鱼源芽孢杆菌在石斑鱼稚鱼育苗中的应用研究

利用芽孢杆菌SE5和DE5单独及联合强化桡足类,研究SE5和DE5对斜带石斑鱼稚鱼生长、存活率、水质及水体和稚鱼体内细菌总数和弧菌数量的影响。试验结果表明,饲养14d时,SE5组和DE5组体长显著高于对照组,混合组体长和体质量显著高于对照组。饲养28d时,SE5组和DE5组体长和体质量均高于对照组,混合组体长和体质量显著高于对照组。饲养28d时,SE5组和DE5组存活率显著高于对照组。14d时SE5组和混合组水体NH3-N显著低于对照组,28d时各组NH3-N均低于对照组。14d时,混合组水体NO2-N显著高于对照组,28d时各试验组NO2-N均显著高于对照组。试验结束时(28d),各试验组水体细菌总数均高于对照组,SE5组和DE5组水体弧菌数量高于对照组;DE5组和混合组活饵细菌总数高于对照组,各试验组活饵弧菌数量高于对照组,其中混合组显著高于对照组;各试验组稚鱼体内细菌总数高于对照组,其中DE5组显著高于对照组。DE5组稚鱼体内弧菌数量显著高于对照组,SE5组高于对照组。     

2株芽孢杆菌对4种抗生素的耐药性研究

采取连续、多次等质量浓度更换抗生素的方法培养细菌,检测2株芽孢杆菌对庆大霉素、硫酸卡那霉素、盐酸四环素和氯霉素的敏感性变化.试验结果表明,抗生素质量浓度为1.0×10-4～1.0×10-12 mg/ml时,2株芽孢杆菌对4种抗生素均能产生耐药性,但在不同种类抗生素溶液中产生耐药性速度存在差异:2菌株对氯霉素产生耐药性速度较快,5次连续换药培养后细菌对该药的敏感性均降为0;在其余3种抗生素药液中变化较为接近,其中在庆大霉素中影响最小.连续使用的药物质量浓度对细菌药敏结果也会产生一定影响:培养前期,质量浓度越高,抑菌圈越大;后期抑菌圈大小趋于一致.     

山姜对益生芽孢杆菌体外抑菌活性试验研究

为研究中草药山姜粗提液对益生芽孢杆菌体外抑菌效果,特采用试管二倍稀释法和管碟法检测不同浓度的山姜煎煮液和乙醇提取液在体外对蜡样芽孢杆菌PAS38菌株和枯草芽孢杆菌Pab04菌株的最小抑菌浓度(MIC)和抑菌直径,并以肠毒性大肠杆菌(ETEC)、4μg/mL硫酸庆大霉素作阳性对照,生理盐水作阴性对照。结果表明,山姜煎煮液和乙醇提取液对两株益生芽孢杆菌和ETEC无抑菌作用,硫酸庆大霉素对蜡样芽孢杆菌PAS38和枯草芽孢杆菌Pab04菌株MIC均为1.25μg/mL,对ETEC的最低抑菌浓度MIC为0.625μg/mL。山姜煎煮液和乙醇提取液对受试菌株抑菌直径与生理盐水相比差异不显著(P>0.05),硫酸庆大霉素与其相比差异极显著(P<0.01)。山姜粗提液对两株益生芽孢杆菌无明显抑菌作用。     

刺参养殖池塘一株贝莱斯芽孢杆菌的分离及其生理特性

2014年5月,在东营的刺参(Apostichopus japonicus)养殖池塘环境中对水样和底泥样品进行了细菌分离和益生菌的筛选,共获得66株可培养细菌。以刺参"腐皮综合征"主要致病菌为指示菌进行拮抗作用实验,使用选择培养基对菌株的产淀粉酶和蛋白酶能力进行测定,筛选获得一株潜在益生菌株——DY-6,并进行了生理生化实验、16S r DNA基因序列分析、菌株生长特性及其对刺参的安全性研究。结果表明,DY-6对其指示菌假交替单胞菌(Pseudoalteromonas nigrifaciens)、灿烂弧菌(Vibrio splendidus)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)和溶藻弧菌(Vibrio alginolyticus)均有良好的抑制作用,抑菌圈直径分别达到24 mm、22 mm、27 mm和37 mm,对淀粉和蛋白培养基的水解直径分别为28 mm和20 mm。利用该菌对刺参进行高浓度胁迫实验测试其安全性,实验期间浸浴组和投喂组刺参状态良好,没有发病和死亡现象。利用细菌生理生化和16S r DNA基因序列分析表明,DY-6与贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis CP015911)的相似性为99%。因此,初步鉴定该菌株为贝莱斯芽孢杆菌。同时,将该菌株与商品化微生态制剂产品中分离的4株益生菌进行了比较,DY-6在温度20~35℃、盐度0~35范围内生长较快,优于上述4株菌,4 h进入对数生长期,10 h达到生长高峰。筛选的贝莱斯芽孢杆菌具有良好的抑菌能力,生长速度快,并且具有广温广盐的优点,不仅能够降低疾病发生率,还可更好地适应黄河口地区夏季水温偏高、盐度波动大的特点,由此具有良好的益生菌商业化开发潜力。     

