本生烟草愈伤组织的诱导和再生体系的建立

以本生烟草为材料,研究了不同激素组合对本生烟草愈伤组织诱导和植株再生的影响。结果表明:当本生烟草叶片在MS+1.0 mg/L 2,4-D+0.2 mg/L KT培养基中培养时,其出愈率最高,愈伤组织生长状况最好;在MS+1.5 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽生长最快,但存在一定程度的玻璃化现象;MS+3.0 mg/L 6-BA+0.1 mg/L NAA培养基中不定芽长势较慢,但玻璃化程度较轻;对于生根诱导,MS、1/2MS培养基都可诱导不定根的产生,但NAA对根的生长更有效。     

甘菊遗传转化再生体系的建立

[目的] 建立高效稳定的甘菊再生体系,并确定卡那霉素和草丁膦的筛选压。[方法] 以甘菊无菌苗叶片为外植体,通过添加不同浓度的NAA和6-BA建立了甘菊遗传转化再生体系。[结果] 在5种芽诱导培养基中,MS3（MS＋NAA 0.1mg/L＋6-BA0.1mg/L）的再生频率最高,可达98%,其不定芽生根率可达100%。培养35d后,添加5和10mg/L卡那霉素的培养基上甘菊再生率为11.3%和10%,添加15和20mg/L卡那霉素的培养基上没有芽的分化;添加0.5mg/L草丁膦的培养基上甘菊再生率为8.7%,添加1mg/L草丁膦的培养基上没有芽的再生,添加1.5和2.0mg/L草丁膦的培养基上没有芽的分化。卡那霉素和草丁膦在甘菊遗传转化中的筛选浓度分别为8.0和0.8 mg/L。[结论] 该研究为进行甘菊转基因试验打下了基础。     

3个烟草品种愈伤组织诱导的比较

[目的]研究不同品种烟草在不同培养基上愈伤组织的诱导情况。[方法]以烟草HY-9-7、云烟97和K326的幼嫩叶片为材料,分别在MS＋2,4-D 2.0 mg/L＋KT 0.2 mg/L和MS＋NAA 2.0 mg/L＋6-BA 2.0 mg/L培养基上诱导愈伤组织,选出愈伤组织诱导率最高的烟草品种和最优培养基。[结果]MS＋2,4-D 2.0 mg/L＋KT 0.2 mg/L是诱导烟草愈伤组织的理想培养基;K326在最优培养基上诱导率最高,愈伤组织生长状态最好。[结论]为烟草基因工程的研究和种质资源的创新提供理论支撑。     

转基因马铃薯内源农杆菌脱除

[目的]解决采用抗生素抑菌导致转基因马铃薯植株生长与分化受到抑制的问题。[方法]利用转基因植株诱导试管微型薯,由试管微型薯抽枝获得转基因脱菌植株。[结果]参试3个马铃薯品种中,SⅠ、SⅡ最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋6-BA0.5mg/L＋GA30.1mg/L＋cef150mg/L,NT最佳试管微型薯诱导培养基为MS＋ZT0.5mg/L＋GA30.1mg/L＋cef150mg/L;薯块抽枝最佳培养基为MS＋ZT0.5mg/L＋NAA0.1mg/L;薯块直径0.5-0.7cm抽枝数最高;转基因脱菌植株在无抗生素快繁培养基中经30d培养污染率为0,脱菌植株茎段粗壮,无分枝现象。[结论]建立的方法脱菌简单易行,为转基因个体的筛选和生长排除了障碍。     

