禽大肠杆菌病免疫保护机理的研究

以禽病原性大肠杆菌O18、O78分离株制成超声波裂解铝佐剂灭活苗免疫14日龄鸡，以相同或不同外膜蛋白型（Outer membrane protein pattern,OMP型）的O18、O78分离株攻毒。结果表明：O78血清相同和不同OMP型分离株间能获得最大保护；O18血清型相同OMP型分离株间获得最大保护，而不同OMP型分离株间不能保护；上述两个血清型的分离株间不论OMP型是否相同，均缺乏保护。以间接ELISA试验、间接血凝试验分别测定了试验鸡临攻毒前针对大肠杆菌OMPs和脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS）的抗体。结果表明：免疫组鸡血清上述两种抗体明显高于攻毒对照组；在免疫组，存活鸡临攻毒前血清中上述两种抗体滴度恒高于死亡鸡，但除3个组外，多数组差异不显著。攻毒对照组这一关系不稳定。结果说明：禽大肠杆菌疫苗的免疫保护，主要与O血清型有关，部分与OMP型有关，如O18分离株，免疫保护性抗原含OMPs,LPS等多个抗原表位。     

非典型鸡新城疫的病因研究初报（一）

应用血清学、生物学方法、从我省产蛋量下降、HI抗体在1：128以上的疑似非典型鸡新城疫（CND）病鸡群中分离到1株病毒，经鉴定和致病力测定，明确是1株ND强毒，毒力与F48E9相近，然后采用该株野毒感染不同抗体水平的3批蛋鸡及肉鸡，结果3批蛋鸡均是低抗体滴度组（1：10－1：40）发生了CND症状，感染后6－7天开始产蛋停止，经15－17天后才恢复产蛋，高抗体滴定组（1：80以上）无明显变化，无抗体对照组出现典型鸡新城疫变化，全部死亡；病毒感染后第6、10天监测HI抗体，结果低滴度组第6天达1：80－1：160，第10天达1：160－1：1280。试验结果表明，我们分离到的NDV，既可引起典型的ND，也可引起非典型的ND；高HI抗体蛋鸡产生非典型鸡新城疫的病因之一，是由于存在低抗体鸡群而发生了CND，其高HI抗体有竞争是由于强毒感染后产生的抗体。     

一株类4/91病毒的初步研究

从发病鸡群中分离到一株病毒，通过鸡胚接种、电镜观察、动物回归试验、气管环交叉中和试验等，初步确定为传染性支气管炎病毒，暂命名为A2。外源病原检查结果为阴性。攻毒试验：在气管、肾以及肌肉等组织均有明显的病变；病理组织观察；在气管、肾脏和肌肉均发生了一定程度的病理变化。利用电泳对传统的病毒株和分离株进行了病毒结构蛋白分析，A2株出现了31kD的特殊蛋白条带。气管环交叉中和试验表明A2株与4／91病毒为同一血清型；临床的动物免疫试验结果表明，4／91疫苗有较好的保护作用。     

伪狂犬病弱毒株的分离鉴定及生物学特性的研究

在流行病学调查中分离到1株病毒,经鉴定为伪狂犬病弱毒株,定名为F971株。分离病毒经克隆纯化后测得其毒价为10^7.59TCID50/ml,通过细胞中和试验表明分离病毒能也有效地被猪伪狂犬病毒闽A株阳性血清中和。病毒在电镜下可以清楚地观察到囊膜及外周纤突。分离株对3日龄乳鼠有一定的致病力,但对家兔、3日龄乳猪及妊娠母猪都有很高的安全性。用不同的剂量10^0、10^-1、10^-2肌肉注射3日龄乳猪后14天用10^5.7TCID50伪狂犬病强毒攻击,所有试验仔猪均得到保护。用分离株免疫母猪,其后代可获高滴度的母源抗体,15日龄的仔猪能抵御10^5.7TCID50强毒的攻击。用ELISA普查试剂盒测定免疫猪抗体,结果均为阳性,而用g^1-ELISA试剂盒测定抗体时,结果均为阴性。证明分离株具有缺损g^1糖蛋白的特性。综合上述特性,确定F971为1株g^1糖蛋白缺损的猪伪狂犬病弱毒株。     