池塘芽孢杆菌的筛选、鉴定和生长特性研究

以高产南美白对虾池塘中分离的芽孢杆菌为研究对象,通过筛选和形态学、理化特性以及核酸特征测定,鉴定为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans,编号为ZJ0519),并对其生长特性进行了初步研究.结果表明,菌株ZJ0519生长最适温度为30～45℃,最适初始pH值为6.0～7.0,并具有广盐性,在盐度为0～30的培养基中都可以生长.此外,菌株ZJ0519发酵液代谢产物有机酸组分分析显示,主要为乳酸和醋酸,其中乳酸产量可达(7.65±0.14)g/L;为B.coagulans作为益牛菌在水产养殖池塘微生态调节中的应用奠定了基础.     

1株好氧反硝化芽孢杆菌的脱氮特性研究

以具有较强反硝化能力的芽孢杆菌D5为出发菌株,研究了其牛长及好氧脱氮特性.研究结果表明,在高浓度的亚硝酸盐环境下其仍具有相当强的反硝化能力,且碳源为乙酸钠时脱氮能力最强.当碳源浓度0.2 mol/L、温度36℃、初始pH 7.0、溶氧5～7 mg/L时具有最佳的反硝化活性.和已报道的反硝化细菌相比,其具有更强的耐氧能力,同时也具有较高的反硝化速率.     

一株芽孢杆菌用作水霉病防治的研究

水霉病(Saprolegniasis)是包括草鱼等四大家鱼在内的淡水鱼最常见的真菌病,以往较为有效的防治药物为孔雀石绿,孔雀石绿禁用后渔业生产上对该病的防治遇到了极大的困难。本文分离到一株芽孢杆菌Sh1,经16S rDNA序列测定确定为解淀粉芽孢杆菌。水霉菌拮抗实验表明,Sh1菌落周围产生直径约12 mm的抑菌圈。动物安全性实验表明,腹腔注射108CFU/mL的Sh1对草鱼的生长没有任何不良影响。显微观察表明,Sh1能明显抑制水霉菌的菌丝生长。对Sh1发酵液中活性成分的理化性质进行分析,发现蛋白酶K消化、加热处理、有机溶剂抽提等都不影响其对水霉菌的抑制作用,从而推断该物质为非蛋白的耐热的可溶性化合物。这些数据表明Sh1有希望用作提取替代孔雀石绿的水霉病药物的生物药源。     

一株具水霉抑制特性的芽孢杆菌筛选及其分子生物学鉴定

以水霉菌(Saprolegnia ferax)的生物防治为切入点,通过对本实验室保存的9株芽孢杆菌(Bacillus spp.)与水霉菌JL菌株进行对峙拮抗试验,筛选出具有明显抑制水霉菌JL菌株的芽孢杆菌BA1(P<0.05)。经进一步测定菌株BA1对不同来源水霉菌株试验,结果显示菌株BA1对水霉菌株6#、10#、S2也有明显的抑制作用(P<0.05)。通过测定菌株BA1的16 S rDNA,利用BLAST软件进行同源性比对,发现与蜡样芽孢杆菌的同源性在99%以上。由此推测,菌株BA1为蜡样芽孢杆菌菌株,且具有明显抑制水霉菌作用,可以作为水产养殖上水霉病防治的生物制剂使用。     

