禽网状内皮组织增殖病琼脂免疫扩散抗原的研制及应用

禽网状内皮组织增殖病（ＲＥ）琼脂免疫扩散抗原为淡粉以液体，具有良好的特异性，与抗鸡马立克氏病，鸡传染性氏囊病，禽白血病，鸡传染性贫血病，鸡新城疫病毒标准阳性清不发生交叉反应，抗还具有良好的敏感性，在实验室对人工感染ＲＥＶ和ＳＰＦ鸡７天即可检出抗体，检出率为４０％，１４天检出率为１００％，抗原在３７℃保存７天，在１５℃保存１５天，在４℃保存３０天，在一－２０℃至少保存１８０天，未见效价下降，用本抗原     

鸡传染性鼻炎ＰＣＲ和阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒的研制与应用

用鸡传染性鼻炎ＰＣＲ试剂盒可直接检测病料中的病的ＤＮＡ、可测出１pg的DNA和１０^2-10^3个细菌，这可疑病料的检出率是传统的细菌分离方法的２－３倍，可重复性好，特异性为１００％，在４℃可保存１２个月，在－２０℃可保存１５个月。阻断ＥＬＩＳＡ试剂盒可检测副鸡嗜血杆菌型特异性抗体，其种特异性为１００％，重复性好，试剂盒在３７℃可保存７d以上，４℃可保存１０个月，－２０℃可保存１年以上，用两个诊断试剂盒检验１５５份可疑病料、２１９１份血清，ＰＣＲ的阳性率为３２．３％；Ａ型抗体阳率为２７．４％，Ｃ型抗体阳性率为１１．５％。     

应用琼脂扩散试验诊断禽脑脊髓炎的研究

应用琼脂扩散试验证明,制备的禽脑脊髓炎病毒(AEV)抗原具有良好的抗原特异性。人工感染AEV后10天的鸡血清,100％呈现阳性反应。感染后120天,抗体效价仍可达到1∶64。该抗原与鸡支气管炎、新城疫、鸡马立克氏病、鸡传染性喉气管炎及腺病毒等感染鸡的血清均不发生交叉反应。     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原，建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１：６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１：３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测，接种后４天时均呈阴性反应，７天时８只鸡呈阳性反应，１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、     

麻雀自然感染鸡传染性法氏病病毒的调查

从鸡传染性法氏囊病流行的鸡场捕杀麻雀５４只，用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体夹心阻断ＥＬＩＳＡ检测抗体，阳性检出率为７．４％；以逆转录－聚合酶链反应检测病毒核酸，阳性检出率为１１．１％；ＲＴ－ＰＣＲ阳性样本病毒分离亦为阳性。结果表明；ＩＢＤ流行的鸡场里的麻雀能够发生ＩＢＤＶ自然感染，麻雀可能是ＩＢＤＶ的贮存宿主或二次传染源之一。     

用反向间接血凝抑制试验检测传染性法氏囊病血清抗体

利用扬州大学农学院畜禽病原微生物研究室提供的传染性法氏囊病单克隆抗体致敏红细胞，用反向间接血凝抑制试验检测传染性法氏囊病血清抗体。试验表明：反向间接血凝抑制试验具有很高的特异性，能被传染性法氏囊病抗原特异性地阻断，且不与鸡马立克氏病、白血病、传染性脑脊髓炎、减蛋综合征、新城疫等血清出现交叉反应。该法敏感性比琼脂扩散试验高２８倍，检出率高约６０％。与琼脂扩散试验的相关系数为０．９４００。用此法测定雏鸡母源抗体，测得雏鸡于１３～１５日龄时母源抗体降至免疫临界线     

Dot-ELISA检测副鸡嗜血杆菌血清抗体的研究

本研究建立了检测副鸡嗜血杆菌特异性抗体的Ｄot－ＥＬＩＳＡ方法,结果证明,本方法不与８种常见病原体产生交叉反应,对人工感染和临床病鸡的检出率为８０％,抗原预点膜在４℃可保存５周以上,采用抗原预点膜进行检测可使整 个过程在９０分钟内完成,因此本方法是一种具有较高敏感性和特异性,并且更加快速和简便的鸡传染性鼻炎诊断方法。     

北京地区鸡群网状内皮组织增殖病感染的血清学调查研究

本文通过制备纯化的禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和ＳＰＦ鸡抗ＲＥＶ的特异血清,成功地建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,首次对北京地区种鸡群ＲＥＶ的感染情况进行了血清学调查。对有疑似临床症状的鸡作重点采样,从７个鸡场１１２份血清样品中检出５４只阳性鸡,阳性率为４８．２％。从１１个鸡场随机抽样２０４份,检出阳性鸡２８只,阳性率为１３．７％。结果发现,雏鸡、中鸡的感染率较成鸡低,祖代鸡的感染率较父母代低。感染情况似乎与鸡的品种无关。大多数感染鸡群显示不出该病的临床症状或明显的生产障碍。试验结果表明,间接ＥＬＩＳＡ方法检测ＲＥＶ血清抗体,具有简便易行、敏感性高、特异性强、重复性好等优点,可作为检测ＲＥＶ血清抗体的比较理想的方法     

