木聚糖酶酶活测定的几点体会

本文总结了在木聚糖酶(制剂)酶活实际测定过程中底物种类、底物配制方式和酶液稀释倍数对测定结果的影响.     

固态发酵植酸酶酶活测定中存在的问题与分析

植酸酶是近年来新出现的一种饲料添加剂,它可以降解饲料中的植酸盐,减少单胃动物饲料中无机磷的添加量,降低动物粪便中植酸磷的排放,具有明显的经济效益和积极的环保意义.     

饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响分析

为找出混合过程中引起固态木聚糖酶酶活测定结果差异的原因,试验研究了主要饲料原料对木聚糖酶酶活测定值的影响。结果表明:酶稀释溶液中加入固态植物原料、液态原料均对木聚糖酶测定值无显著影响,混入预混料会引起酶活测定值的明显下降;液态原料与固态木聚糖酶混合会影响到固态酶的稀释溶解,从而引起酶活测定值的显著下降。     

植酸酶包埋后酶活和热稳定性的变化规律研究

为了了解植酸酶在包埋状态下酶活及酶性的变化,分别对酶的释放情况和热稳定性进行了研究。结果表明,随着时间的延长,包埋酶释放出的酶活逐渐上升(P<0.01),60min时达到最大值;而未包埋酶释放出的酶活逐渐下降(P<0.01),60min时达到最小值。包埋酶和未包埋酶在30、40、50、60、70、80、90和100℃的条件下,随着温度的升高,残留的植酸酶活力下降(P<0.01)。对于包埋酶,当温度升高到70℃时,植酸酶相对酶活仍保持在93%(P>0.05);当温度升高到80℃时,植酸酶的相对酶活才明显下降(P<0.01),不过在100℃时,仍能保持67%的酶活(P<0.01)。对于未包埋酶,当温度升高到60℃时,植酸酶相对酶活明显下降(P<0.01);当温度升高到100℃时,植酸酶相对酶活仅有23%(P<0.01)。通过在统一温度条件下,对包埋酶和未包埋酶处理组的相对酶活的对比发现,在50℃以下时,二者差异不显著,当温度超过60℃时,包埋酶的相对酶活极显著高于未包埋酶。     

植酸酶包埋后酶活和热稳定性变化的规律研究

为了了解植酸酶在包埋状态下酶活及酶性的变化,分别对酶的释放情况和热稳定性进行了研究.结果表明,随着时间的延长,包埋酶释放出的酶活逐渐上升(P＜0.01),60min时达到最大值;而未包埋酶释放出的酶活逐渐下降(P＜0.01),60 min时达到最小值.包埋酶和未包埋酶在30、40、50、60、70、80、90和100℃的条件下,随着温度的升高,残留的植酸酶活力下降(P＜0.01).对于包埋酶,当温度升高到70℃时,植酸酶相对酶活仍保持在93%(P＞0.05);当温度升高到80℃时,植酸酶的相对酶活才明显下降(P＜0.01),不过在100℃时,仍能保持67%的酶活(P＜0.01).对于未包埋酶,当温度升高到60℃时,植酸酶相对酶活明显下降(P＜0.01);当温度升高到100℃时,植酸酶相对酶活仅有23%(P＜0.01).通过在统一温度条件下,对包埋酶和未包埋酶处理组的相对酶活的对比发现,在50℃以下时,二者差异不显著,当温度超过60℃时,包埋酶的相对酶活极显著高于未包埋酶.     

底物浓度对饲用木聚糖酶酶活测定的影响

针对运用终点法以DNS还原糖法测定木聚糖酶活力过程中,底物浓度对测定结果的影响进行了试验分析,并结合实际和理论意义进行综合考虑,提出了在测定过程中对试验结果影响较小的适宜底物浓度,提高准确性和可重复性。     

酶活梯度曲线法测定饲料中木聚糖酶的含量

试验选用加酶肉鸡全价料为样品,利用酶活梯度曲线法测定饲料中木聚糖酶的含量。结果表明:采用改进后的DNS法(即酶活梯度曲线法)测定饲料中木聚糖酶,可以显著提高检测的准确度;同时,此方法也为评定成品加酶饲料的品质提供了参考。     

底物浓度对饲用木聚糖酶酶活测定的影晌

针对运用终点法以DNS还原糖法测定木聚糖酶活力过程中,底物浓度对测定结果的影响进行了试验分析,并结合实际和理论意义进行综合考虑,提出了在测定过程中对试验结果影响较小的适宜底物浓度,提高准确性和可重复性.     