一株短小芽孢杆菌B1的筛选鉴定及其抗菌特性研究

为筛选抗水产弧菌的益生菌株,自西沙海域采集的珊瑚和海水样品共分离到125株细菌,从中筛选出1株无溶血性且对多株病原菌具有拮抗作用的海洋细菌B1。基于生理生化及16SrDNA序列鉴定海洋细菌B1为短小芽孢杆菌。以副溶血弧菌13150为病原指示菌,用琼脂扩散法测定发酵液抑菌活性,并通过卤虫浸泡方式和药敏试验方法检测短小芽孢杆菌B1的安全性,同时进行温度、酸碱度、盐度的发酵条件优化研究。试验结果显示,短小芽孢杆菌B1对副溶血弧菌、溶藻弧菌、哈氏弧菌等有显著的拮抗作用;共培养试验显示,加入等量短小芽孢杆菌B1无菌上清液可显著抑制副溶血弧菌的生长;安全性试验发现,短小芽孢杆菌B1对卤虫的72h半致死密度为108cfu/mL,副溶血弧菌13150的72h半致死密度为105cfu/mL。此外,药敏试验表明,短小芽孢杆菌B1只对20种常规抗生素中的5种产生抗性;优化后的短小芽孢杆菌B1发酵条件为:温度30℃,pH 7.0,NaCl质量分数为2%。研究表明,短小芽孢杆菌B1具有防治水产养殖病原弧菌的应用潜力。     

一株产絮凝剂芽孢杆菌的分离鉴定及絮凝剂特性分析

从山东及河北沿海分离到一株产絮凝剂细菌(编号200903091102,简称1102),分别用细菌全脂肪酸气相色谱法和16S rDNA序列分析比对法对该菌进行鉴定,两种方法的鉴定结果均显示细菌1102为一种芽孢杆菌(Bacillus sp.)。系统发育分析显示,细菌1102与枯草芽孢杆菌(B.subtilis)、特基拉芽孢杆菌(B.tequilensis)等亲缘关系最近。应用高氏1号培养基培养细菌1102,提取其絮凝剂进行絮凝力测定,结果显示,该菌所产絮凝剂的絮凝率达到80.19%。发酵72 h时,絮凝剂得率最高达19.5 g/L;分别采用凝胶渗透色谱法、苯酚-硫酸法及氨基酸自动分析仪对所得絮凝剂的相对分子质量、多糖含量及氨基酸含量进行分析,结果显示絮凝剂的重均相对分子质量为7 063 D,多糖质量分数占58.58%,氨基酸质量分数占2.49%。提示该菌在海水养殖中将具有较高的开发价值。本研究旨在为海水养殖废水的生物净化提供科学依据。     

斜带石斑鱼溶藻弧菌病的研究

从患病的斜带石斑鱼肝和肾组织分离的两株病原菌,进行纯化培养、人工感染、VITEK-AMS-32自动微生物分析鉴定及药敏试验,经形态和生理生化测定,确定为溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)。组织病理变化主要表现为鳃、肝和肾细胞变性、坏死,病变组织炎性细胞浸润,呈变质性炎症。     

深水抗风浪网箱斜带石斑鱼生长研究

研究深水抗风浪网箱养殖斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的生长特性。经过125 d的养殖,斜带石斑鱼体重由15.2 g增加到102.8 g,平均日增长率为4.610%,体重和时间的关系式为M=12.247e0.014 7 t;全长由9.67 cm增加到19.36 cm,平均日增长率为0.802%,全长与时间的关系式为L=0.063 7 t+9.186 3;体重和全长的关系式为M=0.012 7 L3.051 1。     

斜带石斑鱼幼鱼的饲料精氨酸需求量

通过配制7种含不同水平精氨酸(2.13%、2.42%、2.71%、2.95%、3.20%、3.48%、3.74%干物质)的等氮、等脂的实验饲料,研究精氨酸对斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)幼鱼生长、饲料利用和血清一氧化氮合酶等的影响。每组设3个重复,每个重复30尾鱼(7.52±0.02g),饲喂8周。结果显示,饲料精氨酸水平对各组存活率无显著影响(P0.05);精氨酸水平为2.95%的斜带石斑鱼获得最大增重率和特定生长率,显著高于其他各组(P0.05);2.95%组饲料系数显著低于2.13%、2.42%和2.71%组(P0.05);3.20%组体蛋白达到最大,显著高于2.13%组(P0.05)。随着饲料中精氨酸水平的增加,斜带石斑鱼幼鱼血糖含量呈逐渐降低的趋势,2.13%与2.42%组显著高于其他各组(P0.05)。2.95%组血清总蛋白和血清总一氧化氮合酶显著高于其他各组(P0.05)。研究表明,日粮中适宜的精氨酸水平不仅能促进斜带石斑鱼幼鱼生长和体蛋白的合成,还能提高机体免疫力。以特定生长率为判据,通过二次多项式回归分析表明,斜带石斑鱼幼鱼精氨酸的最适需要量是饲料干重的3.06%(饲料蛋白含量的6.07%)。     

