水稻耐冷基因研究进展

低温冷害是影响水稻高产、稳产的重要限制因素之一.鉴定优异的耐冷种质资源,采用合适的方法发掘其优异的基因源,通过分子育种等手段高效和精确地培育耐冷的水稻品种,是解决上述低温冷害的关键.加快耐冷性状的改良对促进水稻的高产、稳产具有重要意义.以水稻耐冷基因研究为核心,综合述评了水稻耐冷QTL定位、克隆和水稻耐冷转录因子调控,探讨了水稻耐冷相关基因研究存在的问题.由于以往耐冷QTL定位的精度有限,很难在分子育种中应用;且已克隆的耐冷相关基因由于其耐冷机制的复杂性,在育种中的应用也很少.联合连锁和关联分析可以提高QTL检测的效应和定位精度.因此,利用联合连锁和关联定位方法,挖掘耐冷基因,构建高效的水稻耐冷基因精细定位的策略,并应用于分子育种,值得深入研究.     

水稻香味基因的染色体定位研究

以籼型及粳型标记基因系为工具材料，分别与武进香籼，武进香粳杂交，研究香味基因在染色体上的位置，以碱浸法测定双亲和Ｆ１．Ｆ２及部分Ｆ３组合的叶香，结果表明，香味基因与分属水稻１１个染色体的３９个标记基因表现独立遗传，而与位于第８染色体上的标记基因υ－８表现连锁，估算２基因之间的重组值约为３８．０３％±３．８４％，推定水稻香味基因位于第８染色体上。     

水稻米香基因的染色体定位研究

以标记基因系、ＩＲ３６三体以及粳稻易位系为材料，通过杂交研究了我国香稻品种所携米香基因在染色体上的位置，以咀嚼法测定双亲、Ｆ１、Ｆ２及Ｆ２植株上Ｆ３种子的米香。结果表明，米香基因与分属水稻１１个染色体的３６个标记基因表现独立遗传，而与位于第８染色体上的标记基因ｖ－８表现连锁，估算２基因之间的重组值约为（３７．５５±２．８６）％，推定控制水稻米香的基因位于第８染色体上。     

水稻OsWRKY78与GFP融合基因的拟南芥转化及亚细胞定位

[目的]确定OsWRKY78蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中OsWRKY78全序列设计引物,进行OsWRKY78的RT-PCR扩增,克隆了OsWRKY78基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒载体pBinGFP重组,并对重组载体进行菌液PCR和酶切验证,最后利用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥中,对其亚细胞定位进行研究。[结果]试验克隆得到了pBinGFP-OsWRKY78重组载体,经菌落PCR与酶切检测表明构建的表达载体正确,其转化到拟南芥中后得到了转基因植株,荧光显微镜检测结果表明,OsWRKY78基因表达产物主要定位在细胞核中。[结论]该研究结果为深入研究OsWRKY78基因的功能及其在相关信号传导中的作用奠定了基础,也为进一步研究OsWRKY78基因与褐飞虱之间的关系提供了理论依据。     

水稻香味基因的染色体定位研究

以籼型及粳型标记基因系为工具材料，分别与武进香籼、武进香粳杂交，研究香味基因在染色体上的位置，以碱浸法测定双亲和Ｆ＿１，Ｆ＿２及部分Ｆ＿３组合的叶香，结果表明，香味基因与分属水稻１１个染色体的３９个标记基因表现独立遗传，而与位于第８染色体上的标记基因ｖ一８表现连锁，估算２基因之间的重组值约为３８．０３％±３．８４％，推定水稻香味基因位于第８染色体上。     

水稻硫转运蛋白基因OsST的亚细胞定位

[目的]构建水稻硫酸根转运基因OsST与YFP黄色荧光蛋白融合表达载体,对OsST蛋白进行亚细胞定位。[方法]从水稻叶片的cDNA中克隆OsST基因ORF全长,测序验证后连入pAT—YFP表达载体,通过基因枪将融合栽体转入洋葱上表皮细胞,在激光共聚焦显微镜下观察细胞中荧光发光部位。[结果]OsST蛋白定位于细胞膜和核膜上。[结论]为进一步研究硫转运蛋白的功能及硫酸根运输的机理奠定了基础。     

水稻OsWRKY78与GFP融合基因的拟南芥转化及亚细胞定位(英文)

