鸭疫里氏杆菌免疫原性研究

本研究应用电镜对Ⅰ型鸭疫里氏杆菌荚膜进行了初步观察，在电镜下，负染的菌体周围呈一电子透明层；未经抗体处理的细菌超薄切片，荚膜在菌体周围呈松散的絮状结构，而应用同源抗体处理后，荚膜呈一均匀层。同时在超薄切片中还看到细菌的空泡和外膜结构。采用十六烷基三甲基溴化铵（ＣＴＡＢ）成功地提取了培养物上清液中的荚膜成分，经过测定比较，加入５ｍＭ ＣＴＡＢ时效果最佳。     

猪肺炎霉形体细胞及细胞膜的超微结构

对猪肺炎霉形体168菌株细胞及细胞膜的超微结构进行了观察。负染、扫描电镜及超薄切片结果表明,猪肺炎霉形体168菌株细胞主要为球形或椭圆形,细胞直径约为0.6微米。有些细胞质膜外还有一层似荚膜状结构。冰冻断裂电镜技术结果表明,猪肺炎霉形体膜脂双层内部有较多的内部蛋白颗粒,颗粒直径约为100埃。关于质膜外存在荚膜结构与致病性的关系进行了初步讨论。     

产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌表达产物的免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）经动物试验证实没有毒性。从ＩＰＴＧ诱导后的工程菌中提取包涵体,再辅以氢氧化铝胶制成抗原,免疫小鼠３０ｄ后,用产气荚膜梭菌强毒株培养上清及培养菌体攻击,结果免疫鼠能抵抗至少２ＬＤ１００的攻击,证明Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）工程菌株表达产物具有良好的免疫原性。     

产气荚膜梭菌α毒素基因工程菌表达产物免疫原性研究

已构建的能表达产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因工程菌株Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）经动物试验证实没有毒性。从ＩＰＴＧ诱导后的工程菌中提取包涵体,再辅以氢氧化铝胶制成抗原,免疫小鼠３０ｄ后,用产气荚膜梭菌强毒株培养物上清及培养菌体攻击,结果免疫鼠能抵抗至少２ＬＤ１００的攻击,证明Ｅ．ｃｏｌｉＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）工程菌株表达产物具有良好的免疫原性。     

产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）β毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术，从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因。用限制性核酸内切酶ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理，然后通过Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ｐＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点，转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双酶切分析和ＰＣＲ扩增检测，证明重组质粒ｐＥＣＢ２中含有产气荚膜梭菌的β－毒素基因。经核苷酸序列分析，明确了克隆的β－毒素基因在重组质粒中的连接向位和阅读框架是正确的。     

产气荚膜梭菌α毒素保护性抗原基因在大肠杆菌中的高效表达

对含有产气荚膜梭菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）α毒素基因的重组菌株ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）和ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）,通过培养性状观察和小鼠接种试验,证明这２株重组菌株均无致病性。随后对这２株重组菌株的表达产物进行了研究,经ＳＤＳ－ＰＡＧＥ和薄层凝胶扫描分析,ＩＰＴＧ诱导３～４ｈ后的ＢＬ２１（ＤＥ３）（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白３３．２１％,ＢＬ２１（ＤＥ３）ｐｌｙｓＳ（ｐＸＥＴＡ１）表达的α毒素占菌体总蛋白２７．２５％,其相对分子质量约３７５００;经Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ分析,表达产物可被α毒素抗血清识别。包涵体粗提物的免疫攻毒试验结果表明,以１倍致死量攻击的免疫小鼠可获得１００％（３６／３６）的保护,以２倍致死量攻击的免疫小鼠可获得９４．２８％（３３／３５）的保护,从而说明表达产物具有良好的免疫原性。     

产报荚膜梭菌β—毒素基因的克隆与核苷酸序列分析

为了给产气荚膜梭菌β－毒素基因工程亚单位苗和细菌毒素多价基因工程苗的研制提供基因材料,用聚合酶锭式反应（ＰＣＲ）技术,从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因,用限制性核酸内切栈ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理。然后通过了Ｔ４ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ＰＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中,经ＢａｍＨ     

产气荚膜梭菌所致动物猝死症

产气荚膜梭状芽胞杆菌 (Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ)简称产气荚膜梭菌 ,又称魏氏梭菌 (Ｃｌｏｓｔｒｄｉｕｍｗｅｌｃｈｉｉ) ,根据该菌产生的α、β、ε、ι 4种主要毒素 ,将其分为Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ 5型。1 994年笔者报道了国外由Ａ、Ｂ、Ｃ型菌感染或混合感染所致仔猪坏死性肠炎的猝死症。近年国内也时有由产气荚膜梭菌Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ五型菌所致多种家畜猝死症的报道。现将产气荚膜梭菌所致疫病、所产毒素及近年国内由产气荚膜梭菌所致家畜猝死症概述如下。1　产气荚膜梭菌所致疫病及所产毒素类型毒素中和试验对…     

从猝死症黄牛分离出冠状病毒

应用电镜观察，在吉林省猝死黄牛的心，肝，脾和肾中发现典型的冠状病毒颗粒，其中心，肝样品中的冠状病毒较多。用牛胎肾传代细胞（ＭＤＢＫ）分离培养该病毒获得成功，并进行了电镜负染跟踪观察和电镜超薄切片观察。该病毒呈圆形和椭圆形为主的多形性，直径７０～１６０ｎｍ有囊膜，囊膜表面有突起，突起呈间隙较宽的顶端膨大成球形的２０ｎｍ长的柄状结构，即呈鼓锤样结构。     