Quantitative l-lysine requirement of juvenile grouper Epinephelus coioides

An 8‐week feeding trial was conducted to determine the quantitative lysine requirement of juvenile grouper Epinephelus coioides (initial mean weight: 15.84 ± 0.23 g, mean ± SD) in eighteen 500‐L indoors flow‐through circular fibreglass tanks provided with sand‐filtered aerated seawater by feeding diets containing six levels of l ‐lysine ranging from 19.2 to 39.5 g kg^?1 dry diet in 4 g kg^?1 increments. The diets, in which 250 g crude protein kg^?1 diet came from fish meal and soybean protein concentrate, and 230 g kg^?1 from crystalline amino acids, were formulated to simulate the amino acid profile of 480 g kg^?1 whole chicken egg protein except for lysine. Each diet was assigned to three tanks in a completely randomized design. Grouper were fed to apparent satiation twice daily during the week and once daily on weekends. Weight gain and specific growth rate increased with increasing levels of dietary lysine up to 27.2 g kg^?1 (P < 0.05) and remained nearly the same thereafter (P > 0.05). Feed efficiency was the poorest for fish fed the lowest lysine diet (P < 0.05) and showed no significant differences among other treatments (P > 0.05). Survival could not be related to dietary treatments. Body composition remained relatively constant except for lipid contents in muscle and liver. Total essential amino acid contents in liver increased with dietary lysine level although there was a slight decline for fish fed the highest lysine level of diet. Plasma protein content increased with increasing dietary lysine level (P < 0.05), but cholesterol, triacylglycerol and glucose contents were more variable and could not be related to dietary treatments. Dietary lysine level significantly influenced morphometrical parameters (condition factor, hepatosomatic index and intraperitoneal fat ratio) of juvenile grouper (P > 0.05). Broken‐line analysis of weight gain indicated the dietary lysine requirement of juvenile grouper to be 28.3 g kg^?1 diet or 55.6 g kg^?1 dietary protein.     

斜带石斑鱼病原菌(哈维氏弧菌)的分离与鉴定

从患病斜带石斑鱼 (Epinepheluscoioides)肝脏组织分离到EcGY0 2 0 4 0 1菌株 ,经人工感染、回归感染实验证实为致病菌。通过API系统和菌体常规形态特征、培养特性和生理生化反应指标测定以及 16SrRNA测序分析等综合鉴定 ,Ec GY0 2 0 4 0 1菌株为弧菌属哈维氏弧菌 (Vibrioharveyi) ,其半致死剂量LD50 为 2 .7× 10 6CFU/g鱼体重。药敏试验结果表明 ,EcGY0 2 0 4 0 1菌株对利福平、四环素、喹诺酮类及头孢曲松等抗生素较为敏感     

Alternative vegetable lipid sources in diets for grouper, Epinephelus coioides (Hamilton): effects on growth, and muscle and liver fatty acid composition

The aim of this study was to investigate the effects of different oils on growth performance and lipid metabolism of the grouper, Epinephelus coioides. Five experimental fish meal‐based isonitrogenous and isolipidic diets were formulated containing either 5.5%‐added fish oil (FO), soybean oil (SBO), corn oil (CO), sunflower oil (SFO) or peanut oil (PO). Each diet was fed to triplicate groups of 20 fish (initial body weight 13.2±0.02 g) grown in seawater at 28.0–30.5 °C for 8 weeks. Fish were fed twice a day to visual satiety. No significant differences in the survival, weight gain, specific growth rate, feed conversion ratio, protein efficiency ratio or hepatosomatic index were found between fish fed the FO or vegetable oils (VO) diets. Dietary lipid sources did not affect whole‐body composition among grouper fed the various diets. Muscle of fish fed the FO diet had significantly higher levels of 14:0, 16:0, 16:1n‐7, 20:5n‐3[eicosapentaenoic acid (EPA)] and docosahexaenoic acid (DHA)+EPA (except for PO fed fish) compared with those of fish fed VO diets. However, the levels of 18:1n‐9, 18:2n‐6 and DHA/EPA ratios in the muscle of fish fed FO diet were significantly lower than those of fish fed the VO diets. The liver of fish fed the FO diet had significantly higher levels of 18:0, 20:5n‐3, 22:6n‐3, n‐3 highly unsaturated fatty acids and DHA+EPA than those of fish fed the VO diets, whereas increases in 18:1n‐9, 18:2n‐6 and mono‐unsaturated fatty acid levels were observed in the liver of fish fed the VO diets.     