伪狂犬病病毒弱毒株LY株的分离鉴定

从辽阳某猪场的10日龄仔猪中分离到1株病毒，经纯化后测得其毒价为10^7．29TCID50／mL。细胞中和试验表明，该病毒能被猪伪狂犬病病毒标准阳性血清所中和。电镜下可见到典型的疱疹病毒粒子，具有囊膜及外周纤突。所分离的病毒对氯仿、胰蛋白酶、乙醚敏感，在pH5．0-9．0下稳定，56℃ 30min可以灭活。应用特异性引物，通过PCR能扩增出伪狂犬病病毒1240bp的gD基因。分离病毒对3日龄乳鼠有一定的致病力，但对家兔、3—5日龄仔猪及妊娠母猪都有很高的安全性。用不同剂量的病毒培养液肌肉注射于3—5日龄仔猪，14d后用10^5.7TCID50伪狂犬病病毒强毒攻击，所有试验仔猪均可得到有效保护。用分离毒免疫母猪，其后代可获高滴度的母源抗体，15日龄的仔猪能抵抗10^5.7TCID50强毒的攻击。试验的结果初步说明，所分离的病毒为伪狂犬病病毒(命名为PRVLY株)，并可能是一株弱毒株，而且具有很好的免疫保护作用。     

鸡新城疫强毒株的分离与致病特点

从有典型鸡新城疫病变的病鸡组织中分离到一株病毒，该病毒凝集鸡红细胞的作用可被新城疫标准阳性血清所抑制。对鸡胚最小致死量的稀度为10^-7，致死鸡胚的平均时间小于48h，1日龄雏鸡致死指数为1.82。血凝解脱及血凝素热稳定性等试验表明，分离毒为新城疫病毒强毒株，其毒力较标准强毒F48E8株稍强。血凝抑制试验和中和试验表明，分离毒的血凝性与F48E8相同，但中和特性与F48E8有差异。     

禽呼肠孤病毒鸡源分离株的鉴定与人工感染试验

从临床患病鸡关节病料中分离到一株病毒，在电镜下观察到病毒粒子无囊膜，有双层衣壳，外衣壳直径约75nm，内核约50nm；分离病毒株对酸、热有较强的抵抗力，对乙醚不敏感；病毒感染鸡胚成纤维细胞上能产生以融合细胞为特征的CPE；爪垫接种1日龄雏鸡表现出明显的病毒性关节炎临床症状，并伴有吸收障碍型和坏死型的病理变化；血清中和交叉试验表明，该病毒分离株与国内的2株番鸭源呼肠孤病毒（YH和YB）分离株和国外S1133呈不同程度的交叉反应。通过对分离病毒株进行电镜观察、理化特性试验、病毒感染力测定、致病性试验、血清学试验，可以确定该分离病毒为禽呼肠孤病毒。     

新型鸭肝炎病毒的分离及初步鉴定

从北京和广西发病鸭群中分离到2株病毒，分别编号为B株和G株，病毒大小约40nm，无囊膜。血清中和试验表明，2株病毒为同一血清型，与1、3型鸭肝炎病毒和鸭瘟病毒无血清学相关性。人工感染试验表明，G株对雏鸭具有很强的致病性，可引起典型的鸭肝炎病变，但死亡率随雏鸭日龄的增长而明显下降；B株病毒不能致死正常雏鸭，但雏鸭经过环磷酰胺处理后，感染B株病毒可引起雏鸭死亡，死亡鸭肝肿胀、出血。     

贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌的分离鉴定、毒力基因检测及耐药性分析

为了解贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer，RA）的流行血清型、毒力和耐药情况，本试验从贵州省三穗县6个规模养鸭场临床疑似RA感染的病鸭体内分离出6株分离菌，对病原菌进行分离鉴定、毒力基因检测和耐药性分析。细菌分离鉴定结果显示，分离菌在巧克力琼脂培养基上长出表面光滑、圆形半透明的滴状菌落；革兰氏染色呈阴性短小杆菌，瑞氏染色呈两极浓染；分离菌均不具运动性，尿素、触酶和氧化酶试验均为阳性，符合RA生化特性，将6株分离菌分别命名为SS-RA1~SS-RA6；6株分离菌的16S rRNA基因序列与NCBI上RA参考菌株的基因序列相似性≥98%，说明6株分离菌均是RA；SS-RA1~SS-RA4为血清2型且含有8种毒力基因（OmpA、CAMP、wza、AS87_04050、Fur、SIP、TbdR1和luxE基因），SS-RA5和SS-RA6为血清11型，缺失AS87_04050基因，仅含有上述其余7种毒力基因；动物回归试验结果显示，攻毒组雏鸭均全部死亡，对照组雏鸭未表现明显临床症状，表明6株分离菌对雏鸭均有致病力；药敏试验结果显示，6株分离菌仅对羧苄西林、哌拉西林、头孢他啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢拉定和头孢哌酮7种抗菌药物敏感，对其他13种抗菌药物均表现不同程度的耐药，对氨基糖苷类和大环内酯类抗菌药物的耐药率为100%。本试验成功分离得到6株RA，为贵州省三穗县鸭疫里默氏杆菌病的疫苗选择和药物防治提供理论依据。     

鸡胚源大肠杆菌的分离鉴定及其致病性和耐药性分析

为了解鸡胚来源大肠杆菌的致病性和耐药性情况，本试验对山东省某白羽肉鸡孵化场6个不同批次种蛋孵化后随机抽检的174枚啄壳未出壳死胚的卵黄和胎粪进行了大肠杆菌分离。通过细菌培养、形态观察、生化试验方法鉴定大肠杆菌；通过小鼠攻毒试验和毒力基因PCR检测确定大肠杆菌分离株的致病性；利用纸片扩散法药敏试验检测大肠杆菌分离株的耐药性。结果显示，共分离鉴定大肠杆菌28株；小鼠攻毒试验结果显示，27大肠杆菌分离株对小鼠的致死率达到了50.0%以上，其中有24株超过了83.0%;在检测的14种毒力基因中，papA、papC、eaeA和vat四种基因未检出，fimC检出率最高(85.7%),另外9种毒力基因检出率介于3.6%～64.3%;菌株的致病性与携带的毒力基因数量大致呈正相关；耐药性检测结果显示，大肠杆菌分离株对10种抗菌药物具有不同程度的敏感性，耐药率介于17.9%～89.3%。结果表明，本试验分离的鸡胚源大肠杆菌绝大多数具有致病性，对临床常见抗菌药物存在不同程度的耐药。本试验结果为种鸡场加强大肠杆菌垂直传播的管理和控制以及临床用药的选择提供了参考依据。     

鸽新城疫野毒株的分离及生物学特性研究

对分离的Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３３株鸽新城疫病毒进行了电镜检查、致病性指数测定、血凝试验（ＨＡ）,与鸡新城疫Ｌａｓｏｔａ毒株的交叉血凝抑制试验（ＨＩ）、致病性试验。测得鸡胚半数感染量（ＥＩＤ５０）分别为１０－８．４１,１０－７．５３,１０－７．８３;鸡胚最小致死量（ＬＤ）均为１０－４;鸡胚平均致死时间（ＭＤＴ）分别为８０ｈ,９０ｈ,９６ｈ;１日龄雏鸡脑内致病指数（ＩＣＰＩ）分别为１．６０,１．５０,１．５５;分离毒株与Ｌａｓｏｔａ毒株和其相应血清的交叉凝集抑制试验有明显差异。将分离毒株分别接种１月龄鸽各３只,４～１０ｄ全部出现典型神经症状,１５ｄ内死亡。结果表明所分离的３株病毒为鸽新城疫病毒,在抗原性上与鸡新城疫病毒存在一定差异,对鸡也有一定致病力。为制定防制措施,研制鸽新城疫疫苗,控制新城疫流行提供了科学依据。     

禽流感H9亚型流行毒株交叉免疫保护试验

采用北京市农林科学院畜牧兽医研究所1998年-2008年在北京及河北省分离的4株禽流感病毒H9亚型流行毒株,分别制备不同分离毒株灭活疫苗,免疫SPF鸡,进行交叉免疫保护试验。结果表明,用4个不同时期的分离毒株所制备出的灭活疫苗免疫鸡后,各免疫组鸡禽流感(H9亚型)的HI抗体效价均明显上升,所诱导产生的HI抗体效价基本相同;不同时期分离毒株大多产生了较好的交叉保护力。用1998年、2004年及2006年分离的流行毒株制备出的灭活疫苗能够保护2008年流行毒株的攻击。     

