白刺盐碱胁迫相关基因片段的克隆与分析

采用mRNA差异技术分离白刺盐碱胁迫相关基因片段,得到27个与白刺盐碱胁迫相关的基因片段,并且对它们的同源性进行了研究与分析。结果表明：有6个片段(A1013b,G388,G1013c,G1013c,C391a,C391a)分别与多种植物盐相关基因存在一定的同源性。基因片段C391a与多种植物如香树、烟草等叶绿体光系统亚基A(PsaA)有较高的同源性(86％～94％)。     

盐胁迫对3种白刺渗透调节物质的影响

以西伯利亚白刺(Nitraria sibirica Pall.)、唐古特白刺(Nitraria tangutorum Bobr)、齿叶白刺(Nitraria roborowskii Kom.)的2年生实生苗为试验材料,研究了其在NaCl胁迫45 d后的生长和渗透调节物质含量的变化。结果表明:盐胁迫明显抑制了白刺生物量的积累,唐古特白刺根冠比与盐浓度呈负相关,其它2种白刺无明显变化。盐胁迫后,3种白刺叶片中丙二醛摩尔质量浓度种间变化差异较大;唐古特白刺和西伯利亚白刺叶片中可溶性糖、可溶性蛋白、脯氨酸质量分数增加显著,齿叶白刺仅可溶性糖质量分数变化明显;盐处理后Na+、Cl-质量分数相比对照有不同程度增加,Ca2+质量分数明显减少,K+质量分数、钾钠比种间表现各异。运用隶属函数法综合评价结果表明,3种白刺的耐盐性由大到小依次为西伯利亚白刺、唐古特白刺、齿叶白刺。     

盐胁迫下白刺试管苗的生长与耐盐响应

通过测定不同梯度盐胁迫下白刺试管苗的生长指标和根茎的抗性生理指标,探讨了白刺试管苗的耐盐特性。结果显示:从白刺的形态生长看,在NaCl浓度为100 mmol/L时,白刺试管苗长势最优,浓度为200 mmol/L时,白刺试管苗长势有所下降,但仍能正常生长。从各抗性生理指标看,NaCl浓度为50 mmol/L和100 mmol/L时,茎叶和根的多数抗性指标值小于对照;NaCl浓度在150 mmol/L和200 mmol/L时,茎叶和根的多数抗性指标值就开始逐渐增加,大于对照。说明Na Cl浓度在100 mmol/L以内时,对白刺试管苗的生长有促进作用,甚至提供了白刺生长所需的营养,并未产生胁迫。NaCl浓度大于100 mmol/L之后,对白刺试管苗的生长开始逐渐产生胁迫,但白刺通过自身抗逆性机制调节,在NaCl浓度为200 mmol/L时还能正常生长。     

盐胁迫下唐古特白刺叶片的扫描电镜观察

[目的]为研究唐古特白刺的耐盐碱性,[方法]采用扫描电子显微镜对不同盐分胁迫下一年生唐古特白刺实生幼苗叶片进行微观结构的观察。[结果]结果表明,在四组盐分胁迫下,白刺叶表面均有蜡质出现,且主要表现为各盐分高浓度胁迫下气孔周围蜡质增多,且叶片细胞褶皱明显。与对照相比,四组盐分胁迫下叶表皮气孔长度、宽度、面积下降,气孔密度增大。随盐分浓度的增加,碱性盐和中性盐在300mmol·L-1胁迫下气孔开度即大幅降低,且碱性盐胁迫下降低值最大;混合盐碱和单盐胁迫下气孔开度先增加后降低,且单盐300mmol·L-1时达最高值。[结论]研究结果表明碱性盐对白刺伤害较大,低浓度单盐有利于白刺生长,白刺幼苗可通过调节气孔开度、气孔密度及气孔周围蜡质的形成或泌盐表现出一定的耐盐特性。     

