犬卵母细胞体外成熟的影响因素

采集发情期和间情期犬卵巢,回收大腔（直径大于１ｍｍ）卵泡和不可见卵泡的卵母细胞,在４种成熟液（ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＦＣＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ,ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ和ＴＣＭ１９９＋２０％ＥＤＳ＋１０ＩＵ／ｍＬＦＳＨ）中成熟后进行了受精试验。结果：（１）发情期大于２ｍｍ和１～２ｍｍ的大腔卵泡卵母细胞的体外成熟率（４２．５％,３２．５％）显著高于间情期卵母细胞（２０．４％）,但发情犬不可见卵泡卵母细胞的体外成熟率（２８．９％）与间情期卵母细胞差异不显著;（２）在成熟液中添加促性腺激素,能有效地提高卵母细胞成熟率,不可见卵泡的卵母细胞对促性腺激素的依赖性（３０．０％比７．８％）大于大腔卵泡的卵母细胞（４２．５％比２９．０％）;（３）卵丘扩散与卵母细胞成熟存在相关性;（４）ＥＤＳ可诱导卵丘扩散,但不能有效提高卵母细胞的成熟率;（５）发情期卵巢上的大腔卵泡和不可见卵泡的卵母细胞以及间情期卵巢不可见卵泡的卵母细胞体外培养后,与体外获能的精子进行体外受精,其卵裂率分别为１６．０％（４／２５）,０％（０／４０）和２．５％（１／４０）。     

犬卵巢卵母细胞体外成熟的研究

从屠宰母犬卵巢获取的卵母细胞,用含有FSH和LH的TCM—199培养基培养24～48h后,卵丘卵母细胞复合体(COC)表现扩展,生发泡(GV)破裂(GThD),且COC的扩展率和GVBD率随着培养时间的延长而逐渐升高.超微结构观察,卵母细胞体外成熟培养后,其胞质内线粒体、皮质颗粒等迁移到皮质区;高尔基复合体减少或消失,颗粒细胞和卵母细胞间的间隙连接消失.     

犬卵母细胞体外成熟及其体外受精研究进展

犬科动物胚胎对于改进犬科珍贵物种及保护濒危犬种十分重要,因此对犬科动物体外受精(IVF)以及辅助生殖(ART)的研究逐渐变得必要.通过体外受精和核移植已经成功获得能够发育的犬科动物胚胎,克隆的犬胚胎移植到受体母犬能成功产仔,但是这一技术的效率仍然很低.主要原因是犬科动物胚胎在体外发育能力很低.犬卵母细胞早期发育和其他动物不同,犬卵巢排出的卵母细胞处于生发泡(GV)期,在输卵管中恢复减数分裂.犬卵母细胞核难以观测并且不容易确定排卵时间,所以很难确定精子入卵的确切时间,并且多精受精的情况时常发生.回顾犬卵母细胞体外成熟(IVM)和体外受精取得的进展,对于提高其胚胎生产效率很有必要.     

犬卵母细胞体外成熟的研究进展

阐述了影响犬卵母细胞体外成熟的各种因素,总结概括了目前新的培养方法,并对国内的研究现状及前景作了思考,以期为研究犬卵母细胞体外成熟研究提供参考。     

犬卵母细胞体外成熟培养液组成成分的研究进展

胚胎移植技术已广泛涉及各种哺乳动物,未成熟卵母细胞的体外成熟培养已成为辅助生殖技术的研究热点。因此,如何获得一个稳定的具有较高成功率的体外成熟培养系统是迫切需要解决的问题,犬由于其特殊的生理等方面的特点,卵成熟率不是很高。现就犬卵母细胞的体外成熟培养液的成分,是否需加激素、蛋白因子、生长因子等物质的研究进展作一综述。     

脂滴在Beagle犬卵母细胞体外成熟中的研究

犬排出的卵母细胞处于GV期,其体外成熟率在20%左右,尚未获得突破,阻碍了犬体外保种及基因修饰疾病模型创制研究。犬卵母细胞含有大量脂滴,关于脂滴与卵母细胞成熟的研究鲜有报道。综述了脂滴与犬卵母细胞体外成熟的关系,尝试寻找研究犬卵母细胞体外成熟新的突破口。     

激素对卵母细胞体外成熟的影响

激素对卵母细胞体外成熟的影响赵伟黄夺先（江苏省农科院牧医所２１００１４）近年来,随着商业化胚胎移植的发展,卵母细胞体外成熟和体外受精作为胚胎来源的主要途径已受到关注,而直接影响胚胎数量和质量的卵母细胞体外成熟显得尤为重要。影响卵母细胞体外成熟的因素很...     

