家蚕胚胎培养细胞的扫描电镜和透射电镜观察

用扫描电镜和透射电镜对家蚕胚胎培养细胞进行形态学和组织学观察，细胞为圆球形，表面凹凸不平，细胞质中含有大型的颗粒。     

紫外线诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1的凋亡研究

UVB诱导家蚕胚胎细胞BmE-SWU1不同时间后,用四氮唑盐法(MTT)和Hoechst染色及DNA-Ladder法分别检查BmE-SWU1细胞的增殖活性和凋亡情况.该实验研究了紫外线诱导对家蚕胚胎细胞BmE SWU1凋亡的影响,建立了紫外线诱导家蚕细胞凋亡的简单模型,为家蚕变态发育过程中细胞凋亡的研究奠定了基础.结果表明:UVB处理家蚕BmE-SWU1细胞后,细胞增殖活性随着照射剂量的增加而逐渐降低;光学显微镜下可见细胞膜表面突出或出现小泡,经Hoechst染色后,凋亡小体在荧光显微镜下清晰可见,细胞DNA电泳条带呈梯形分布,这是凋亡细胞典型的生化特征.     

从早期胚胎分离和培养兔胚胎干细胞

采用昆白系小鼠成纤维细胞（MEF）作为饲养层，低糖DMEM 10%NBS 10%FSC 10ng/mLLIF 10ng/mLSCF 0.1mmol/Lβ-巯基乙醇 100IU/mL青霉青 80IU/mL链霉素作培养基，从培养96h的胚胎中分离出1个兔类ES细胞集落，克隆传至4代，悬浮培养的兔类ES细胞团，可出现囊状胚，兔类ES细胞接种在衰老的饲养层上，出现滋养层细胞和上皮样细胞。     

粘虫胚胎细胞继代培养条件的研究

对粘虫胚胎细胞的继代培养条件进行了研究。结果表明,ＴＣ－１００（ＳＩＧＭＡ）培养基最适合细胞生长。不同血清浓度和ｐＨ的培养基对细胞生长影响很大,以１０％小牛血清浓度和ｐＨ６．２的培养基对细胞传代培养最为适宜。细胞生长依赖于细胞接种密度,以 ５×１０~５细胞／ｍＬ细胞接种密度对细胞生长最为适宜。适于细胞培养的最适温度范围是２６－２９℃。     

紫花苜蓿体细胞胚胎发生及其细胞组织学观察

通过对紫花苜蓿（ Ｍｅｄｉｃａｇｏ ｓａｔｉｖａ Ｌ．）外植体愈伤组织进行诱导及对体细胞胚胎发生过程的组织学观察,得出以下结果：１）外植体在 Ｍ Ｓ附加１．０ｍ ｇ／ Ｌ６－ Ｂ Ａ 和１０．０ｍ ｇ／ Ｌ Ｉ Ａ Ａ 的培养基上愈伤组织生长良好,而愈伤组织转入 Ｍ Ｓ附加５００ｍ ｇ／ Ｌ水解酪蛋白的培养基中胚状体的分化能力较强。２）紫花苜蓿的体细胞胚大多是由单个具胚状体发生能力的胚性细胞发育而来,发育过程与合子胚的发育过程相似。在早期原胚发育过程中胚体外一直包围有厚壁。原胚时期和子叶胚时期出现两次淀粉积累现象。     

家蚕脂肪体原代培养中各种形态细胞的观察

取家蚕4~5龄幼虫背部脂肪体,采用胰蛋白酶消化和组织块贴壁法进行离体培养,观察脂肪体细胞在体外培养过程中的变化。结果表明,家蚕脂肪体细胞在原代培养过程中出现了一批具有各种形态的脂肪前体细胞,细胞间呈管道状或网状排列等,可在体外培养条件下繁殖。最后这些细胞充满油滴后陆续死亡。该观察结果可为进一步探讨家蚕脂肪体细胞的分化及脂类代谢调节机制提供实验条件。     