鸽新城疫病毒的分离及鸽群自然感染状况的调查

将在北京某信鸽群采集的两只具神经症状的病鸽脑组织悬液接种ＳＰＦ鸡胚后，分离出二株病毒分离物ＰＢ９６０１和ＰＢ９６０２，通过对鸡红血球的血球凝集试验，用已知鸡新城疫病毒（ＮＤＶ）高免血清任务在球凝集抑制试验（ＨＩ）及２～３月龄鸽的攻毒试验，证明这两个毒株为对鸽呈高致病性的ＮＤＶ。交叉ＨＩ试验表明，鸽ＮＤＶ分离株与鸡ＬａＳｏｔａ株间有很高的血清交叉反应，但也存在着一定抗原性差异。对扬州地区若鸽群中２－     

Serological profiles of commercial broiler breeders and their progeny. 1. Infectious bronchitis virus

Serum samples were collected from broiler breeders and their 1-day-old, 2-week-old, and 5-week-old progeny from different regions of the United States. Individual samples were tested by hemagglutination-inhibition (HI) against six infectious bronchitis virus (IBV) strains: Massachusetts 41 (Mass), H52, Connecticut 46 (Conn), Arkansas 99, SE17, and JMK. The use of multiple strains to test broiler flocks resulted in the detection of seroconversions to Conn and JMK vaccination that were not detected with the IBV Mass HI test. Further, HI titers were detected to IBV strains not used for flock vaccination. In some cases, those titers could be due to cross reactions to antigens common to each of the virus strains. In two breeder flocks, the highest HI titers were to heterologous strains.     

H3N2亚型猪流感病毒中国分离株的克隆纯化及生物学特性

以有限稀释克隆法对29株H3N2亚型猪流感病毒(SIV)不同地区分离株进行纯化，并对其生物学特性进行了研究。结果，8株对鸡呈现中等致病力，21株对鸡呈现低致病力。不同地区SIV分离株(第5代)的EID50差异较大，以安徽分离株最高，为10^-10.77／0．2mL，其他毒株在10^-5.5～10^-10.56／0．2mL之间。黑龙江省分离株和浙江省分离株的LD50高达10^-2.84／0．1mL，其他分离株在10^-1.17～10^-2.56／0．1mL之间。经鸡胚分离传代后，SIV分离株均能凝集0．7％人“O”型血、绵羊、兔、豚鼠、小鼠、大鼠及鸡的红细胞，其红细胞凝集谱的差异主要表现在对马、牛、驴、猪红细胞的凝集特性上。大部分SIV分离株为热不稳定型，部分毒株表现为中等热稳定型和热稳定型。从其抗原特性看，大部分SIV分离株表现为亲和相，对AIV参考毒株DKUK63和SIV参考毒株SWTN77表现出较高的HI滴度；部分分离株经鸡胚传代后，出现了相别的变异。     

DNA fingerprinting of Australian isolates of Mycobacterium avium subsp paratuberculosis using IS900 RFLP

OBJECTIVES: To evaluate additional restriction enzymes for IS900 RFLP of Mycobacterium avium subsp paratuberculosis and examine the genetic diversity among Australian isolates for epidemiological studies of Johne's disease. DESIGN AND PROCEDURE: Seventy-one isolates of M paratuberculosis from cattle, sheep, goat, alpaca and rhinoceros in six Australian States and the Northern Territory, reference strains and reference DNA from previously characterised strains were tested for genetic variation. Bst EII, Pvu II and Pst I restriction enzymes were used, and four others (Bam HI, Alu I, Xho I and Dra I) were assessed for their ability to detect polymorphisms. Multiple isolates from some animals were tested. RESULTS: Bam HI, was the most effective enzyme for identifying polymorphisms (12 types), followed by Bst EII (11 types). Both Pvu II and Pst I were relatively ineffectual. Fifteen different types were identified, 12 in clinical isolates. Most isolates were cattle (C) strains and fell into the C1 (n = 28) and C3 (n = 32) groupings. All isolates from alpaca were type C1, and bovine isolates were commonly C1 (n = 15) or C3 (n = 28). All of the sheep were infected with sheep (S) strains; no S strains were identified in cattle. Two of six isolates from one animal had single band differences. CONCLUSION: The epidemiological features of M paratuberculosis in Australia are similar to those reported in New Zealand, where cattle and sheep are commonly infected with different strains. However, because of the lack of polymorphism identified within the major groups, it is unlikely that DNA fingerprinting will have a significant role in epidemiological studies of Johne's disease, unless an unusual strain in being studied.     