固态发酵饲用植酸酶酶活的快速测定法

植酸酶是近年来新出现的饲用酶制剂,在提高饲料的营养价值和改善生态环境等方面均发挥积极的作用.植酸酶酶活的测定方法很多,但大多比较烦琐,操作时间较长.笔者通过实验发现采用FeSO4--钼蓝法测定饲用植酸酶的酶活比较快速、简便,并且具有较好的准确度 .该方法是利用植酸酶水解植酸盐释放无机磷,通过加入盐酸或10%三氯乙酸(TCA)使水解反应停止,然后加入钼酸铵和FeSO4.7H2O混合液起显色反应,在750 nm下测定其吸光度,以标准磷酸溶液为参照,间接计算被测样品中植酸酶的含量.     

三种底物在检测植酸酶酶活中的对比研究

试验采用完全随机的2×3×6试验设计,考察在不同pH(5.0、5.5)条件下应用3种底物(SigmaP0109、P8810和P3168),检测不同酶活水平(1000、3000、5000、6000、7000U/g和10000U/g)的植酸酶时,其检测值之间的对比关系。结果表明:不同pH条件下,P0109与P3168的检测结果之间差异均不显著,P8810与P3168的检测结果之间差异均极显著;底物P0109可以完全替代P3168进行植酸酶酶活测定;P8810与P3168的检测结果之间存在线性关系,线性方程为:y(pH5.5,P3168)=0.7649x(pH5.5,P8810) 152.18(R2=0.9963)、y(pH5.0,P3168)=0.8767x(pH5.0,P8810) 34.818(R2=0.9979),T检验分析曲线换算值和验证值结果差异不显著,证明两个线性方程可以作为底物P8810替代P3168进行植酸酶酶活测定的换算公式。     

不同底物及NaOH的添加对木聚糖酶酶活测定的影响

本试验采用DNS法对测定木聚糖酶酶活的底物性质进行研究。结果表明：以小麦木聚糖为底物时的木聚糖酶酶活最高,其次是燕麦木聚糖,再其次是山毛榉木聚糖,以桦木木聚糖为底物时的酶活最低;在底物配制过程中一般加入NaOH时测得的酶活低于不添加NaOH时的酶活,但以小麦木聚糖为底物时加入NaOH时测得的酶活高于不添加NaOH时的酶活。     

植酸酶的研制与开发—菌种筛选与酶活的提高

对植酸酶产生菌进行了分离纯化;采用固体培养法生产植酸酶及对酶的性质进行了研究。研究结果表明：以麸皮：米糠＝４：６为主要培养基成分,添加１％（ＮＨ４）２ＳＯ４,０．３％ＭｇＳＯ４。３０℃恒温培养４ｄ后,其酶活可达４５８．７Ｕ。用含ＣａＣｌ２。２％的ｐＨ５．０的醋酸缓冲液抽提效果好。酶的最适反应温度为３５℃。     

几种市售耐高温植酸酶制粒后酶活保留率的研究

六种市售商品耐高温植酸酶,各取5个不同生产批次的重复样,添加到肉鸡中大期饲料,生产制粒后进行酶活保留率的测定,结果显示各样品内不同重复之间的酶活保留率差异均不显著,样品6的制粒后酶活保留率最高、酶活损失最少且变异系数低,优于其他样品。     