盐胁迫对唐古特白刺枝叶性状的影响

【目的】探索不同质量分数NaCl胁迫下唐古特白刺枝叶性状的动态变化规律,为唐古特白刺在植物治沙领域发挥优势作用提供理论基础。【方法】以唐古特白刺1年生扦插苗为研究对象,分别使用质量分数为0.4%,0.8%,1.2%,1.6%和2.0%的NaCl水溶液进行胁迫试验,以清水处理作为对照（CK）,每处理10个重复。于胁迫处理10,30,50,70,90 d后,测定各处理唐古特白刺各级枝条的长度、节数、节间长度、基径、分枝角、分枝比,叶片长度、宽度、厚度、长宽比,观察解剖结构。【结果】（1）质量分数≤1.6%的NaCl胁迫处理对唐古特白刺枝条生长具有促进作用,但NaCl胁迫质量分数进一步升高时,唐古特白刺枝条生长开始受抑,甚至死亡。质量分数0.8% NaCl胁迫处理唐古特白刺枝条的分枝比和分枝角与CK相比明显增大。（2）盐胁迫使唐古特白刺叶片变小、变厚、长宽比减小,表皮细胞及角质层增厚、栅栏组织细胞层数增加、叶肉细胞排列紧密,栅海比和中脉维管束中导管数均随着NaCl胁迫质量分数增加而增大。（3）NaCl质量分数≥0.8%,唐古特白刺叶片出现“复表皮”现象,叶肉中出现黏液细胞。【结论】NaCl胁迫处理对唐古特白刺枝叶性状具有明显影响,且低质量分数NaCl对其枝条、叶片生长具有明显的促进作用,进而改变株丛形态;但质量分数≥1.6%,唐古特白刺生长受抑,甚至死亡。     

盐胁迫下番茄幼苗中不同性质蛋白表达差异的研究

[目的]分析不同盐浓度胁迫下番茄幼苗叶中不同性质蛋白表达的差异。[方法]以番茄种子为试材,置于附加不同盐浓度的1/2MS培养基上培养出番茄幼苗,然后分别提取其叶中的水溶蛋白、盐溶蛋白、酸溶蛋白、醇溶蛋白和总蛋白,并运用SDS-PAGE技术对其蛋白组成和表达量进行比较分析。[结果]不同盐浓度处理下,叶片蛋白质的组成和数量均发生变化,高盐浓度时多出了66.2 kD左右的蛋白质,说明在高盐浓度胁迫下植物产生了某些抗逆性蛋白;总蛋白条带比较相似,总蛋白含量和盐溶蛋白含量略微减少,水溶蛋白含量略微增加,并且在盐溶蛋白中增加了1条带,这些蛋白变化可能是盐胁迫下应激反应的相关蛋白。[结论]该研究为植物的抗病性选育提供一定的理论基础。     

利用双向电泳技术分离盐胁迫下番茄叶片蛋白

采用双向聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对耐盐性不同的野生番茄品种盐处理后进行蛋白质组分析。2种野生番茄(秘鲁番茄、潘那利番茄)双向电泳后,幼苗长至两叶一心时,用150 mmol·L-1 NaCl胁迫,14 d后用TCA丙酮法提取叶片总蛋白。经裂解、水化、等电聚焦、平衡、SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝胶体染色等一系列步骤后,番茄叶片总蛋白以蛋白点的形式呈现在凝胶图上。经ImageMaster 2D platinum软件分析,匹配率均达90%以上,图像分辨率也超过800个蛋白斑点。结合软件分析和肉眼观察,秘鲁番茄、潘那利番茄分别有16、15个蛋白被发现为上调蛋白,11、18个为下调蛋白。     

干旱胁迫下小麦根部蛋白表达变化的双向电泳分析

干旱是影响小麦生长和产量的主要环境因素之一,研究小麦耐旱机制对提高小麦产量保证粮食安全有重要的意义。本研究以耐旱小麦晋麦79为材料,利用双向电泳技术,对其两叶一心期幼苗在16. 7%PEG-6000胁迫0、1、6、72 h的根部蛋白质表达谱进行分析,比较不同胁迫时间点的小麦蛋白质表达谱的差异。结果表明,相对于0 h的表达谱,67种蛋白质在不同的胁迫时间点改变了其表达丰度。对其中至少在某一个时间点上调表达2倍以上的20个蛋白质点进行基质辅助激光解吸/电离飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)分析,质谱结果中得到了18个阳性蛋白质点的信息,包括9个功能已知的蛋白和9个未鉴定的蛋白。已知功能的蛋白涉及到能量代谢、胁迫耐受性、信号转导和蛋白质合成/代谢等生理生化过程,表明植物在干旱胁迫下调节多种蛋白质的表达,综合调控其耐旱性。同时,干旱胁迫下未鉴定的丰度差异蛋白质点(DAPs)为克隆新的干旱相关基因和进一步研究小麦的耐旱机理提供了有价值的信息。本试验结果为进一步研究小麦耐旱机理奠定了基础。     

