用单抗研究T细胞与牛流行性白血病发生的关系

本试验对10头患流行性白血病病牛的不同器官的肿瘤组织，用8种单克隆抗体（McAb),TH14B、BAQ44A、PIg45A、BIg715A、PIg501E、cAct105、MM1A、AHCC125染色进行了观察。结果：病牛经临床病理学和免疫琼扩试验而诊断为EBL，通过免疫组织化学检测，在10个病例中发现有9个病例的肿瘤组织对B细胞属性的McAb有很强的染色反应，证明其来源于B细胞。仅有1个病例对B细胞属性的McAb着色很淡，而对T细胞属性的McAb着色很深，呈强阳性反应，说明其来源可能与T细胞有关。     

T、B淋巴细胞功能对流行性牛白血病发生发展的影响

本文回顾了T、B淋巴细胞功能与牛白血病发生发展的相关性。阐明了感染BLV牛B细胞淋巴瘤细胞除了来源于Bla(CD5^ CD11b^ )细胞，也可来源于B1b(CD5^-CD11b^ )及常规B2（CD5^-CD11b^-)细胞。探讨了T细胞功能对牛白血病的发生发展的影响，指出IL－12表达下降和IL－10表达增加可能导致了B细胞淋巴肉瘤的形成，Ⅰ型和Ⅱ型细胞因子的不平衡引起了BLV的发展。同时讨论了B－T细胞的相互作用在BLV感染时疾病阶段性发展过程中的作用。     

T淋巴细胞亚类在地方流行性牛白血病牛外周血及脾脏中的分布

应用抗牛白细胞分化抗原单克隆抗体经免疫组织学方法及流体细胞计数器法对地方流行性牛白血病病牛（以下称牛白血病牛）,健康成年牛（以下称成年牛）及健康未成年牛（以下称未成年牛）的外周血和脾脏的Ｔ淋巴细胞亚类进行了分析。无论是在外周血还是脾脏,牛白血病牛和成年牛的Ｔ淋巴细胞亚类的百分率（ＣＤ３＾＋,ＣＤ４＾＋,ＣＤ８＾＋和ＷＣ１＾＋γδＴ淋巴细胞）均明显低于未成年牛。虽然牛白血病牛外周血中Ｔ淋巴细胞亚类的     

T淋巴细胞亚类在地方流行性牛白血病牛外周血及脾脏中的分布

应用抗牛白细胞分化抗原单克隆抗体经免疫组织学方法及流体细胞计数器法对地方流行性牛白血病病牛（以下称牛白血病牛）,健康成年牛（以下称成年牛）及健康未成年牛（以下称未成年牛）的外周血和脾脏的Ｔ淋巴细胞亚类进行了分析。无论是在外周血还是脾脏,牛白血病牛和成年牛的Ｔ淋巴细胞亚类的百分率（ＣＤ３＋,ＣＤ４＋,ＣＤ８＋和ＷＣ１＋γδＴ淋巴细胞）均明显低于未成年牛。虽然牛白血病牛外周血中Ｔ淋巴细胞亚类的百分率低于成年牛,但在脾脏却高于成年牛。这提示在脾脏存在一定程度的肿瘤免疫反应。病理组织学观察证实脾脏未见有滤泡增生,增生的肿瘤细胞主要见于红髓。因此认为脾脏不是牛白血病淋巴肉瘤的原发器官,肿瘤细胞是从外周血中转移而来。     

B亚群禽白血病病毒灭活疫苗的免疫效力分析

本研究旨在制备B亚群禽白血病的灭活疫苗,探索能否通过种鸡群疫苗免疫减少带毒率,从而加快禽白血病净化.将B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续培养复制大量病毒,制备灭活疫苗,用该疫苗免疫9只产蛋祖代鸡,同时设未免疫种鸡对照.收取种蛋孵化,对孵出雏鸡接种SDAU09C2,检测和比较有和无母源抗体鸡的病毒血症、泄殖腔p27、抗体动态.该疫苗在所有经免疫的成年鸡(9/9)诱发抗体反应,在三免后第3周产生的抗体水平最高,ELISA检测S/P值在1.69～1.89(阳性临界值为0.4),且维持4周以上后仍未下降.经过疫苗免疫过的母鸡在其抗体水平最高的前后1周内收集种蛋进行孵化,其雏鸡含母源抗体阳性率的在70％(12/17)左右.雏鸡1日龄攻毒,含母源抗体的12只雏鸡中只有4只检出病毒血症,且持续时间都很短.所有9只不含母源抗体的雏鸡在攻毒后4～8周内全部出现病毒血症,而且在观察期内呈现持续性病毒血症.该疫苗能使全部产蛋祖代鸡产生较高水平的特异性抗体,为雏鸡提供母源抗体,有效预防或减缓ALV-B的早期感染.     