铁线蕨孢子组织培养与快速繁殖研究

[目的]寻找铁线蕨孢子组织培养的适宜培养基,提高其繁殖效率。[方法]以铁线蕨附带成熟孢子的叶片为外植体进行组织培养,找出合适的萌发培养基、诱导培养基、增殖培养基、分化成苗培养基。[结果]铁线蕨孢子的最佳期萌发培养基为1/2MS＋活性炭0.5g/L,原叶体在培养基1/2MS＋BA2.5mg/L＋IBA0.1mg/L上可诱导出GGB,GGB在培养基1/2MS＋BA1.5mg/L＋IBA0.1mg/L上可不断增殖,在培养基1/2MS＋BA0.3mg/L＋IBA0.1mg/L上可以分化成苗,同时进行驯化移栽。[结论]该研究为铁线蕨快速繁殖提供了更有效的途径,并为生产企业的大规模种苗生产提供强有力的技术支持。     

转几丁质酶基因和β-1,3-葡聚糖酶基因烟草的研究

为选育出高抗真菌病害的烟草新品种，利用叶盘法，通过农杆菌介导，将来自芥菜和橡胶的抗真菌蛋白基因几丁质酶基因和β－1，3－葡聚糖酶基因转入烟草品种K326和红花大金元，在含卡那霉素的MS培养基（MS＋NAA0.1mg/L 6-BA1.0mg/L为芽诱导培养基，根诱导培养基为不含激素的MS）上进行不定芽和根诱导，共获耐卡那霉素再生苗101株，经PCR扩增检测，TB－1等57株呈阳性，即已在功导入外源目的基因，初步接种炭疽病菌和黑胫病菌结果表明，转基因植株后代具有良好的抗病能力。     

轮状病毒疫苗基因转化烟草的研究

以烟草叶片的切段为外植体,用含有轮状病毒疫苗基因的农杆菌浸泡5 min,然后共培养2 d,再转入MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA0.1 mg/L,添加100 mg/L卡那霉素和500 mg/L氨苄青霉素的筛选培养基上筛选,得到卡那霉素抗性苗32株。对其中的4株卡那霉素抗性苗进行PCR分子检测,结果表明,目的基因已经整合进烟草基因组中。     

勋章菊叶片再生技术的探讨

[目的]研究勋章菊叶片再生技术,筛选适合勋章菊叶片再生的最佳培养配方。[方法]以日本引进的勋章菊叶片为材料,置床于添加不同种类和浓度激素的MS培养基中进行愈伤组织和不定芽诱导的正交试验,筛选勋章菊叶片再生的最佳培养基配方。[结果]在MS＋TDZ（0.8-1.0 mg/L）＋NAA（0.05-1.0 mg/L）培养基上可形成紧密型绿色的愈伤组织;叶片接种于MS＋TDZ（0.5-1.0 mg/L）＋NAA（0.05-1.0 mg/L）培养基上可形成许多不定芽,诱导效率达100%;健壮的不定芽长至2.0-3.0 cm长时移至1/2 MS＋NAA（0.1mg/L）培养基中,其发根状况良好,生根率达100%。[结论]为勋章菊的高频快繁提供了新途径,并为勋章菊的遗传转化及培育新品种奠定基础。     

海石竹叶片的离体培养与植株再生

[目的]研究海石竹叶片的离体培养及植株再生。[方法]以MS为基本培养基,对海石竹叶片的尖端、中部和基部3个不同部位进行了愈伤组织诱导、丛生芽和根分化的研究。[结果]以叶片尖端作为外植体诱导愈伤组织效果最佳,叶片中部次之,叶片基部最差。MS＋6-BA 2.0 mg/L＋NAA 0.75 mg/L培养基诱导叶片尖端愈伤组织的效果最好,MS＋6-BA 4.0 mg/L＋NAA 0.25 mg/L培养基诱导叶片中部和基部的效果最好;MS＋6-BA 3.0 mg/L＋NAA 0.10 mg/L培养基诱导丛生芽的效果最佳;MS＋NAA 0.20 mg/L培养基诱导生根的效果最佳。[结论]建立了海石竹高效的离体培养及快速繁育体系,为其种苗的规模化、工厂化生产和其他后续的科学研究奠定了基础。     

