胡萝卜抗HgCl_2变异细胞系的筛选

利用胡萝卜下胚轴愈伤组织 ,以HgCl2 为选择剂 ,通过多步正筛选法 ,获得了抗性变异细胞系 .抗性鉴定结果表明 ,在不同HgCl2 浓度的培养基上 ,抗性系的愈伤组织存活率和鲜质量增殖率均明显高过亲本系 ,抗性系的细胞膜透性也发生了变化 .对抗性系和亲本系愈伤组织进行再分化的结果表明 ,在连续 3～ 4代的分化培养之后 ,愈伤组织都能再生绿苗 .提出了该项研究在预防和治理重金属污染方面的重要意义 .     

提高粳稻成熟胚抗性愈伤再生频率的研究

为提高粳稻抗性愈伤分化率和遗传转化率,以农杆菌介导遗传转化得到的水稻成熟胚抗性愈伤(Hyg)为材料,研究了影响粳稻成熟胚抗性愈伤组织再生频率的因素。结果表明分化培养基添加0.5～25 mg.L-1的CuSO4.5H2O,增加分化培养基中的琼脂浓度,分化前对抗性愈伤进行高渗处理,采用6-BA和KT两步分化法和干燥除菌法均能提高抗性愈伤组织的分化率。     

农杆菌介导的旱稻遗传转化主要影响因素

以旱稻品种鲲旱1号为材料,对农杆菌介导的遗传转化中愈伤组织的诱导、筛选、分化等的影响因素进行了研究。将PPA抗虫基因和bar抗性基因成功导入旱稻愈伤组织,经过筛选和分化最终获得了抗性植株。结果表明,改良的NB培养基适合于旱稻愈伤组织的诱导;当农杆菌浓度在OD600 nm为0.2~0.3,侵染时间为20 min时,转化效果最好;用40 mg/L的PPT筛选30 d后,可以获得抗性愈伤组织;将已筛选的抗性愈伤组织在预分化培养基上培养5~7 d能有效提高分化率。     

硝酸银在水稻农杆菌转化中的作用

以籼稻、粳稻两种类型的成熟种子为外植体研究了不同浓度的AgNO3在水稻农杆菌转化中的作用。结果表明，在农杆菌转化前添加AgNO3可以提高愈伤组织诱导率，最适浓度为8～10mg／L，但对愈伤组织的分化没有明显促进作用；转化后添加低浓度的AgNO3可以减轻愈伤组织的褐化，提高抗性愈伤率和绿苗分化率，最适浓度为2-8mg／L。同时发现，无论是转化前还是转化后，添加高浓度的AgNO3对水稻愈伤组织的分化均具有毒害作用。     

灿稻不同品种的遗传转化和植株再生

用携带水稻蜡质基因反义RNA片段的p13W4质粒的根癌农杆菌EHA105，分别感染灿稻品种龙特甫B、协青早B、珍灿97B和Ⅱ-32B的幼胚愈伤组织，经共培养和潮霉素25～50mg/L浓度下的二次筛选后，获得了对潮霉素表现抗性的愈伤组织，抗性愈伤组织的频率在20.1%～27.1%之间；抗性愈伤组织经分化培养，分化频率在12.0%～21.2%。品种间绿菌分化情况存在较大差异，龙特甫B的抗性愈伤组织分化成绿苗的频率为8.8%；珍汕97B的抗性愈伤组织虽能分化，但是，无法获得绿苗。 对转基因植株分别进行了GUS活性测定和PCR检测。结果显示：获得的转基因植株，92%的植株GUS检测呈阳性反应，并能正常结实，在T1种子的胚乳中也能检测到GUS染色的分离，证明外源基因确已导入这些植株中，而且，能正常遗传。在抗性愈伤组织的分化中，试验了潮霉素对分化的影响，结果显示：不添加潮霉素，能明显地提高绿菌频率，但转基因植株的可靠性也随之下降。     