牛白血病病毒对牛免疫系统功能影响的研究进展

哺乳动物的免疫系统主要包括体液免疫和细胞免疫.但目前大多数学者认为B淋巴细胞是牛白血病病毒的靶细胞,BLV不但能引起B淋巴细胞持续性增生,同时也能引起B淋巴细胞持续性减少.本文主要对BLV感染对牛B淋巴细胞的影响进行了阐述,同时探讨了T淋巴细胞在BLV感染牛发生的变化.     

乌拉圭牛地方流行性白血病传入风险分析

为评估乌拉圭牛地方流行性白血病(enzootic bovine leukosis,EBL)传入我国的风险,根据世界动物卫生组织(OIE)传入风险分析基本原理,从入境评估、暴露评估及后果评估三方面,对从乌拉圭传入EBL的风险进行分析.结果显示:从乌拉圭进口活牛、牛精液/胚胎、牛乳制品传入释放牛白血病病毒(bovine l...     

禽B型白血病病毒的分离及分子分型鉴定

从送检的骨石症蛋用种鸡中分离出一株禽白血病病毒(ALV)。剖检骨石症发病鸡,采集病变的肝脏、脾脏组织,提取病毒基因组,并利用针对ALV群特异性抗原P27基因设计的引物进行PCR快速检测确定为ALV感染。将病变组织接种SPF鸡胚绒毛尿囊膜,连续传代3次。进一步针对亚群间特异性抗原gp85区设计一对引物进行PCR扩增并酶切分析。结果确认分离到的1株病毒为ALV-B亚型。     

J亚群禽白血病多发性肿瘤的病理改变与POR检测

两个规模化商品蛋鸡场发病鸡群临床解剖显示：脚部和翅膀有血管瘤、肌肉组织内出现纤维肉瘤,肿大的肝、脾出现髓细胞瘤;经组织病理学观察符合J亚群禽白血病（ALV-J）的病理学特征。针对ALV—J保守序列P27基因设计特异引物,建立PCR方法,从出现病理改变的各组织脏器、各多发性肿瘤中以及血液中均检测到ALV-J,证实该病为以髓细胞瘤,血管瘤和纤维肉瘤为主的多发性肿瘤传染病。对扩增产物序列进行测定后,与原型株序列进行比较,核苷酸同源性为98．27％,从分子水平上证明为J亚群禽白血病,用PCR检测进一步验证J亚群禽白血病毒的感染机制和引起鸡群的病理改变。     

B亚群禽白血病病毒SDAU09C2株的TCID50与p27抗原之间的相关性研究

为了研究B亚群禽白血病病毒(ALV-B)的半数细胞培养物感染量(TCID₅₀)与p27抗原的酶联免疫吸附试验(ELISA)的S/P值之间的相关性,本试验将ALV-B SDAU09C2 株接种鸡胚成纤维细胞(CEF细胞),换维持液后连续10 d取样,检测10 d的TCID₅₀值与p27抗原的S/P值之间的相关性;同时,将该毒株在DF-1细胞系上传代至20代,取其中的第1、5、10、15和20代分别进行TCID₅₀滴度的测定和p27抗原检测。结果表明,在CEF细胞上接种的ALV-B SDAU09C2株连续10 d的TCID₅₀值与p27抗原之间存在显著的正相关(r=0.94002;P<0.0001);在DF-1细胞系上传的不同代数之间也呈显著正相关(r=0.96449;P=0.0080)。由此可推测ALV-B的TCID₅₀与p27抗原呈显著正相关,可以用ELISA法测得的p27抗原的S/P值来估测病毒的TCID₅₀值。     

七彩山鸡F亚群禽白血病病毒的分离与鉴定

为了解广东某七彩山鸡种禽场禽白血病流行情况,通过接种DF-1细胞、ELISA抗原检测、聚合酶链式反应(PCR)、囊膜基因克隆测序等方法分离并鉴定出两株ALV-F,分别命名为FGD1801和FGD1802。为进一步了解分离株遗传进化特点,利用PCR方法扩增出env基因并测序,同时与各亚群参考毒株的gp85核苷酸序列进行对比。结果显示:这两个分离株env基因gp85片段长度都为1080 bp,预计编码360个氨基酸,FGD1801和FGD1802分离株gp85基因核苷酸序列的相似性为92.8%,与A、B、E、J和K亚群共26株ALV参考毒株相似性在47.0%~64.5%之间,而与F亚群参考株的相似性在92.0%~92.5%,显著高于其他亚群,且位于同一进化分支上。研究表明,从七彩山鸡分离的FGD1801和FGD1802属于ALV-F,是我国华南地区新发现的ALV亚群。     