外源GABA对西伯利亚白刺幼苗盐胁迫伤害缓解效应

为探讨外源γ-氨基丁酸(GABA)对盐胁迫下西伯利亚白刺幼苗伤害缓解效应,研究不同浓度GABA(0～10 mmol·L-1)对200 mmol·L-1 NaCl胁迫下西伯利亚白刺幼苗生长、生理特性、渗透调节及GABA支路中关键代谢物含量和关键酶活性的影响.结果表明,NaCl胁迫下白刺幼苗生长指标显著下降,丙二醛(MDA...     

低温胁迫下苦瓜幼苗差异蛋白的表达与分析

[目的]寻找与苦瓜苗期耐低温表达调控相关的蛋白,深入了解苦瓜抗低温机理,为下一步开展苦瓜耐低温分子基础研究及苦瓜耐低温育种打下基础.[方法]以耐冷型MC108和冷敏型MC6苦瓜品种为材料,运用双向电泳技术分析低温胁迫(8℃低温胁迫72 h)下苦瓜苗期叶片蛋白质差异变化.[结果]对2-DE图谱分析发现,冷敏型MC6和耐冷型MC108苦瓜品种间共存在82个差异蛋白点,其中,39个蛋白点上调,36个蛋白点下调,2个新增蛋白点,5个消失蛋白点;对其中24个表达量变化明显的蛋白质点进行MALDI-TOF-TOF/MS分析,经数据库搜索匹配,鉴定出5个未知蛋白和14个功能蛋白,这些蛋白涉及细胞防御、自由基清除、光合作用、基础代谢、蛋白降解等多个功能类别.[结论]在逆境胁迫下苦瓜可通过调节多种蛋白表达来适应外界温度的变化.     

山杏种内POD同工酶及种子可溶性蛋白分析

应用叶片POD同工酶和种子可溶性蛋白PAGE技术,研究丰产、晚花、抗冻和甜仁山杏初选优株的遗传特性及分类,结果表明,60%以上的优株具有可遗传性;叶片POD同工酶和种子可溶性蛋白多态、稳定、活性强,两个指标的聚类分析结果与形态特征和生物学特性分类基本吻合,且具有信息量大和准确性高的特点,认为二者可作为山杏种内变异的遗传标记。     

白刺造林对重盐碱地的改良效果

白刺是野生灌木，抗性强，能够在重盐碱地上生长。选择白刺在黄河三角洲重盐碱地上进行了造林及其对土壤改良效果的研究。结果表明重盐碱地段栽植白刺后，植被覆盖率有了很大提高，土壤迅速脱盐，造林5年后0～20cm土层土壤含盐量显著降低，而土壤容重则显著减小，起到了疏松土壤的作用。此外，白刺的生长还能有效地提高土壤肥力，使得0～20cm土层土壤有机质、全氯、速效磷、有效氯含量有了很大提高，起到了改善土壤性状培肥地力的良好效果。     

天津、黄骅地区西伯利亚白刺枝叶中氨基酸及矿物元素分析

对天津大港和黄骅港地区的西伯利亚白刺叶子和枝条中的18种氨基酸和8种矿物元素质量分数进行了测定,并对必需氨基酸以FAO/WHO氨基酸模式为评价标准进行营养分析,结果表明:所研究白刺的叶子和枝条中氨基酸和矿物元素种类齐全、质量分数丰富,有很高的营养价值,除脯氨酸外,叶子中各成分质量分数均高于枝条中的质量分数。氨基酸中以天门冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸和脯氨酸质量分数最高,白刺叶片和枝条中的第一限制性氨基酸为亮氨酸或"蛋氨酸+胱氨酸";两地区各叶片和枝条中矿物元素质量分数不同,但微量元素质量分数的总体规律相同,由大到小的顺序为:Fe、Mn、Zn、Cu。     

一种省时高效的木本植物蛋白双向电泳分析方法

对蛋白提取方法进行改良并引用毛细管等电聚焦技术,不仅大大降低了木本植物体内次生代谢物质对双向电泳结果的干扰,明显改善了分析效果,而且又经济、快捷,获得了分析木本植物蛋白较好的双向电泳方法．在对毛白杨叶片和胡杨组织分析中获得较满意的结果．     