派间杂种黑白杨组织培养和再生系统的建立

[目的]优化派间杂种黑白杨的再生和遗传转化体系。[方法]以黑白杨3种不同基因型组培苗叶片及茎段为材料,采用正交试验研究了不同激素配比、基因型及外植体状态对其生根、侧芽生长及愈伤组织再生的影响。[结果]1/2MS＋IBA0.4mg/L＋NAA0.1mg/L对黑白杨的4号基因型是最优的生根培养基;MS＋6-BA0.8mg/L＋NAA0.2mg/L是诱导黑白杨茎段侧芽生长的最优培养基;MS＋6-BA1.0mg/L＋NAA0.1mg/L是诱导黑白杨叶片再生不定芽生成的最适培养基。[结论]建立了完整的黑白杨再生体系。     

根癌农杆菌介导烟草K326遗传转化体系优化

[目的]优化根癌农杆菌介导烟草K326遗传转化体系。[方法]以烟草无菌苗的叶片为外植体,通过农杆菌介导法对其遗传转化体系进行了优化研究。[结果]外植体在MS＋2mg/L6-BA＋0.2mg/LIAA培养基上进行2d预培养后,用农杆菌GV3101（浸染浓度为OD600=0.6）浸染5min,转化效率最高,达63%;经过PCR检测初步证明nptII基因已整合到烟草再生植株中。[结论]该研究建立了高效烟草K326叶片农杆菌介导的遗传转化体系。     

根癌农杆菌介导烟草K326遗传转化体系优化

[目的]优化根癌农杆菌介导烟草K326遗传转化体系。[方法]以烟草无菌苗的叶片为外植体,通过农杆菌介导法对其遗传转化体系进行了优化研究。[结果]外植体在MS＋2 mg/L6-BA＋0.2 mg/L IAA培养基上进行2 d预培养后,用农杆菌GV3101（浸染浓度为OD600=0.6）浸染5 min,转化效率最高,达63%;经过PCR检测初步证明npt II基因已整合到烟草再生植株中。[结论]该研究建立了高效烟草K326叶片农杆菌介导的遗传转化体系。     

不同抗生素对矮牵牛叶片培养的敏感性试验

[目的]探讨不同抗生素对矮牵牛叶片再生的影响。[方法]以开花前顶部新展开的矮牵牛叶片为外植体,接种于添加不同抗生素(卡那霉素、头孢唑林钠和潮霉素)的基本培养基MS+2.0μg/ml BA+0.2μg/ml NAA上,研究不同抗生素对叶片再生的影响。[结果]20 mg/L卡那霉素、5 mg/L潮霉素可明显抑制矮牵牛叶片愈伤组织的形成和不定芽分化,而头孢唑林钠在400 mg/L以上时才会对不定芽分化产生不良影响。[结论]为建立矮牵牛的遗传转化体系提供了试验参考。     

烟草转硝酸还原酶基因高效遗传转化研究

通过对农杆茵介导烟草遗传转化方法的优化,建立了快速高效烟草叶盘遗传转化体系.用0D600为0.5的农杆茵悬浮液浸染大小约1.0 cm×1.O cm烟草叶盘5～10 min,再置于MS附加2.25 mg/L 6-BA和0.10 mg/LNAA的分化培养基上,在100 mg/L卡那霉素选择压下,21～28 d可获得抗性不定...     

红掌工厂化育苗关键技术研究

[目的]研究红掌工厂化育苗的关键技术。[方法]以红掌盆花和切花品种的叶片、叶柄、花苞片和花苞柱头为外植体,进行组培快速繁殖技术研究,探讨外植体的选择和消毒条件以及不同培养基对红掌愈伤组织的诱导、增殖和生根影响。[结果]叶柄为最佳外植体,愈伤诱导率最高,达78.3%;外植体采用0.1%HgCl2消毒8min的效果最好;粉冠军和MIDORI的最佳愈伤组织诱导培养基为1/2MS＋6-BA1.50mg/L＋KT1.00mg/L＋2,4-D0.10mg/L;最佳愈伤组织继代培养基为MS＋6-BA0.50mg/L＋KT0.50mg/L＋NAA0.10mg/L,添加10%的椰子汁或香蕉浆有利于增殖和丛芽生长,增殖率最高达2.83倍;最佳生根培养基为1/2MS＋NAA0.10mg/L＋IAA0.10mg/L,生根率达100%。[结论]该结果为红掌工厂化育苗体系的建立奠定了基础,对确保红掌产业的发展具有重要意义。     