表皮生长因子对水牛卵母细胞体外培养核质成熟的影响

为了探讨表皮生长因子（EGF）对水牛卵泡卵母细胞体外培养核质成熟的影响，在以TCM199为基础的成熟液中加入不同浓度的EGF（0、10、25、50、100 ng/ml），体外成熟培养24~26 h，观察第一极体（PB1）的排放；随后进行孤雌激活检测其分裂率、囊胚发育率、囊胚孵化率，并用Hoechst33342染色后计算囊胚的细胞数。结果发现添加EGF各组的卵母细胞第一极体排放率显著提高（P<0.05）；成熟液中添加25 ng/ml EGF时，卵裂率及囊胚发育率（分别为80.0%、44.8%）明显高于对照组（分别为69.3%、31.9%，P<0.05），但对囊胚的细胞数影响不大。EGF不仅促进水牛卵母细胞体外培养的核成熟，而且有利于卵母细胞的胞质成熟，其中EGF的最佳浓度为25 ng/ml。     

不同培养液及不同培养时间对犬卵母细胞体外成熟的影响

试验采集犬卵巢,用切割法回收卵泡中的卵母细胞,选取胞质均匀、2层或2层以上颗粒细胞、直径≥110μm的卵母细胞移入不同的培养液中:(A)M199+10%FBS+0.5μg/mL FSH+10 IU/mL hCG,(B)M199+0.1%PVA进行体外成熟培养。在培养不同时间(0,48,72 h)用1%醋酸地衣红染色,在显微镜下观察卵母细胞核成熟情况,探索适宜犬卵母细胞体外成熟的培养体系。结果表明:卵母细胞在A液中培养48 h MII期比例(7.84%)高于B液中的比例(P<0.01);在培养72 h MII期比例也是A液中(8.00%)高于B液,虽然二者差异不显著(P>0.05),但72 h卵母细胞退化比例高于48 h(P<0.01)。因此培养液中添加FBS,FSH和hCG有利于犬卵母细胞体外成熟,且在此培养液中培养48 h为最佳成熟时间。     

海狸鼠卵母细胞体外成熟培养初探

实验用ＰＭＳＧ或ＰＭＳＧ＋ＨＣＧ处理或未经激素处理的海狸鼠８只，共获卵巢卵母细胞１３８枚。激素处理对获取卵巢卵母细胞的数量没有影响，而对体外成熟发育至卵丘扩展和半成熟阶段有促进作用。三种不同培养液（Ｗｈｉｔｅｎ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ；ＴＣＭ１９９＋ＨＣＧ＋ＦＣＳ）共培养１２５枚卵母细胞，培养后卵丘扩展率及半成熟率分别为５６．５％，４５．７％，４７．６％和２１．７％，１２．３％，９．５％，以Ｗｈｉｔｅｎ液较高（分别为５６．５％和２１．７％），但只有ＴＣＭ１９９＋ＰＭＳＧ＋ＦＣＳ组有２枚卵母细胞出现第一极体。结果表明海狸鼠卵母细胞与其它啮齿动物的卵母细胞一样，能够在体外培养成熟，完成第一次减数分裂，排出第一极体     

Effect of Sugar on in vitro Maturation and Developmental Competence of Yak Oocytes

This study was designed to investigate the effect of different types and different concentrations of sugar on in vitro maturation(IVM) and developmental competence of yak oocytes, for being further research and optimization culture system of yak oocytes for efficient maturity yak oocytes and productivity of embryos. Immature yak oocytes were matured in vitro on culture medium with different concentrations (0,5 and 10 mmol/L) of glucose and sucrose in incubator for 24 h or 2 h pretreament with sugar and 22 h without sugar. Subsequently, then the maturation of oocytes,the cleavage rates and blastocyst formation rates after in vitro fertilization(IVF) were evaluated. The results showed that a medium with 5 and 10 mmol/L glucose IVM could significantly increase the yak oocytes maturation and cleavage (P<0.05), and the highest blastocyst formation rates in 10 mmol/L glucose group was significantly higher than 0 mmol/L glucose (P<0.05).10 mmol/L sucrose could increase significantly the nucleus maturation rates (P<0.05),and there was no significant difference of the blastocyst formation rates after IVF between 0 and 10 mmol/L sucrose (P>0.05). Furthermore, the nucleus maturation rates,IVF cleavage rates and blastocyst formation rates of yak oocytes which pretreated with 10 mmol/L glucose were the highest in these groups, and were higher than 0 mmol/L glucose (P<0.05). It manifested that the appropriate concentration of sugar could improve the quality of yak oocytes and embryos in vitro developmental competence, so it influenced in vitro development of yak oocytes indirectly.     

糖对牦牛卵母细胞体外成熟及其发育能力的影响

试验旨在研究不同种类、不同浓度的糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育能力的影响,进一步探索和优化牦牛卵母细胞培养体系,提高卵母细胞体外成熟和胚胎生产效率。在牦牛卵母细胞成熟液中添加不同浓度（0、5和10 mmol/L）的葡萄糖或蔗糖,培养24 h或预培养2 h后移入无糖培养基中继续培养22 h,统计卵母细胞体外成熟率及体外受精（IVF）后的胚胎卵裂率和囊胚率。结果显示,与对照组（0 mmol/L）相比,5和10 mmol/L葡萄糖组牦牛卵母细胞核成熟率和体外受精胚胎卵裂率均显著提高（P<0.05）,10 mmol/L葡萄糖组的囊胚率最高,且与对照组相比差异显著（P<0.05）。添加10 mmol/L蔗糖可以显著提高牦牛卵母细胞核成熟率（P<0.05）,但胚胎囊胚率与对照组相比差异不显著（P>0.05）。此外,用10 mmol/L葡萄糖预处理牦牛卵母细胞后其核成熟率、胚胎卵裂率和囊胚率最高,且均显著高于对照组（P<0.05）。由此可见,糖对牦牛卵母细胞体外成熟和发育有一定的影响,在成熟过程中添加适当浓度的糖能提高卵母细胞成熟率及体外受精胚胎发育能力。     