斜带石斑鱼牛磺酸转运蛋白基因的克隆及饲料牛磺酸含量对其表达的影响

牛磺酸转运蛋白(Taurine transporter,TauT)是牛磺酸跨膜转运的重要载体,在鱼类的生长、代谢及性成熟过程中发挥重要作用。本文采用RT-PCR和RACE技术,克隆体质量(12.85±0.46)g的斜带石斑鱼Epinephelus coioides TauT cDNA蛋白质编码区序列。结果表明:斜带石斑鱼TauT cDNA蛋白质编码区为1 881bp,编码626个氨基酸,分子量为70 126.80Da,与已克隆的其他鱼类的同源性很高,而与鸟类和哺乳动物的同源性较低。在水温(27±2)℃下,给斜带石斑鱼投喂含牛磺酸0%、0.5%、1%和1.5%的饲料28d后,用Realtime PCR法检测不同组织中TauT mRNA的相对表达量,结果表明:TauT mRNA在所测的各组织中均有表达,但肝脏、心脏、脑表达水平最高,肾脏、鳃、脾脏次之,肠道、肌肉、脂肪组织最低。牛磺酸添加组中组织TauT mRNA的表达量均高于对照组,1.0%和1.5%两组间差异不明显,但均高于0.5%组。饲料中添加牛磺酸能促进斜带石斑鱼组织中TauT mRNA的表达。     

一株斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）病原菌的分离与鉴定

2011年7月,福建省晋江某养殖场养殖的斜带石斑鱼( Epinephelus coioides )发病,病鱼体重3~10 g,症状为鱼体色变深,拒食,离群缓慢游动,背鳍下方局部鳞片脱落、表皮溃烂,肝脏点状发红。2011年7月从濒死病鱼肝脏、肾脏中分离到2株细菌,分别命名为201107-I与201107-II,经生理、生化指标和16S rRNA 基因鉴定,这两株均为哈维氏弧菌( Vibrio harveyi )。毒性实验发现这两株菌都能引起斜带石斑鱼表皮溃烂症,其中201107-II毒性较强,被用于后续感染实验。通过肌肉注射、腹腔注射与创伤浸浴3种方式进行回归感染实验,得到3种方式对石斑鱼的半致死量LD50分别为4．3×104、2．9×105和5．4×106 cfu/g鱼体重。从人工感染的石斑鱼肾脏中再次分离到该菌,经生理、生化指标和16 S rRNA 基因鉴定,为同株菌。药敏实验结果表明,该菌株对红霉素、大观霉素、氯霉素等16种抗生素高度敏感,对呋喃唑酮、克拉霉素、环丙沙星等9种抗生素中度敏感,对苯唑西林、青霉素G、万古霉素等13种抗生素不敏感。本研究对石斑鱼病害防治与健康养殖具有一定的指导意义。     

石斑鱼配合饲料中发酵豆粕和豆粕部分替代白鱼粉的研究

在浮式海水网箱(1.5m×1m×1.5m)中养殖石斑鱼幼鱼(9.4±0.1g),在等氮(52% CP)基础上进行以发酵豆粕和普通豆粕替代鱼粉的实验, 为期56天.结果显示在石斑鱼饲料中添加14%发酵豆粕,其增重率、特定生长率(SGR)、饲料效率和蛋白质效率与对照组没有显著性差异(P>0.05),以后随着发酵豆粕添加量的上升,这些指标都显著下降(P<0.05).在同样替代水平下,添加21%发酵豆粕组,增重率,SGR,饲料效率和蛋白质效率都比添加20%豆粕组高(P<0.05),表明对海水肉食性鱼类来说,发酵豆粕是一种比豆粕更优良的蛋白源.用折线模型分析增重率随白鱼粉替代水平的变化关系,结果表明在石斑鱼配合饲料中,发酵豆粕替代白鱼粉的最适量为10%.从实际生产的经济效益出发,建议在饲料中添加14%发酵豆粕,对石斑鱼的生长和鱼体组成不会造成显著影响.