烟草叶片原生质体制备及其在蛋白互作研究中的应用

[目的]获得高产量的烟草叶片原生质体.[方法]在前人的基础上,在酶浓度和酶解时间上,对简易大量制备本氏烟叶原生质体的条件进行了进一步的探索;并以此为基础,通过双分子荧光互补试验进一步研究了其在蛋白互作研究中的应用.[结果]在纤维素酶浓度为1.3％,离析酶浓度为0.4％,果胶酶浓度为0.3％,酶解4h,酶解温度28℃,并在简易纯化的条件下制备原生质体,所得到的完整原生质体产量最高,并且细胞碎片和杂质均最少.[结论]该方法为瞬时表达于本氏烟叶中的荧光蛋白研究提供了重要的技术参考.     

均匀设计法优化北五味子愈伤组织诱导培养基研究

[目的]优化北五味子愈伤组织诱导培养基。[方法]采用均匀设计法,以诱导率为主要考察目标,对北五味子愈伤组织生长的激素成分进行多因素多水平考察。[结果]叶片和叶柄的最佳培养基组合均为MS＋3.0 mg/L 6-BA;茎段为MS＋3.0 mg/L 6-BA＋0.6mg/L NAA。[结论]用均匀设计法优化愈伤组织诱导培养基省时、方便,且明显高于均匀设计试验方案中的诱导率。     

白花马蹄莲离体快繁技术研究

[目的]建立白花马蹄莲的离体快繁体系。[方法]选取白花马蹄莲球茎和叶片作为试验材料,采用组培法进行繁殖试验。[结果]接种前球茎的消毒时间以8 min为宜,叶片的消毒时间以4～6 min为宜,最佳球茎诱导分化培养基为MS+2.0 mg/L BA+0.1 mg/LNAA,最佳叶片诱导分化培养基为MS+1.0 mg/L BA+0.5 mg/L NAA;在相同的温度、湿度和光照条件下,应选择马蹄莲球茎作为培养材料;最佳增殖培养基为MS+1.0 mg/L BA;最佳生根培养基为MS+0.1 mg/L IBA;最佳移栽基质为珍珠岩∶蛭石∶草炭土∶沙子=2∶2∶4∶1;最佳移栽时期为生根培养后10～15 d。[结论]为白花马蹄莲的组织培养提供了参考依据。     

一品红组织培养条件优化

[目的]为培育出更优良的一品红,实现工厂化育苗。[方法]采用组织培养的方式,通过正交试验优化一品红培养基中植物生长调节物质（PGR）的浓度及配比。[结果]最佳外植体为绿色叶片,最佳培养基为MS培养基,最佳消毒时间7～9 min,初期诱导最佳碳源为3%蔗糖;诱导嫩叶产生愈伤组织的最佳培养基为MS＋1.00 mg/L6-BA＋0.10 mg/LNAA＋0.50 mg/L2,4-D;愈伤组织分化的最佳培养基为MS＋1.50 mg/L6-BA＋0.10 mg/LNAA＋1.50 mg/L2,4-D;丛生芽增殖的最佳培养基为MS＋1.00 mg/L6-BA＋0.10 mg/LNAA＋0.50 mg/L2,4-D;诱导生根最佳培养基为MS＋0.05 mg/LNAA。[结论]筛选出最佳的一品红培养基及其最佳PGR配比,为实现一品红工厂化育苗奠定了基础。