。     

黄连素调节eNOS/NO保护软脂酸诱导的HUVECs损伤作用机制研究

目的：研究黄连素对软脂酸诱导人脐静脉内皮细胞（ HUVECs）损伤的保护作用,并初步探讨其作用机制.方法采用500μmol/L软脂酸培养HUVECs 24 h,建立内皮细胞损伤模型,MTT法观察黄连素对细胞存活率的影响;检测细胞培养上清液中一氧化氮（ NO）含量;RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合酶（ eNOS） mRNA水平;Western blot方法检测eNOS和磷酸化eNOS蛋白的表达.结果与对照组比较,软脂酸组细胞存活率降低（ P〈0.05）,培养液中NO含量下降（P〈0.05）,细胞内eNOS mRNA水平、eNOS及磷酸化eNOS蛋白表达水平均显著下降（P〈0.01,P〈0.05）.与软脂酸组比较,黄连素组细胞存活率增加,培养液中NO含量明显提高（P〈0.05）,细胞内eNOS mRNA水平和磷酸化蛋白表达水平均显著提高（P〈0.01,P〈0.05）.结论黄连素对软脂酸引起的血管内皮细胞损伤有显著的保护作用,并可能与上调eNOS、促进NO生成有关.     

Calorie restriction promotes mitochondrial biogenesis by inducing the expression of eNOS

Calorie restriction extends life span in organisms ranging from yeast to mammals. Here, we report that calorie restriction for either 3 or 12 months induced endothelial nitric oxide synthase (eNOS) expression and 3',5'-cyclic guanosine monophosphate formation in various tissues of male mice. This was accompanied by mitochondrial biogenesis, with increased oxygen consumption and adenosine triphosphate production, and an enhanced expression of sirtuin 1. These effects were strongly attenuated in eNOS null-mutant mice. Thus, nitric oxide plays a fundamental role in the processes induced by calorie restriction and may be involved in the extension of life span in mammals.     

中性粒细胞淋球菌感染模型的建立

目的 研究诱导型一氧化氮合酶（iNOS）及一氧化氮（NO）在中性粒细胞淋球菌感染模型中的表达。方法分离正常人外周血中性粒细胞,在10％胎牛血清DMEM培养液上培养3h,A组加入空白培养基,B组加入淋球菌菌液,随后在0、3、8、12h分别以实时定量荧光PCR测定iNOS mRNA表达,用镉还原法检测NO浓度。结果B组中iN08mRNA表达和NO水平均较A组升高（P〈0．01）,NO浓度在8h达到高峰。结论中性粒细胞淋球菌感染模型可成功模拟该菌体内微氧感染环境,可用于研究淋球菌致病机制。     

兔颈总动脉球囊损伤后17β-雌二醇介导iNOS及NO对血管新生内膜增殖抑制的作用

目的探讨诱导型一氧化氮合酶（iNOs）及一氧化氮（NO）对17β-雌二醇抑制兔颈总动脉球囊损伤反应中新生内膜及中膜增殖的影响。方法在去势雌性兔中建立右颈总动脉球囊损伤模型,实验分为假手术组（sham）、单纯去势组（Ovx）、去势后球囊损伤组（OYX＋Inj）、去势球囊损伤后补充雌激素组（OVX＋Inj＋E2）。分别检测各组血管壁新生内膜及中膜的厚度、血浆中NO含量、血管组织中iNOS含量及活性。结果与sham组相比,OVX＋Inj组血管组织新生内膜增厚,中膜增生明显,血浆中NO含量及血管组织中iNOS活性降低,E2（estrogen）补充治疗后,可明显增加NO含量及i—NOS活性;westernblot结果显示,OVX＋Inj组iNOS蛋白表达明显降低,而雌激素替代治疗后iNOS蛋白表达显著增加。结论E2可通过增加血管组织iNOS活性及蛋白表达,促进NO合成,抑制血管损伤后新生内膜及中膜增殖,发挥其血管保护作用。     

半滑舌鳎组织器官中一氧化氮含量和一氧化氮合酶活性的测定

[目的]研究半滑舌鳎不同组织器官中一氧化氮（NO）含量和不同类型一氧化氮合酶（NOS）活性。[方法]采用Griess试剂法测定NO含量,采用化学比浊法测定NOS的活性。[结果]诱导型一氧化氮合酶（iNOS）在肌肉组织中活性最高,为28.774±4.10 U/mgprot,依次为肠、脑、肝脏、头肾、鳃、中肾、脾脏、心脏。肠和脑之间以及肝脏和头肾之间iNOS的活性不存在显著性差异,而其他组织器官之间iNOS的活性都存在显著性差异。结构型一氧化氮合酶（cNOS）在肠组织中活性最高,为55.979±5.048 U/mgprot。所测组织器官中cNOS活性都存在显著性差异。NO含量在脾脏中最高,为38.540±4.535μmol/L。脾脏、头肾、肝脏之间,以及脑、心脏、中肾之间NO含量不存在显著性差异,而其他组织器官之间NO含量都存在显著性差异。[结论]不同组织器官中NO含量和NOS活性不同,这可能与组织器官功能有着密切联系。     