[目的]确定OsWRKY78蛋白在植物中的定位。[方法]根据GenBank数据库中OsWRKY78全序列设计引物,进行OsWRKY78的RT-PCR扩增,克隆了OsWRKY78基因,将该片段与带绿色荧光蛋白(GFP) 基因的质粒载体pBinGFP重组,并对重组载体进行菌液PCR和酶切验证,最后利用农杆菌介导的花蕾浸泡法将重组载体转化到拟南芥中,对其亚细胞定为进行研究。[结果]试验克隆得到了pBinGFP-OsWRKY78重组载体,经菌落PCR与酶切检测表明构建的表达载体正确,其转化到拟南芥中后得到了转基因植株,荧光显微镜检测结果表明,OsWRKY78基因表达产物主要定位在细胞核中。[结论]该研究结果为深入研究OsWRKY78基因的功能及其在相关信号传导中的作用奠定了基础,也为进一步研究OsWRKY78基因与褐飞虱之间的关系提供了理论依据。     

水稻品种轮回422的广亲和基因定位研究

分析了两组〔巴利拉（粳稻测验种）／／轮回４２２籼稻标记基因系〕Ｆ１的育性及其与紫稃尖，糯性和褐果皮性之间连锁关系。结果表明，轮回４２２的广亲和性主要受单个基因控制，其遗传特点符合单位点等位基因互作不育模型，能有效地克服粳型雌配子的败育。该位点位于水稻第Ｉ连锁群（６号染色体）上色素源基因和糯性基因之间，与Ｃ和ｗｘ分别相距４．８±３．２９和２３．７±５．５６个遗传单位；与业已发现的广亲和基因Ｓ＾ｓ５等     

水稻雄性不育及不育基因定位研究进展

本文对水稻雄性不育及育性基因定位的研究进行了综述,主要阐述了水稻核质互作雄性不育和细胞核雄性不育的类型及育性相关基因的定位,以期为深入研究和应用水稻雄性不育及其基因定位提供参考。     

水稻矮秆基因定位和克隆的研究进展

介绍了水稻矮秆性状的研究现状,包括水稻矮秆性状的遗传研究,水稻植株矮化机制研究,以及水稻矮化材料的利用情况;综述了水稻矮秆基因定位的常用方法,包括图位克隆法的原理,以及图位克隆法、生物信息学与突变体资源在水稻基因精细定位与克隆方面的应用.     

锑酸盐沉淀技术在植物组织钙的亚细胞定位上的应用

拟定了一种改良的锑酸盐沉淀技术,其螯合试验和电镜观察证明,用本试验方法产生的锑酸盐沉淀主要是锑酸钙,沉淀分布规则,清晰度高,而且超微形态保存良好,可用于研究亚细胞水平钙离子的分布。作者应用这一改进技术,观察了玉米叶片亚细胞水平钙的分布。     

表达绿色荧光蛋白重组减毒鼠伤寒沙门氏菌的构建

应用DNA重组技术构建了表达绿色荧光蛋白 (GFP)的重组减毒鼠伤寒沙门氏菌。用EcoRⅠ和NcoⅠ将pEGFP质粒中的绿色荧光蛋白基因EGFP切下 ,克隆进表达载体质粒pYA3334的EcoRⅠ和NcoⅠ位点之间 ,构建成重组表达质粒pYAGFP ,然后转化大肠杆菌X6 2 12、中间宿主X3730、终末宿主X45 5 0。X45 5 0于LB培养基上呈绿色 ,在荧光显微镜下观察 ,整个菌体发绿色荧光。构建的表达GFP的重组鼠伤寒沙门氏菌为减毒沙门氏菌活载体基因工程疫苗的研制提供一个良好模型。     

NH3基因转化水稻的研究

NPR1(non-expresser of pathogenesis related genes 1)是水杨酸(salicilic acid,SA)介导的植物系统获得抗性(systemic aquired resistance,SAR)的关键调控因子,在水稻中过量表达拟南芥NPR1和水稻NH1/OsNPR1(NPR1homologue 1)(NPR1的同源物)可增强抗病性.水稻基因组中还有4个NPR1旁系同源物(paralog).为了研究水稻NPR1旁系同源物3,NH3(NPR1 homologue 3),本文利用其自身启动子驱动NH3基因的表达,构建载体将其转入水稻,获得了10个T0代转基因植株.PCR检测证明NK3基因已成功转入水稻中.     