植物耐寒性的诱导及其与蛋白质的合成、基因表达的关系

论述了诱导植物耐寒性的几种方法,植物耐寒诱导过程中合成的特异蛋白质及基因表达与耐寒性的关系,植物耐寒诱导的种、品种及器官性与蛋白质的及基因表达的关系。     

西伯利亚白刺愈伤组织耐盐生理及外源Ca2+的缓解效应

为探究外源Ca~(2+)对盐生植物耐盐调控机理,以西伯利亚白刺(Nitraria sibirica Pall.)愈伤组织为试验材料,研究不同浓度外源Ca~(2+)对盐胁迫下白刺愈伤组织生长、膜质过氧化程度、抗氧化酶系统及渗透调节物质含量的影响。结果表明,盐浓度≤150 mmol·L~(-1)时,施加一定浓度Ca~(2+)(≤10 mmol·L~(-1))可增加白刺愈伤组织相对生长率,降低电解质外渗率,减少丙二醛(MDA)含量,提高超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化物酶(POD)和过氧化氢酶(CAT)活性,同时提高可溶性糖、可溶性蛋白和脯氨酸含量。当Ca~(2+)浓度过高(10 mmol·L~(-1))时,对白刺愈伤组织生理指标表现不同程度抑制,影响其正常代谢活动。说明一定浓度Ca~(2+)(≤10 mmol·L~(-1))可缓解盐胁迫(NaCl≤150 mmol·L~(-1))对白刺愈伤组织造成的伤害,盐胁迫浓度较高时,外施Ca~(2+)缓解作用较弱,有时表现抑制作用。     

青海野生马蔺驯化栽培试验

 为掌握青海野生马蔺的生态习性、生长发育规律及物候现象,探讨其生产繁育技术和栽培管理措施。采用不同种子处理方法和不同海拔种植,观测其发芽特性、生物学特征、物候指数及生长量和分蘖分株情况。雪藏催芽处理种子,是高海拔地区进行马蔺种子处理较为理想的方式;温度、土壤状况等因子是影响马蔺萌芽及分蘖的主要因子;不同海拔栽培地马蔺的物候期及其各阶段的时间具有明显差异,为229~269d。马蔺对生长环境的适应性很强,节水抗旱,栽培容易,管理粗放,是干旱地区城市园林绿化中颇有推广应用前景的地被植物。     

猪圆环病毒2型核衣壳蛋白基因原核表达载体的构建及表达

用PK-15细胞增殖PCV-2病毒,提取病毒DNA,用PCR方法扩增核衣壳蛋白（Cap蛋白）全基因,克隆到pET-32a载体中,构建了表达载体pETORF2,转化入大肠杆菌BL21中,用胛G进行诱导表达,结果显示表达的蛋白大小与设计不符。同样的方法,又构建了表达栽体pETRF2,含有Cap蛋白的部分基因,结果显示表达的蛋白大小依然与设计不符。对Cap蛋白编码基因进行改造,在不改变原氨基酸序列的基础上,把其编码密码子全部换成大肠杆菌偏爱密码子,根据此序列,设计了4条长引物,参照SOE的原理,用降落PCR的方法扩增出含Cap蛋白表位基因的片段,并克隆到pET-32a栽体中,成功构建了重组表达栽体pETP1P4。SDS-PAGE电泳结果表明,表达的蛋白分子量与设计相符。     

犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒的构建与瞬时表达

[目的]构建犬细小病毒(CPV) VP2基因真核表达质粒,为研究核酸疫苗奠定基础.[方法]参考GenBank中发表的CDV N蛋白基因序列设计引物,采用RT - PCR方法从疑似犬瘟热病犬全血样品中扩增CDV N蛋白基因,将其克隆至真核表达载体pcDNA3.1(+).经测序验证后,小白鼠尾静脉注射瞬时表达CDV N蛋白基因,8h取其肝脏提取总RNA,进行RT - PCR方法扩增.[结果]在病犬的全血样品中扩增得到1 572 bp的CDV N蛋白基因片段,并构建了真核表达质粒pcDNA3.1(+)- CDV N,从瞬时表达的小白鼠肝脏总RNA中可扩增到目的条带.[结论]构建了犬瘟热病毒N蛋白基因真核表达质粒,并在小白鼠体内进行了瞬时表达.