利用RAPD技术鉴定大白菜主栽品种及品种间遗传多样性分析

采用随机引物扩增多态ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术分析了２１个大白菜主栽品种。用１３个引物共扩增出８７个清晰可重复的ＤＮＡ片段,其中３９条带具有多态性,多态性条带的频率为４４．８％。ＯＰＥ０１是多态性频率最高的引物,它可区分１５个大白菜品种,再与引物ＯＰＨ０３和ＯＰＨ１２配合,即可将２１个大白菜品种区别开。     

小麦株高近等基因系的RAPD标记研究

采用ＲＡＰＤ技术，以４个小麦株市基因近等基因系（分别含有rht、Ｒht1、Rht2、Rht3)为材料，对２９６个单一随机引物（１０个核苷酸）进行了筛选。发现２５个引我的扩增产物的近等基因系间表现出特异性，在６次重复试验中，有１８个引物的特异护增片段不能重复，６个引物可以重复２－３资，唯有ＯＰＡＭ０１在全部试验中均能稳定重复，其特异扩增版段ＯＰＡＭ０１１８６０可以作为rht基因的ＲＡＰＤ标记。     

应用RAPD技术研究不同种山羊草叶绿体DNA的遗传变异

采用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）技术研究了山羊草属ｃｐＤＮＡ的遗传变异性。用改良的“高盐低ｐＨ法”提取了１５种山羊草材料和一种二粒小麦的叶绿体ＤＮＡ,并建立了重复性较好的ＲＡＰＤ标准分析条件。在此标准条件下,检测了１６个材料叶绿体ＤＮＡ的多态性。经１０个引物扩增,在得到的６４个片段中,有６个片段是１６个材料共有的,多态性达９０％。聚类分析结果显示,关系较近的有小亚山羊草和欧山羊草,粘果山羊草和     

“中国春”小麦不同缺体的RAPD分析

利用ＰＣＲ－９０Ａ型ＤＮＡ扩增仪，对７个中国春小麦缺体核ＤＮＡ进行了扩增。结果显示，中国春小麦缺体核ＤＮＡ的ＲＡＰＤ产物可分为二种类型：（１）所有供试材料均能扩增出的片段，代表了核ＤＮＡ在进化上的保守性。有一个引物检测到这类片段。（２）全部供试材料间存在的差异片段，这类片段是用来基因定位的主要依据。另外，建立中国春小麦缺体系统的ＲＡＰＤ指纹图谱对研究小麦的系统进化也将有重要意义     

应用RAPD分子标记技术对我国骨干玉米自交系进行类群划分

利用ＲＡＰＤ标记技术,对我国目前２５个主要玉米自交系进行亲缘关系类群划分,本项研究建立了从玉米种子、幼芽以及叶片组织提取微量ＤＮＡ的方法。从ＲＡＰＤ引物试验Ａ至Ｏ共计３００个引物中,筛选出对玉米扩增产的具有多态性的引物４０个,其中具有特别明显多态民生的引物１０个。它们是Ｆ３、Ｏ２０、Ａ１９、Ｍ２、Ｍ６、Ｎ１１、Ｎ１９、Ｃ２和Ｇ１４等。依据１０个引物扩增谱带建立０,１型数据,计算２５个自交系间遗传距     

棉花RAPD分析条件优化探讨

利用不同的引物、引物浓度、复性温度、ｄＮＴＰｓ浓度、Ｔａｑ酶含量等对棉花品种鄂荆１号、ＰｉｍａＳ－３进行ＲＡＰＤ分析。结果表明，高温复性有利于提高扩增带型的特异性。低Ｍｇ２＋浓度易导致小片断扩增，高Ｍｇ３＋浓度易产生非特异带型。ｄＮＴＰｓ浓度增加导致扩增带型的数目减少。双引物扩增带型与卓引物相比可以检测到更多的品种间遗传差异。根据上述分析，棉花ＲＡＰＤ分析反应物组成为：１Ｘ反应ｂｕｆｆｃｒ、１．８ｍｍｏｌ．Ｌ－１Ｍｇ２＋、０．１６ｍｍｏｌ·Ｌ－１ｄＮＴＰｓ、４０ｎｇＤＮＡ、０．６μｍｏｌ．Ｌ－１随机引物、Ｔａｑ酶１．５单位，加双蒸水至２５μｌ反应体系。     

利用RAPD标记鉴定大白菜杂交种纯度的研究

应用随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）标记鉴定大白菜杂种商品种子的纯度。用５０个随机引物检测了２个杂交种北京５７号和北京１０６号及其亲本,引物ＯＰＥ－２０在北京５７号杂交种中产生了有别于双亲的特殊标记,引物ＯＰＨ－０６及ＯＰＨ－０７在北京１０６杂交种中产生了有别于双亲的特殊标记,能清楚地区分杂交种及其双亲,并将这些引物应用在北京５７号和北京１０６号杂交种样品的纯度检测中。这个结果显示了ＲＡＰＤ标记在大白菜杂交种商品种子纯度检测上的实际用途。     