不同酶促反应条件及热处理对木聚糖酶活的影响

本试验研究了还原糖法不同酶促反应时间、温度和ｐＨ值及干热、温热处理等因素对木聚糖酶活的影响。结果表明：大多数酶制产品获得最高木聚糖酶的促反应条件是１０ｍｉｎ、６０℃和ｐＨ６．３５。酶活测定时各酶制剂具有较宽的温度适应范围（３５￣７５℃）和较宽的ｐＨ值适应范围（ｐＨ４．５￣７．４）。各酶制剂在较高温度（６５￣９５℃）下干热处理１０ｍｉｎ，其酶活损失较少，而在８５℃温热处理时间愈长，其酶活损失愈多。     

木聚糖酶酶活测定方法的研究

本试验研究了影响木聚糖酶测定的因素.结果表明不同底物、不同底物浓度、酶的稀释度和提取时间都会影响到酶活的测定结果,但蒸馏水及缓冲液作为提取液对酶活无显著影响.测定的吸光度在0.3左右(即0.25～0.5)时酶活的变异较小.     

不同底物对植酸酶酶活检测的影响

试验采用2×5完全随机试验设计,考察不同底物(P3168和P8810)对不同酶活水平(6000、8000、10000、12000和16000U/g)的植酸酶酶活检测的影响。结果表明,以P8810为底物检测的植酸酶酶活显著高于使用P3168为底物的检测结果,但底物类型与酶活水平之间没有显著的互作效应。使用P8810与使用P3168的检测结果之间存在显著的线性关系(P=0.00),线性方程为:y(P3168)=0.843x(P8810)-431.16,R2=0.987。通过对曲线预测值验证的结果表明,可以使用P8810替代P3168作为底物进行植酸酶酶活检测。     

小麦日粮中木聚糖酶和植酸酶对肉仔鸡生长和养分消化率的影响

432只艾维因肉仔鸡用于研究小麦基础日粮中添加木聚糖酶(320FXU/kg)或添加750U/kg植酸酶降低日粮中0.08％的非植酸磷后,对生长性能、日粮表观代谢能、粗蛋白和植酸磷表观消化率的影响。试验结果表明:无论是单一添加木聚糖酶或植酸酶,还是同时添加这两种酶,都能提高1-6周龄肉仔鸡的增重和饲料转化率,降低死亡率。添加木聚糖酶可提高肉仔鸡小麦日粮的表观代谢能2.14％,增加氮的存留量2.58％。750U/kg的植酸酶完全可以降低肉仔鸡小麦日粮中0.08％非植酸磷。添加植酸酶的处理组可提高植酸磷的表观消化率43.25％,减少植酸磷排泄量55.0％。植酸酶和木聚糖酶对全期饲料转化率和植酸磷的表观消化率表现有明显的正互作效应(P<0.05)。     

植酸酶酶活测定时需要了解的问题

尽管饲料工业中应用淀粉酶已经多年．但畜禽饲料中植酸酶的广泛使用却是前所未有的。植酸酶的广泛应用带来了新挑战．那就是在植酸酶活力的表达和测定方法上还未能形成统一的规定。     

植酸酶酶活的近红外光谱快速检测研究

为探讨应用近红外光谱法快速测定植酸酶酶活的可行性,实验选取134个喷雾干燥和66个吸附干燥植酸酶样品,应用偏最小二乘法建立酶活、水分含量校正模型.结果表明,所建立的校正模型有较高的决定系数(RSQ),较低的交互验证误差(SECV).并对预测值与化学分析值之间进行配对t检验,在置信度为99%下,近红外光谱法与标准参考方法测定酶活、水分的结果之间无显著差异.     

用酶联吸附法测定木聚糖酶活力的研究

酶联吸附法(ELSA)检测纤维酶活力是一种利用未降解的酶底物间接测定酶活力的新方法。笔者对该方法的反应条件进行了系统的研究,并对其进行了一定的改进,从而提高了其灵敏度。结果表明:木聚糖酶的反应温度为30℃、时间为20min、pH值为5.4;碱性磷酸酶的显色反应温度为35℃。但为了使木聚糖酶的反应温度接近动物肠道温度,建议在该方法中选用40℃。酶联吸附法检测酶活具有灵敏度高(能够测到样品中含有0.0001μmol/min·g的酶活)、操作简单(1个人在1个工作日内可处理200～300个样品)、成本低等优点。