昆明小鼠单细胞胚胎体外培养的研究

本试验研究了葡萄糖、EDTA和小鼠血清对昆明小鼠单细胞胚体外发育的影响.结果发现:不含葡萄糖HECM-1组桑椹率为40.05％,对照组为8.14％;含EDTA的CZB组桑椹率为61.18％,对照组为47.44％;小鼠血清对昆明小鼠单细胞胚体外发育无促进作用。可见,葡萄糖抑制昆明小鼠单细胞胚胎体外发育;在不含葡萄糖的条件下,EDTA支持小鼠早期胚胎体外发育;无论有无葡萄糖小鼠血清对小鼠早期胚体外发育无促进作用。     

家蚕脂肪体原代细胞的有丝分裂观察

取家蚕4～5龄幼虫背部脂肪体,采用胰蛋白酶消化法,在28℃,pH 6.4～6.8的条件下,用Grace培养基辅以20%的标准胎牛血清进行家蚕脂肪体细胞原代培养.原代细胞培养6个月后.现察到了家蚕脂肪体细胞的3种有丝分裂过程及其特征.     

家蚕脂肪体原代细胞的有丝分裂观察

取家蚕4-5龄幼虫背部脂肪体,采用胰蛋白酶消化法,在28℃,pH6.4-6.8的条件下,用Grace培养基辅以20%的标准胎牛血清进行家蚕脂肪体细胞原代培养.原代细胞培养6个月后,观察到了家蚕脂肪体细胞的3种有丝分裂过程及其特征.     

Molecular Systematic Studies on Chinese Mandarina Silkworm (Bombyx mandarina M. ) and Domestic Silkworm (Bombyx mori L.)

Molecular systematic studies on mandarina silkworm (Bombyx mandarina M. ) in 11 regions in China and 25 representative strains of domestic silkworm (Bombyx mori L. ) were conducted using molecular biology techniques. Results obtained from the analysis of DNA polymorphism and clustering of all the silkworm samples provide new evidence for the view that the domestic silkworm originated from the Chinese mandarina silkworm. On the basis of literature reviewing, a new hypothesis on the origin of the domestic silkworm was put forward. It was thought that the domestic silkworm was most probably domesticated from the Chinese mandarina silkworm of different ecotypes including monovoltinism, bivoitinism and multivoitinism; and that the domestic silkworm had the genetic background of monovoltinism, bivoltinism and multivoltinism at the very beginning of the domestication. The current strains of the domestic silkworm of different voltinism are the evolutionary results of thousands of years of rearing and artificial selections.     

中国野桑蚕和家蚕的分子系统学研究

 用分子生物学手段对11个地区的野桑蚕（Bombyx mandrina）和25个代表性家蚕（Bombyx mori）品种进行了分子系统学研究。野桑蚕与家蚕的DNA多态分析及其聚类分析结果进一步证实家蚕起源于中国野桑蚕。同时结合有关文献,作者提出了家蚕起源进化的新观点:家蚕可能是由多种生态类型（包括一化、二化、多化）混杂的野桑蚕驯化而来,其驯化之初就已拥有一化、二化、多化的遗传背景,其后几千年的人工饲养、选择才分离演化成为不同系统化性的家蚕品种。     

家蚕的RAPD及其品种间差异

采用ＲＡＰＤ技术对家蚕基因组ＤＮＡ进行多态性研究，分析了各供试品种材料之间的遗传差异。结果表明，ＲＡＰＤ能反映各基因组之间丰富的多态性，聚类分析所得的各供试品种材料之间的亲缘关系和常规遗传分析的结论相一致。因此，认为ＲＡＰＤ可以作为家蚕分类及系统学研究的一种方法．     

对家蚕高毒力白僵菌菌株的筛选

白僵蚕是一种药用价值较高的中药药材,为选出人工生产白僵蚕的最佳菌株,以分离的5株白僵菌菌株为材料,以营养生长量、产孢量和致病力等生物学指标进行比较筛选。结果表明,不同菌株的各个指标均存在差异,其中B07-2营养生长量最快,产孢量最高,10 d内对家蚕的致病率为98.18%。综合比较,B07-2为生产白僵蚕的最佳接种菌株,它对家蚕的致死中时LT50为5.09 d,致死中浓度LC50为2.69×106孢子.mL-1。     