野生稻资源蛋白质含量评价

用半微量凯氏定氮法测定整粒稻米，共鉴定了１９个野生稻种２０２８份样品的蛋白质含量，探明了野生稻种间的蛋白质含量的差异，发现蛋白质含量在１５５以上的野生稻种共２３３份，占１１．５％，其中普通野生稻９９份，占其总数的５．７％，药用野生稻８７份，占其总数的８３．７％，国外野生稻４７份，占其总数的２７．３％，可供水稻品质育种工作者选择利用。     

水稻品种轮回422的广亲和基因定位研究

分析了两组[巴利拉(粳稻测验种)//轮回422/籼稻标记基因系)F_1的育性及其与紫稃尖、糯性和褐果皮性状之间连锁关系。结果表明,轮回422的广亲和性主要受单个基因控制,其遗传特点符合单位点等位基因互作不育模型,能有效地克服粳型雌配子的败育。该位点位于水稻第1连锁群(6号染色体)上色素源基因(C)和糯性基因(wx)之间,与C和wx分别相距4.8±3.29和23.7±5.56个遗传单位;与业已发现的广亲和基因S_s~n等位。文中还就广亲和基因定位试验中亲本材料的选择问题进行了讨论。     

利用体细胞核移植技术生产表达绿色荧光蛋白转基因猪胚胎的研究

试验对脂质体转染猪胎儿成纤维细胞的技术程序进行了筛选,以绿色荧光蛋白基因转染后的阳性细胞作为体细胞核移植的核供体,以体外成熟卵母细胞为核受体构建了绿色荧光蛋白转基因克隆猪胚胎,并对重构胚在体外发育情况以及绿色荧光蛋白表达情况进行了跟踪研究。结果显示,采用4.0μg.mL-1脂质体转染试剂,1.6μg.mL-1质粒DNA,转染6 h可以获得最佳转染效果,转染效率达4.48%;GFP转基因体细胞重构胚体外囊胚发育率为10%,GFP阳性胚胎率为48%。结果表明,脂质体转染试剂可以高效转染猪胎儿成纤维细胞,获得的阳性细胞具有支持猪全程发育的潜能。     

水稻籽粒蛋白质积累特性的研究

以不同蛋白质含量的水稻品种为试材,研究了水稻籽粒蛋白质的积累特性。结果表明,单粒蛋白质含量随籽粒发育而增加,而单位干重的蛋白质含量却以开花后7天最高,14至21天降至最低,以后又逐步上升,28天趋于稳定。籽粒蛋白质的积累受叶片氮素降解和运转的影响,高蛋白质含量比低含量的品种具更强的叶片蛋白酶活性,叶片氮素的降解能力更强。并且,前者籽粒中游离氮基酸含量高于后者。籽粒蛋白质的积累也受环境条件的影响,抽穗期施氮可以提高籽粒蛋白质含量。     

甘蔗茎韧皮部ATP酶活性的细胞化学定位

采用酶细胞化学技术对7个甘蔗种和品种进行研究。甘蔗茎韧皮部细胞 ATP 酶活性定位于筛管、伴胞质膜、伴胞核、小囊泡、充分发育的液泡膜和 P—蛋白上。野生种和栽培种茎韧皮部细胞 ATP 酶活性较高,而生产品种则较低。认为甘蔗茎韧皮部 ATP 酶活性与糖分的运输和抗性等有关。茎韧皮运输中,可能有 P—蛋白和 ATP 酶主动参与。     

水稻糯质基因对籽粒物质积累的影响

利用2对籼型糯和非糯近等基因系研究了糯质基因WX对籽粒物质积累的影响。WX使糯性籽粒自发育始期的灌浆充实进程即较相应的非糯籽粒弱,糯性籽粒发育过程的粒重较非糯籽粒轻0.64-6.72mg。糯性籽粒中积累较多的还原糖和非还原糖,可溶性糖较非糯籽粒高1.00%-10.69%。相反的,糯性籽粒发育过程的淀粉含量比非糯籽粒低。WX自籽粒发育始期即控制合成稳定高比例的支链淀粉,糯性籽粒中的淀粉合成酶系总活力可能较非糯籽粒弱。发育全过程中糯性籽粒的蛋白质含量均低于非糯系的含量,影响糯稻的营养品质。