生殖激素对哺乳动物卵母细胞体外成熟的影响

生殖激素是卵母细胞成熟培养液中必不可少的成分,它对卵母细胞的完全成熟至关重要。本文综述了其化学特性和对卵母细胞成 熟培养的影响,并对其作用机理进行了简单阐述。     

丁内酯-I对绵羊卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

研究从丁内酯-I(BL-I)的浓度筛选、作用时间以及作用解除后的成熟培养时间等方面分别进行了试验,以观察其对绵羊卵母细胞核成熟的抑制程度以及对卵母细胞体外成熟及发育能力的影响。结果表明:150μmol/L的BL-I能将62.9%的卵母细胞抑制在GV期。BL-I抑制8、16 h和24 h后绵羊卵母细胞停滞在GV期的比率差异不显著(P>0.05);抑制24 h时卵裂率和囊胚率低于对照组,16 h的囊胚率也低于对照组,抑制8 h的卵裂率和囊胚率与对照组差异不显著(P>0.05)。去除抑制后卵母细胞的成熟能力不受影响。由此可得出,丁内酯-I能可逆性抑制绵羊卵母细胞的核成熟,但未能提高其发育潜力。     

pFF对猪卵母细胞体外成熟及发育能力的影响

探讨了两种不同成分成熟液配方(I:含PMSG、hCG、pFF与II:含FSH、LH)对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活发育能力的影响。结果表明:当卵母细胞分别在I和II液中成熟培养42 h后,卵母细胞存活率差异不显著(82.66%∶83.5%)(P>0.05)。对成熟卵母细胞孤雌激活后体外培养结果表明:I成熟培养组的卵母细胞卵裂率低于II成熟培养组(69.44%∶78.38%)(P<0.05)。但两组卵母细胞经144 h培养后囊胚发育率差异不显著(35.0%∶32.04%,P>0.05)。由此可知:采用不含pFF、化学成分已知的成熟液可以满足猪卵母细胞体外成熟和卵母细胞孤雌激活后的正常发育。     

培养时间和表皮生长因子对兔卵母细胞体外成熟的影响

本试验旨在探讨培养时间和表皮生长因子(EGF)对兔卵母细胞体外成熟及受精的影响。分别用切割法和针刺挤压法取经超排后母兔卵巢表面的卵母细胞颗粒细胞复合体(COCs),将COCs分别在不同时间(24、30、36及40h)和在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0、50、100ng/mL)进行体外成熟培养并观察其第一极体排出率。结果表明:①针刺挤压法获得COCs数明显高于切割法(P0.05);②体外成熟培养时间30(36)h的第一极体排出率高于24(40)h(P0.05);③添加50和100ng/mLEGF组卵母细胞第一极体排出率明显高于对照组(P0.05)。因此,①兔卵巢卵母细胞的获得方法以针刺挤压法较好;②兔卵母细胞成熟时间以30～36h为宜;③EGF对兔卵母细胞体外成熟有促进作用,在基础培养液中添加100ng/mLEGF为宜。     

不同采卵方法及卵巢所处性周期阶段对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

本试验主要从采集方法和性周期阶段2方面对绵羊卵母细胞体外成熟的影响进行了探讨。结果表明：不同采卵方法的采卵效果存在差异，卵裂率切割法显著高于抽吸法(27.9%，49.5%；P<0.05)；A、B级卵母细胞成熟率极显著高于C级(75.3%，64.4%，29.1%，P<0.01)，卵裂率A、B级均显著高于C级(42.5%，35.8%，16.0%，P<0.05)；从卵泡期和黄体期卵巢采集到的卵母细胞的体外成熟率和卵裂率分别为66.7%、62.9%；38.2%、34.4%，没有显著差异 (P>0.05)。     

生长激素和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚卵裂的影响

本研究探讨了生长激素(STH)和胰岛素对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后卵裂的影响。结果表明:在mNCSU-23液中,添加0.15μg/mLSTH组的成熟率(73.83%)和卵裂率(64.76%)显著高于对照组和添加0.01、0.05、0.1、0.2μg/mLSTH组(P<0.05);添加5μg/mL和8μg/mL胰岛素组的成熟率(66.25%、60.64%)显著高于添加0、0.5、2μg/mL及10μg/mL组(P<0.05);添加5μg/mL胰岛素组的卵裂率(61.63%)显著高于添加0、0.5、2、8、10μg/mL组(P<0.05);最佳的联合添加组为0.15μg/mLSTH+2μg/mL胰岛素,其体外成熟率为79.37%、卵裂率为72.31%。