家蚕生物钟基因Bmtim2的克隆与序列分析

[目的]为进一步研究家蚕生物钟基因的功能提供依据。[方法]从家蚕品种p50未受精卵提取总RNA,利用快速扩增cDNA末端(RACE)技术克隆家蚕生物钟基因Bmtim2cDNA序列。最后运用实时定量RT-PCR对该基因在家蚕不同发育时期的表达情况进行初步分析。[结果]利用RACE扩增,获得长度为1867bp、包括完整3'非翻译区的家蚕生物钟基因timeless2(Bmtim2)cDNA序列。经推导,获得该基因序列编码的584个氨基酸残基的蛋白质序列。该蛋白序列具有TIM蛋白的C末端保守区,与黑腹果蝇、尖音库蚊的TIM2基因具有近缘进化关系。Bmtim2基因在家蚕生活周期各时点均有表达。[结论]该结果对研究Bmtim2基因在家蚕发育过程的时空表达差异及其与日周节律的关系具有参考价值。     

家蚕Bombyx mori L.染色体的G带组型研究

以今井的涂片法制备染色体标本,采用GUG法进行G-带分染,研究了家蚕早双线期染色体的组型。依照染色体相对长度及带型鉴别了家蚕28对染色体,并绘制了染色体组型模式图。利用限性普斑系统W 染色体上的易位片断作标识,观察到不对称配对二价体,推论此异形二价体即性染色体。性染色体在14—16染色体范围内。     

环境激素２，４－二氯苯酚对家蚕生殖发育的影响

为了探讨环境激素对鳞翅目昆虫的影响,用添加2,4-二氯苯酚(2,4-DCP)的人工饲料饲养家蚕,调查2,4-DCP对家蚕生殖发育的影响.结果显示,1.60mmol·kg~(-1)以下浓度的2,4-DCP,对幼虫和蛹的卵巢生长有促进作用(P<0.05);1.60mmol·kg~(-1)的2.4-DCP对5龄后期快速生长阶段的卵巢表现出抑制作用,但在蛹期卵巢的生长获得补偿.高浓度的2,4-DCP对幼虫期、蛹期卵细胞的生长和发育有一定的促进作用(P〈0.01).2,4-DCP对家蚕雄性生殖腺的生长、特别是5龄后期精巢的快速生长期表现出一定的抑制作用,在蛹期抑制作用表现十分强烈,1.60mmol·kg~(-1)的2,4-DCP使雄蛾蚕的精巢几乎完全退化.2,4-DCP使5龄幼虫的精细胞数量微弱减少,至蛹期精细胞和蛾期精子的数量则显著少于对照(P<0.01).1.60 mmol·kg~(-1)的2,4-DCP使雌蛾的产卵数下降到对照的20%,但造卵数比对照高1.3倍,0.80 mmol·kg~(-1)以上浓度的2,4-DCP使不受精卵率显著增高(P<0.05).2,4-DCP主要通过强烈抑制家蚕雄性生殖腺和生殖细胞的发育以表现出很强的雌激素效应.     

桑蚕卵中酯酶A_4的研究

取产后两天内25℃保存的桑蚕卵为材料,精制酯酶A_4。将滞育卵中精制的酶液置5℃下冷藏,冷藏初期酶活性极低,大致在12～13日达最大值。以后迅速降低,体外保存的温度条件与酯酶A_4活性有关,较高的保存温度能促使酶活性峰提早出现:而低温保护能延缓酶的活化进程。酯酶A_4精制过程中,通过Sephadex G-25凝胶过滤,将大部分物质分段与酶分离排除,在5℃条件下,酶活性峰出现以前的任何时候加入排除分段物质,都可以停止酶的活性化,只有当重新除去所加的排除分段物质时,酶的活性化进程才得以继续。     

家蚕茧质性状性连锁遗传相关分析

采用性连锁模型，分析了全茧量、茧层量、丝素量、茧层率、蛹重５个性状的基因加性效应、基因显性效应、性连锁效应、母体效应以及各基因与环境互作效应的相互关系，丰富了性状间相互关系的信息。