J亚群白血病的病理学观察及基因分析

内蒙古某肉种鸡场40周龄种鸡发生肿瘤性疾病，死淘率15％；经病理组织学检查，增生的肿瘤为典型的髓细胞瘤，因此怀疑此病是J亚群白血病。取病鸡肝电镜观察，在肝细胞胞浆膜下见有圆形的类病毒粒子存在；将肝病料处理后接种于鸡胚成纤维细胞(CEF)，经电镜观察，可见正出芽的病毒粒子。为进一步确诊，以ALV-J原型株HPRS-103囊膜gp85基因为基础设计特异性引物，以感染的CEF基因组DNA为模板，体外扩增(PCR)gp85基因，结果获得了924bp的相应片段。将PCR产物进行分子克隆和序列测定，结果表明，内蒙古地区ALV-Jgp85蛋白的推测氨基酸与ALV-J原型株HPRS-103、山东SD9901株、美国ADOL-R5-4株及内源性病毒EAV-HP的gp85蛋白的氨基酸同源性分别为97.40％、95.13％、86.69％和85.06％，其中与HPRS-103的同源性最高，与EAV-HP同源性最低。因此可以确定本研究所克隆的基因为ALV-Jgp85基因，暂命名为ALV-J-NM8761。     

禽白血病J亚群病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用

本研究旨在通过荧光定量PCR方法研究禽白血病J亚群病毒(ALV-J)在家禽体内各个器官的分布。根据ALV-J NX0101毒株基因5 258—5 510bp的碱基序列,设计了1对特异性引物,进行RT-PCR反应,扩增产物为253bp,将该产物连接T载体作为Real-time PCR反应的标准品,利用SYBR Green I染料进行Real-time PCR反应,建立了标准曲线,并进行反应灵敏性,特异性和重复性试验。然后用已建立的方法对人工感染ALV-J的SPF鸡心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、胸腺、法氏囊、腺胃进行3次重复检测,将Ct值带入标准曲线公式得出各个组织的病毒拷贝数。试验结果表明:标准曲线线性关系R值均为0.991 4,检测极限约为81拷贝质粒DNA,比RT-PCR灵敏100倍以上;特异性分析表明只有ALV-J能检测到特异性的熔解度峰值;批内和批间重复性试验的变异系数均小于5%。通过比较数值以得出胸腺ALV-J基因含量是最高的,肺脏、脾脏、法氏囊含量也比较高,心脏拷贝数最低。自然感染发病鸡各器官ALV-J基因均高于人工感染ALV-J的基因含量。本研究所建立的ALV-J基因实时荧光定量RT-PCR方法灵敏度高、特异性强、检测周期短,初步探讨了禽白血病J亚群病毒在畜禽体内各个器官的病毒分布。这为以后禽白血病的诊断以及治疗提供了重要的技术支持。     

env基因对J亚群禽白血病病毒体外感染和复制能力的影响

为探讨env基因对J亚群禽白血病病毒(subgroup J avian leukosis virus,ALV-J)体外感染和复制能力的影响,本研究利用反向遗传方法构建重组病毒,将血管瘤病变型ALV-J HN06株中env元件替换至髓细胞瘤病变型ALV-J NX0101株的相应位置,成功构建了重组质粒pNX-HNenv。重组毒株能在DF-1细胞上稳定增殖,并能被JE9特异性单抗识别,证明获得了具有感染性的重组病毒NX-HNenv株。结果显示,同一亚群内env基因的替换对病毒的体外感染和复制能力无明显影响。     

禽白血病病毒J亚群(ALV-J)基因表达与抗原定位的研究

本研究通过原位杂交(ISH)和免疫组织化学(IHC)技术检测了组织中ALV-J病毒RNA的表达及定位。原位杂交结果显示：在攻毒后3周时．所检测到的组织大部分已感染病毒；病毒对肝脏、心脏、肾脏的实质细胞、骨髓髓系细胞和卵巢基质中的间质细胞、脾脏红髓内的单核-巨噬细胞有较高的嗜性．在核膜及胞浆内显示出蓝紫色颗粒状的特异性信号，而在法氏囊、胸腺、脑和坐骨神经中检测不到病毒RNA及病毒基因的表达。免疫组化结果与原位杂交相似，在核膜及胞浆内可见蓝紫色阳性信号．瘤组织的信号较强，显示了较强的抗原性。由骨髓和其他组织的结果可推测ALV-J诱导肿瘤可能和病毒基因的插入位点有直接关系，而和病毒在组织内的数量没有直接关系。