金钗石斛多糖对脂多糖诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌TNF-α·NO的影响

[目的]研究金钗石斛多糖对脂多糖（LPS）诱导的小鼠腹腔巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、一氧化氯（NO）的影响。[方法]用不同浓度金钗石斛多糖作用于小鼠腹腔巨噬细胞,LPS作为诱导剂,采用放射免疫法检测细胞培养液中TNF—α的含量,硝酸酶还原法测定细胞培养液中NO的含量,荧光法测定细胞内诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的活性,实时PCR（real—time PCR）法测定TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达。[结果]与LPS组比较,金钗石斛多糖在50～400mg／L范围内可干预LPS对小鼠巨噬细胞的作用,使小鼠腹腔巨噬细胞TNF—α、NO合成减少,iNOS活性降低。TNF-α mRNA、iNOS mRNA的表达降低。[结论]金钗石斛多糖可改善LPS对小鼠腹腔巨噬细胞的作用,使TNF—α mRNA、iNOS mRNA的表达降低,TNF—α、NO合成减少,从而起到抗炎的作用、     

猪苓多糖对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成、iNOS活性和细胞内还原型谷胱甘肽含量的影响

目的 :观察猪苓多糖 (PPS)对小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮 (NO)生成及其免疫调节作用和抗肿瘤作用机制。方法 :采用Griess反应、荧光法和DTNB比色法分别测定不同剂量的PPS作用小鼠腹腔巨噬细胞的NO生成量、诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)活性及细胞内还原性谷胱甘肽 (GSH)含量的变化。结果 :PPS能使小鼠腹腔巨噬细胞NO生成增加 ,i NOS活性增高 ,并呈作用剂量依赖关系 ;PPS在刺激小鼠腹腔巨噬细胞NO合成同时 ,伴有细胞内GSH水平的降低 ,呈负相关 (P <0 .0 5 )。结论 :PPS能提高小鼠腹腔巨噬细胞iNOS活性 ,增加NO合成 ,消耗细胞内的GSH。提示细胞内GSH可能起到调节巨噬细胞NO生成和保护宿主细胞免受NO介导的细胞毒作用     

抑制p38MAPK活化对脓毒症大鼠肺部及血管组织中iNOS及NO合成的影响

目的通过抑制MAPK通路活化,观察其对脓毒症大鼠组织和血清诱导型一氧化氮合成酶(iN-OS)及一氧化氮(NO)合成的影响以及循环变化.方法大鼠脓毒症模型采用经典的盲肠结扎穿孔术(cecalligation puncture,CLP),将SD大鼠随机分为正常对照组、假手术组、CLP脓毒症组和SB203580治疗组.采集组织和血清并测定组织iNOSmRNA表达水平,NO检测试剂盒(酶法)检测组织和血清NO含量;同时分别监测上述各时间点的脉搏和平均动脉压.结果与正常组大鼠相比,CLP后各时间点脓毒症大鼠肺、血管和血清iNOS mRNA、NO含量均升高明显;而MAP下降明显、脉搏明显升高(P<0.05,P<0.01).治疗组与CLP组相应时间点相比,iNOSmRNA表达在肺和血管多个时间点降低;而肺和血管及血清NO含量下降;血压和脉搏均显著好转(P<0.05,P<0.01).相关分析显示:血管和肺组织iNOSmRNA与NO的相关系数分别是0.75和0.74;肺、血管组织iNOS mRNA与血清NO的相关系数分别是0.69和0.65(P<0.05),MAP与血管、肺和血清NO的相关系数分别是-0.85、-0.86和-0.90(P<0.05).结论抑制MAPK通路活化可抑制脓毒症大鼠血浆和组织iNOSmRNA及NO合成,并改善循环功能.     

中药饮水剂对感染球虫后雏鸡血清一氧化氮及其合成酶的影响

为了进一步探讨中药饮水剂的抗球虫作用机制,将120只14日龄海兰褐蛋公雏,随机分为对照组(I)、感染组(Ⅱ)和中药饮水剂组(Ⅲ),每组40只。除I组外,其余每只鸡口服感染8.0×104个E.tenella孢子化卵囊,分别于感染0、3、6、9、12 d后,每组随机取鸡5只,心脏采血,用于血清一氧化氮(NO)及其合成酶(iNOS)的测定。结果表明,在感染后3 d,各组血清NO含量和iNOS活性无显著差异(P>0.05);在感染高峰期(6 d),Ⅲ组血清NO含量及iNOS活性较Ⅱ组分别降低了36.17%和14.25%,差异极显著(P<0.01),与Ⅰ组比较无显著差异(P>0.05);至感染后9 d,虽然Ⅲ组血清NO含量及iNOS活性与Ⅱ组差异不显著,但仍较其降低了12.53%和13.51%;至感染后12 d,Ⅱ组血清NO含量及iNOS活性基本恢复正常水平。结果提示:中药饮水剂通过抑杀球虫,以减少炎性因子的释放,抑制宿主细胞内iNOS活性及表达,降低血清NO含量。     

Inducible nitric oxide synthase binds, S-nitrosylates, and activates cyclooxygenase-2

Cyclooxygenase-2 (COX-2) and inducible nitric oxide synthase (iNOS) are two major inflammatory mediators. Here we show that iNOS specifically binds to COX-2 and S-nitrosylates it, enhancing COX-2 catalytic activity. Selectively disrupting iNOS-COX-2 binding prevented NO-mediated activation of COX-2. This synergistic molecular interaction between two inflammatory systems may inform the development of anti-inflammatory drugs.