10株新城疫病毒分离F基因的克隆及遗传变异分析

对10株具有一定代表性的NDV分离株的F基因进行RT-PCR扩增和序列测定,核苷酸序列及其推导的氨基酸序列比较结果表明:F基因核苷酸序列的同源性为93.6%,推导氨基酸序列同源性为95.39%;根据F基因裂解位点的氨基酸序列推测,其中2株属于弱毒株,8株属于强毒株,该结果与致病性试验测定的结果完全相符;不同年代、不同宿主分离株的F基因序列一致,高度保守.通过BLAST SEARCH比较,8株强毒株与广东鹅分离株GDGO(Y97)高度同源,处于进化树的同一分支.2株弱毒分离株与La Sota疫苗株仅有1～4个氨基酸改变,推测可能是免疫或散播La Sota疫苗株.抗原性指数分析表明HI分离株有三处明显变异,抗原位点推测分析表明H分离株比F48株和La Sota多出6个抗原位点,而Liu株抗原位点在446位后缺失.     

二株副鸡嗜血杆菌分离株的生物学特性鉴定

本试验对从广西分离的４株疑似副鸡嗜血杆菌（Ｈ．ｐｇ）（ＧＸ－９５,ＧＸ－９７,ＧＸ－９８－１,ＧＸ－９８－２）进行生物学特性研究。根据生物学特性,ＧＸ－９７和ＧＸ－９８－１被定为Ｈ．ｐｇ,ＧＸ－９５和ＧＸ－９８－２的生化反应特性有明显差异,用标准Ｈ．ｐｇ血清未能定型。交叉血凝抑制（ＨＩ）试验显示,各菌株之间的交叉ＨＩ效价达１６０,但各菌株与其本身的抗血清ＨＩ效价达１２８０,显示出很强的菌株特异性。抗菌素敏感试验也显示ＧＸ－９７、ＧＸ－９８－１和参考菌株的药敏谱更加相似。     

副鸡嗜血杆菌B型分离株免疫原性的比较和疫苗株的筛选

利用分离自我国不同地区的3株B型副鸡嗜血杆菌菌株及0222标准株分别制作油乳剂灭活疫苗免疫无鸡传染性鼻炎病史的鸡群，通过攻毒保护试验和HI抗体测定，分析比较了其免疫原性，以筛选适用于制备疫苗的菌株。结果表明：不同地区的分离株在致病性和免疫原性上存在-定的差异，TJ-1株疫苗免疫鸡对TJ-1和DL-1株的保护作用可达90％和91．7％，对BJ-1株的保护率为63．6％，具有相对较好的保护作用，目前可以作为疫苗株使用。在各免疫组试验鸡中，0222株和BJ-1株免疫鸡群的血清抗体水平较高，但这可能与血凝抑制试验所采用的抗原是由0222株制备的及BJ-1株在抗原性上可能更接近于0222株有关。DL-1和TJ-1株疫苗免疫鸡的抗体水平都很低，但其免疫保护却要强于0222和BJ-1株疫苗免疫鸡。由此说明B型株因菌株之间免疫原性的差异使得HI抗原的选择难度增加。     

Hemagglutination and antigenic comparison of rabbit hemorrhagic disease virus

The hemagglutinating activity and serological properties of three strains of rabbit hemorrhagic disease virus, Chinese, Korean and Shizuoka, which was first isolated in Japan, were examined by hemagglutination (HA) and cross hemagglutination inhibition (HI) test with human erythrocytes. Similar results were observed between the Chinese and Korean strains, both of which gave positive HA at 4 degrees C with O, A, B and AB, and at 22 degrees C with B and AB blood groups. In the Shizuoka strain, positive HA was observed at 4 degrees C with O, A, B and AB, at 22 degrees C with A, B And AB, and at 37 degrees C with B blood group. In experimentally infected rabbits, HI antibody in these animals showed a titer of 16,384 or 32,768 at 4 weeks after inoculation. No serological difference was observed in three strains by cross HI test.