RAPD方法在节瓜种子纯度鉴定中的应用初探

本文以节瓜种子为材料,用８种随机引物对节瓜种子父本,母本及杂种一代的染色体组ＤＮＡ进行ＲＡＰＤ扩增,发现有３条随机引物扩增出ＤＮＡ片段,其中２条随机引物属于“偏父型”;１条随机引物属于“特异型”随机引物,另外５条随机引物没有扩增出ＤＮＡ片段。由于随机引物扩增片段多态性的存在,因此可以使用该方法进行种子纯度鉴定。     

利用RAPD标记鉴定大豆种质

本研究以５７个中国大豆祖先吕系及育成品种和１８个美国大豆祖先品系为ＤＮＡ样品来源，通过随机引物ＰＣＲ扩增基因组ＤＮＡ的多态性，探索利用ＲＡＰＤ标记鉴定和相关种质的可能性。研究结果表明，５０个１０摩尔随机引物共扩增可分辩产物２４６个，其中８２．４％的随机引物可产生多态性产物，所扩增产物的５４．４％至少在两个基因毒草境存在差异。上ＰＣＲ扩增产物分别以１和０记录存在与否。扩增产物间的成对比较可产生非相似     

棉花枯萎病菌生理小种的分子指纹分析

以我国棉花枯萎菌３个生理小种的２６个代表菌株及国外３ 个不同生理小种菌株进行随机扩增多态性ＤＮＡ（ＲＡＰＤ）分析，共产生了１４０个ＲＡＰＤ分子标记，其中８７８％ 具有多态性。通过聚类分析将供试菌株划分为６个ＲＡＰＤ组，确定了不同小种间的亲缘关系，为确立我国棉花枯萎菌生理小种在国际上的分类地位提供了可靠的分子证据。     

Gene Company

Gene Company Limited was founded in August 1992 in Hong Kong by a group of enthusiastic biotechnologists. Our scope of business can be categorized into two main areas; （a） distribution of full range molecular and cell biology insmunentation, reagents and consumables; and （b） consultation services on research projects and experimental techniques. By Now, Gene prides itself as being one of the leading distributors for biotechnology products, e.g. Affymetrix, Applied Imaging, Corbett Research, Dako, Li-Cor and Biotage and has successfully become one of the major research product suppliers to major genomics, proteomics, biochip and stem cell research centres in China. Gene is a wholly-owned subsidiary of Gene Group Holdings Limited in Hong Kong. Apart from distribution activities, the Group is also engaged in biotech products R＆D and manufacturing, as well as Traditional Chinese Medicine （TCM） technology development.     

藜麦DAPB基因丰度及生物信息学分析

二氢砒啶二羧酸还原酶(DAPB)是赖氨酸合成途径中的一个重要酶,在蛋白质和细胞壁的合成中起着重要作用。本研究基于KEGG总数据库分析表明,藜麦中DAPB的基因拷贝数远高于水稻、玉米及大豆等作物。对藜麦基因组数据筛选得到4个DAPB基因成员,均属于碱性蛋白质,氨基酸序列长度约330 bp,分子量为36.623~36.880 k D,等电点(p I)为5.79~6.01,最大疏水系数为0.028~0.123,为疏水性蛋白,亚细胞定位于细胞质中,不存在跨膜区。4个DAPB基因之间的Ka/Ks值均小于0.5,表明该基因在进化过程中比较保守。系统进化分析发现,藜麦DAPB家族成员位于同一个亚家族,且与菠菜的亲缘关系较近。启动子顺式作用元件分析结果显示,DAPB家族除含有TATA-box和CAAT-box以外,还含有多个参与激素响应、光照、低温及其它应激反应相关的顺式作用元件和转录因子结合位点,暗示藜麦DAPB家族成员可能参与以上多种响应。本研究分析了藜麦DAPB基因的拷贝数并对DAPB进行了生物信息学分析,可为进一步了解DAPB基因家族的生物学功能提供参考。     

农杆菌介导外源基因在棉花中的表达

用 5～ 6d的棉花无菌苗下胚轴切段与农杆菌共培养 ,菌株质粒中 Gus基因为标记基因 ,NPT 基因为选择基因。在含 0 .1 mg· L- 12 ,4- D和 0 .1 mg· L- 1KT的 MS培养基上共培 48h,转移到添加头孢霉素 50 0 mg· L- 1、卡那霉素 50 mg· L- 1MS培养基中诱导和筛选抗性愈伤组织 ,70～ 80 d时 ,进行 Gus检测 ,选择 Gus阳性愈伤组织 ,经体细胞分化生成转基因再生植株     