籼稻不同品种的遗传转化和植株再生

用携带水稻蜡质基因反义 RNA片段的 p1 3 W4质粒的根癌农杆菌 EHA1 0 5 ,分别感染籼稻品种龙特甫 B、协青早B、珍汕 97B和 -3 2 B的幼胚愈伤组织 ,经共培养和在潮霉素 2 5～ 5 0 mg/L浓度下的二次筛选后 ,获得了对潮霉素表现抗性的愈伤组织 ,抗性愈伤组织的频率在 2 0 .1 %～ 2 7.1 %之间 ;抗性愈伤组织经分化培养 ,分化频率在 1 2 .0 %～ 2 1 .2 %。品种间绿菌分化情况存在较大差异 ,龙特甫 B的抗性愈伤组织分化成绿苗的频率为 8.8% ;珍汕 97B的抗性愈伤组织虽能分化 ,但是 ,无法获得绿苗。对转基因植株分别进行了 GUS活性测定和 PCR检测 ,结果显示 :获得的转基因植株 ,92 %的植株GUS检测呈阳性反应 ,并能正常结实 ,在 T1种子的胚乳中也能检测到 GUS染色的分离 ,证明外源基因确已导入这些植株中 ,而且 ,能正常遗传。在抗性愈伤组织的分化中 ,试验了潮霉素对分化的影响 ,结果显示 :不添加潮霉素 ,能明显地提高绿苗频率 ,但转基因植株的可靠性也随之下降。     

玉米抗除草剂体细胞变异体的筛选及植株再生

将玉米优良自交系齐 31 9和N1 0 - 6产生的胚性愈伤组织 ,转移到加有半致死浓度除草剂绿磺隆的培养基上 ,经 3代筛选 ,获得抗除草剂愈伤组织。在加有除草剂的分化培养基上 ,抗性愈伤组织分化出植株。除草剂对愈伤组织的生长与分化有显著影响。再生植株移栽成活后 ,自交结实 ,获得种子。再生植株农艺性状与对照相似。除草剂抗性鉴定结果表明 ,再生植株及其后代对除草剂绿黄隆的抗性有了明显提高     

一串红高效离体再生体系研究

为建立一串红高效再生体系,研究了0.1% HgCl2不同灭菌时间对一串红种子和外植体污染率和启动率(发芽率)的影响,以及不同激素组合对一串红外植体茎段、带节茎段和叶片愈伤组织诱导率及其分化率的影响。结果表明：采用0.1% HgCl2处理9 min是一串红外植体较为理想的表面灭菌时间,而一串红种子处理8 min有较低的污染率和较高的发芽率;采用无菌苗的茎段和叶片能诱导出质量较好的愈伤组织,但其进一步分化产生不定芽的能力较差,而采用带节茎段诱导愈伤获得了较多的分化苗,且1.5 mg ·L-1 6-BA+1.0 mg·L-1 2,4-D+0.2 mg ·L-1 NAA配方适于一串红愈伤组织的诱导,2.0 mg ·L-16-BA+0.1 mg ·L-1 NAA组合是适宜一串红愈伤组织分化的激素配方。此外,含0.5 mg ·L-1 NAA的1/2MS固体培养基能使一串红分化苗生根率在90%以上,且移栽后一串红成活率可达80%以上。     

植物高渗转基因新技术的初步建立

以番茄愈伤组织和水稻愈伤组织为转化受体,以pBG和pB1121为外源DNA,以蔗糖和甘露醇为渗透剂,对植物高渗转基因技术进行了研究．结果表明：高渗转化后愈伤组织GUS基因瞬问表达率为38．9％,经抗性筛选,获得番茄和水稻Basta抗性愈伤组织,番茄Basta抗性愈伤组织经分化培养后,共得到29个Basta抗性芽,证明植物高渗转基因技术得到初步建立。     

太行菊组织培养研究

对太行菊生长期间茎顶芽和带腋芽的茎段进行组培试验。结果表明,对外殖体应用0.1%的HgCl2进行表面灭菌,5min处理茎顶芽和8min处理茎段的死亡率和感染率较低。外殖体组织分化有直接生成愈伤组织、小植株体,愈伤组织和不定芽同时生成三种形式。