应用间接免疫荧光法检测禽网状内皮组织增生病病毒抗体的研究

用禽网状内皮组织增生病病毒（ＲＥＶ）感染ＳＰＦ鸡胚次代成纤维细胞涂片为抗原,建立了检测ＲＥＶ抗体的间接免疫荧光法（ＩＦＡ）。确定了待检血清稀释度１∶６４和兔抗鸡ＩｇＧ荧光抗体的稀释度１∶３２的工作浓度。应用该ＩＦＡ方法对人工感染ＲＥＶ的２０只３０日龄ＳＰＦ鸡进行了检测,接种后４天时均呈阴性反应,７天时８只鸡呈阳性反应,１４天２０只全部呈阳性的反应。通过对ＮＤＶ、ＩＢＤＶ、ＡＬＶ、ＭＤＶ、ＣＩＡＶ、ＡＩＶ等标准阳性血清的交叉试验,证明该方法特异性强。应用该ＩＦＡ方法对我国辽宁、山东、黑龙江省部分鸡群进行ＲＥＶ抗体检测,证明该方法特异性强、敏感性高,适于在生产中推广应用。     

用双抗体夹心ELISA法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

应用鸡病毒性关节炎病毒Ｕ．Ｃｏｍ Ｓｕｎ株，建立了检测鸡病毒性关节炎病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法。用该法检测三组接毒鸡的关节液，接毒后３天即可检出阳性，阳性率为５８．３％；发病严重的４￣１１天阳性检出率达９５．７％；１４天阳性率为５０％；１７天阳性率为３１．３％；２０天以后则全部为阴性。用该法对大肠杆菌、葡萄球菌、败血支原体、滑膜支原体、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性脑脊髓炎病毒进行检     

法氏囊病毒污染鸡场附近麻雀自然感染法氏囊病毒的初步调查

从传染性法氏囊病流行的鸡场捕杀麻雀３０只，用鸡传染性法氏囊病病毒单克隆抗体类心阻断ＥＬ１ＳＡ检测抗体，阳性检出率高为１０％（３／３０）；以逆转录一聚合酶链反应检测病毒核酸，阳性检出率为１３．３％；ＲＴ－ＰＣＲ阳性样本病毒分离亦为阳性。     

鸡传染性鼻炎单抗阻断ELISA诊断试剂盒的研究

本研究在单抗阻断ELISA方法的基础上成功地建立了鸡传染性鼻炎阻断ELISA诊断试剂盒,结果证明,本盒具有较子的敏感性、特异性和重复性,在对临床病鸡、人工感染鸡和免疫鸡的检测中,A型检出率可高达75％-90％,C型的检出率也可达到60％。试剂盒在37℃可保存7天以上,4℃可保存10个月,-20℃可保存1年以上。是一种适合推广应用的良好的鸡传染生鼻炎诊断产品。     

北京地区鸡群网状内皮细胞增殖病感染的血清学调查研究

本文通过制备纯化的禽网状内皮组织增殖病病毒（ＲＥＶ）和ＳＰＦ鸡抗ＲＥＶ的特异血清,成功地建立了间接酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）,首次对北京地区种鸡种ＲＥＶ的感染情况进行了血清学调查,对有疑似临床症状的鸡作重点采样,从７个鸡场１１２份血清样口检出５４只阳性鸡,阳性率为４８．２％。从１１个鸡场随机抽样２０４份,检出阳性对外开放２８只,阳性率为１３．７％。结果发现,雏难、中鸡的感染率率较在成鸡低,祖低     

禽脑脊髓炎琼脂扩散沉淀抗原制备与应用的研究

应用禽脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）Ｖａｎ Ｒｏｅｋｅｌ株和内蒙古禽脑脊髓炎（ＡＥ）自然病鸡分离毒株分别接种鸡胚，制出ＡＥ琼扩沉淀抗原。经经验和部分鸡场应用结果表明，该抗原具有良好的特异性。抗原效价为１：３２，可检出不同日龄、品种和不同发病期的人工感染鸡和自然发病鸡血清中的ＡＥ抗体，结果可靠，方法简便，可以推广应用。     

二种方法检测猪传染性胃肠炎病毒抗体的比较

分别用血清中和试验和单克隆抗体阻断酶联免疫吸附试验对８１头美国进口猪轿清作猪传染性胃肠炎抗体检测。ＳＮ试验同７份阳性血清，检出率为８．６４％，Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清，检出率为８．６４％，无ＴＧＥ阳性。ＳＮ试验检出７份ＴＧＥ抗体阳性血清与Ｂ－ＥＬＩＳＡ试验检出的７份ＰＲＣＶ抗体阳性血清完全重合。结果证明，应用单克隆抗体进行的Ｂ－ＥＬＩＳＡ可鉴别诊断ＴＧＥ与ＰＲＣＶ感染，优于Ｓ     