基因克隆策略在抗稻瘟病基因分离中的应用

稻瘟病是限制水稻生产的主要病害之一,不断分离克隆抗性基因并通过现代生物技术培育抗病水稻新品种是防治该病最经济有效的途径。介绍了当前4种主要的基因克隆即转座子标签法、图位克隆法、电子克隆法和电子图位克隆法的原理和操作流程,并概述了已克隆的19个稻瘟病抗性基因的克隆途径,分别举例介绍了抗稻瘟病基因图位克隆策略、电子图位克隆策略和转座子标签法克隆策略的主要流程。结合研究实践,提出稻瘟病基因的克隆要在不断通过对抗病基因结构和功能深入了解的基础上,灵活选择不同基因分离策略,发挥多种克隆策略的长处。     

水稻抗稻瘟病基因Pi47的精细定位和候选基因分析

不断挖掘和克隆抗稻瘟病新基因, 是解析水稻抗病分子遗传机制和培育抗稻瘟病新品种的重要基础。Pi47是笔者从广谱、持久抗稻瘟病湖南地方品种湘资3150中鉴定的稻瘟病抗性基因, 前期研究将其初步定位于第11染色体标记RM224和RM5926间。本研究利用3个Pi47单基因系与感病亲本CO39杂交F₂群体1687个感病单株对Pi47精细定位, 利用6个STS标记对3个单基因系进行背景分析, 采用生物信息学方法进行了候选基因分析。结果表明, Pi47被精细定位于CAPS标记S32与K33间0.24 cM区域的171.2 kb物理区间内, 背景分析将Pi47进一步缩小至SC12和K33间67.8 kb的区间内; 该区间含有8个结构基因, 其中2个编码NBS-LRR抗病类似蛋白, 为Pi47的候选功能基因。稻瘟菌抗谱比较分析发现, Pi47单基因系与其定位区间内4个Pik位点的等位基因Pik、Pikm、Pikh和Pikp的近等基因系抗谱不同。这些结果为进一步克隆Pi47和利用其进行分子标记辅助选择培育抗稻瘟病水稻新品种奠定了基础。     

桃果实中ACC合酶基因克隆及基因沉默载体构建

摘 要：植物中乙烯是一种具有促进果实成熟和衰老的内源激素。ACC合酶是植物乙烯生物合成途径中一个重要的限速酶,沉默ACC合酶基因的表达能减少植物性内源性乙烯的产生。本研究以中华寿桃为研究材料,采用RT-PCR 技术,克隆获得ACC合酶基因。将该基因酶切回收后连接到pTRV-RNA2载体上,转化DH5α,筛选阳性克隆,进行酶切鉴定。测序后与已知序列进行同源性比较,其同源性达到99.6%,表明将ACC合酶基因成功连接到pTRV-RNA2基因沉默载体上。     

基于数字基因表达谱分析的茶树花不育基因挖掘

茶树每年都要开花结实,消耗大量的养分,导致茶树鲜叶产量减少和品质降低。了解茶树的不育机制有助于培育茶树不育品种。本研究以福鼎大白茶(父本)、佛香2号(母本)及其杂交后代(不育)茶树花为材料,利用数字基因表达谱技术对3个茶树花的c DNA文库进行差异基因表达谱分析。筛选出在父本花与子代不育花、母本花与子代不育花之间共有而在父本花与母本花之间没有的差异表达序列1219条,被认为是茶树不育性候选基因。GO功能显著性分析表明,这些基因功能中代谢过程、催化活性、水解酶活性表现为富集;KEGG代谢分析表明,差异表达基因涉及氨基酸、糖、次生代谢、植物信号传导途径以及能量代谢等过程。以植物激素信号转导通路分析发现,16个与生长素信号途径相关基因中,除5个ARF家族基因在子代不育花中上调表达外,其他的基因均下调,推测生长素信号转导是茶树花不育的重要因素。随机抽取5个基因进行实时荧光定量PCR验证,其结果与测序结果一致。本研究发现的不育候选基因可用于茶树花不育机制的深入研究和不育基因的筛选。     

基因枪转化玉米愈伤组织参数的优化

以玉米愈伤组织为受体 ,借助GUS基因的短暂表达 ,优化了PDS 10 0 0 /He型基因枪和自制基因枪的基因枪转化参数。PDS 10 0 0 /He型基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为 135 0psi压力 ,2 5In·Hg真空度 ,6cm射击距离。自制基因枪转化玉米愈伤组织的最佳轰击参数为0 6MPa ,10cm射击距离     

高羊茅光周期调控基因CONSTANS的克隆与分析

本研究以坪用型"黔草1号"高羊茅为实验材料,基于多年生黑麦草CONSTANS(CO)基因序列设计引物,利用3'RACE和5'RACE方法扩增CO基因。结果表明,从高羊茅中分离出CO基因,命名为FaCON-STANS。经序列分析,cDNA全长1557bp,编码376个氨基酸,具有完整的开放阅读框(ORF,166～1296bp),氨基端具有B-box型锌指结构域,碳端具有CCT(CO,CO-like,TOC1)结构域。进一步的同源性分析表明,Fa-CONSTANS蛋白与禾本科植物的CO蛋白亲缘关系较近,与其它植物的亲缘关系较远。