病鸡血清中鸡传染性贫血病病毒DNA的PCR扩增及抗体的ELISA检测

根据鸡传染性贫血病病毒（ＣＡＶ）的基因结构，设计并合成一对限制扩增长度为０．６８ｋｂ的ＰＣＲ引物．直接对临床可疑病鸡的血清进行靶ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增．在不同地区的３批样品中，有２批扩增出一二分子量接近０．７ｋｂ的单一特异性ＤＮＡ片段．用限制酶ＢｇｌⅡ消化ＰＣＲ产物．可获得分子量分别为０．３３ｋｂ和０．３５ｋｂ两个ＤＮＡ片段，其酶切位点与靶ＤＮＡ的相吻合．将ＰＣＲ扩增为阳性的病料接种６日龄ＳＰＦ鸡胚，并取其１８日龄胚肝和由接种鸡肛孵出的雏鸡的血清重新进行ＰＣＲ扩增，结果均为阳性，而同期对照胚肝及雏鸡血清为阴性．此外还用胚胎时接种过病料的雏鸡肝、脾和胸腺等组织抽提液作抗原，建立了检测ＣＡＶ血清抗体的ＥＬＩＳＡ方法．研究结果提示，用ＰＣＲ直接对病鸡血清中ＣＡＶＤＮＡ的扩增以及ＣＡＶ抗体的ＥＬＩＳＡ检测是快速和特异的．它为鸡传染性贫血病（ＣＩＡ）的流行病学调查、实验室诊断、ＣＡＶ毒株的分离和鉴定提供了必要的检测手段．     

用双抗体夹心ELISA法检测鸡病毒性关节炎病毒的研究

应用鸡病毒性关节炎病毒Ｕ．ＣｏｎｎＳ１１３３株，建立了检测鸡病毒性关节炎病毒抗原的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法。用该法检测三组接毒鸡的关节液，接毒后３天即可检出阳性，阳性率为５８．３％；发病严重的４～１１天阳性检出率达９５７％，１４天阳性率为５０％；１７天阳性率为３１．３％；２０天以后则全部为阴性。用该法对大肠杆菌（Ｅ．ＣｏＬｉ）、葡萄球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、败血支原体（ＭＧ）、滑膜支原体（ＭＳ）、新城疫病毒（ＮＤＶ）、传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）、传染性脑脊髓炎病毒（ＡＥＶ）进行检测，结果均为阴性。试验表明，我们建立的双抗体夹心ＥＬＩＳＡ法，能早期、特异、敏感地检出鸡病毒性关节炎病毒抗原，从而解决了对该病早期诊断及类症鉴别带来的困难。     

鸡传染性法氏囊病诊断试剂盒的研制

采用鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）病毒（ＩＢＤＶ－２５１２）研制了检测ＩＢＯＶ抗体的ＥＬＩＳＡ试剂盒。抗原最佳包被浓度为５．１２μｇ／ｍｌ，被检血清最佳稀释度为１：２００，酶标结合物最佳工作浓度１：１０００．本试剂盒与美国ＫＰＩＩＢＤ－ＥＬＩＳＡ试剂盒比较，结果敏感性、特异性、重复性均达到美国同类产品水平，且易于操作．在４℃可稳定保存６个月、对北京地区４个非免疫鸡群的１０３只鸡测得其阳性率为５４％，对４５只ＳＰＦ鸡的阳性率为０％。     

禽脑脊髓炎病毒琼扩抗原的制备及其在评价鸡群抗体水平中的应用

以标准的禽脑脊髓炎病毒ＶＲ毒株和分离的野毒株分别感染ＳＰＦ鸡胚，取其病料组织制成琼脂扩散抗原。在含２０％ＮａＣｌ和０．５％苯酚的０．８％琼脂凝胶中，用这种抗原以琼脂扩散试验检测ＡＥ抗体，结果稳定，特异性强，方法简使迅速。     

鸡传染性支气管炎间接血凝试验方法的研究

间接血凝试验对鸡传染性支气管炎的诊断,具有高度的敏感性及特异性。对人工感染鸡在感染10天后可100％检出;血清抗体价可达512倍;感染后经60天,抗体价不见下降。经用新城疫、马立克氏病及喉气管炎等多种鸡的传染病的阳性血清鉴别试验证明有明显的特异性。因此,认为该方法可以用于鸡传染性支气管炎的血清学诊断。试验证明了从国内分离的IBV上海株及杭州株病毒与美国M-F_3-E_5株病毒的血清型相同。试验并研究了抗原的制备方法,证明抗原可以冻干保存。