产气荚膜梭菌β-毒素基因的克隆及CPB-ST融合基因的构建

用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）技术,从Ｂ型产气荚膜梭菌染色体基因组中扩增了９３０ｂｐ的β－毒素基因。用限制性核酸内切ａｍＨ Ⅰ和ＥｃｏＲ Ⅰ对ＰＣＲ产物进行双酶切处理,然后,通过Ｔ４ ＤＮＡ连接酶将其定向连接于事先经同样的双酶切处理的载体质粒ｐＥＴ－２８Ｃ（＋）的多克隆位点,转化至受体菌ＢＬ２１（ＤＥ３）中。经ＢａｍＨ Ⅰ和ＣｃｏＲ Ⅰ双酶切分析和ＰＣＲ扩增检测。证明重组质粒ｐＥＣＢ２中含有产气荚膜梭     

鸭疫里默氏杆菌原生质体的制备研究

鸭疫里默氏秆菌是一种非常难以转化的细菌,国内外未见关于其质粒转化的报道,试验以鸭疫里默氏杆菌OD600为0.7时为受体菌,在高渗缓冲液中,经溶菌酶5 mg/ml于37℃作用50 min,制备的原生质体再生于再生双层固体培养基,原生质体成功再生.研究为鸭疫里默氏杆菌的质粒转化提供了一条新途径.     

鸭疫里氏杆菌保存条件的探讨

本试验对鸭疫里氏杆菌三水、南海各1株菌分别用室温-营养琼脂斜面法(A法)、4℃-营养琼脂斜面法(B法)、室温-石蜡油-营养琼脂斜面法(C法)、4℃-石蜡油-营养琼脂斜面法(D法)、鸭疫甘油复方保护剂法(E法)五种方法进行保存条件筛选。结果,A法最长保存时间为15天;B法最长保存时间为36天;D法最长保存时间为71天;C法保存至71天仍部分样本有存活;E法保存至71天全部样本仍存活。用E法进一步作鸭疫里氏杆菌多个菌株保存试验,结果珠海株、南海一场株、肇庆林文株、鸭疫V株、海丰株依次达到120天、195天、207天、385天、404天、540天仍有存活。试验结果为本菌种作短中期保存和长期保存提供了有效方法。     

鸭疫里默氏菌的分离鉴定

采集福州郊区某番鸭场病死鸭的肝、脾、脑、心血,从中分离到1株细菌,经对分离菌进行培养特性、形态观察、生化鉴定及荧光抗体试验,确定为鸭疫里默氏菌。经人工感染试验,表明该菌对雏鸭有较强的致病力,致死率高达47%。     

鸭疫里默氏杆菌疫苗的研究进展

鸭疫里默杆菌病由鸭疫里默氏杆菌(Riemerla anatipesfer,RA)引起的一种严重危害世界各国养鸭业的主要细菌性传染病之一.目前,国内外研制的RA疫苗有灭活疫苗、弱毒疫苗和亚单位疫苗.本文综述了RA疫苗研究现状,探讨了各种RA疫苗的优缺点,并指出了RA疫苗今后的研究方向.     

一例鹅爆发鸭疫里默氏杆菌病的诊断与治疗

鸭疫里默氏杆菌病又称鸭传染性浆膜炎,原名鸭疫巴氏杆菌病,主要是侵害小鸭的一种传染病,以气囊炎、心包炎、肝周炎为主要病变。该病于1904年首次被报道。我国自1982年在北京首次爆发该病以来,全国许多地区也相继报道了本病,以鸭感染为主。但随着鹅的规模化生产,鹅的饲养总数量和单位容量都出现了较大提高,大部分养殖户仍然沿袭粗放饲养方式,营养、管理、防疫等方面工作没有跟得上,致使鹅群时常经受疾病的困扰,该病也成为小鹅目前常见和严重的传染病之一。现将我们镇上一养鹅户鹅群爆发鸭疫里默氏杆菌病的诊断和治疗情况汇报如下。     

鸭疫里默菌实验室诊断方法研究进展

鸭疫里默菌病是危害养鸭业的重大疾病之一,在临床初步诊断的基础上,实验室诊断必不可少。目前已报道的鸭疫里默菌实验室诊断方法主要有细菌的分离鉴定、琼脂扩散试验、凝集试验、荧光抗体试验、间接ELISA、PCR、间接免疫酶组化法等7种,文章对这些方法进行了综述。     

鸭疫里默氏菌的分离培养和PCR鉴定

对某鸭场送检的发病雏番鸭进行临床症状、病理变化观察、病原的分离和纯化,同时以外膜蛋白(OMPA)保守区设计一对特异性引物,PCR扩增,回收目的条带,进行测序与序列分析.结果表明,该菌为革兰氏阴性、无芽孢小杆菌,在TSA培养基上形成光滑圆形透明菌落,有荧光,不发酵糖,初步怀疑为鸭疫里默氏菌;PCR扩增,琼脂糖凝胶电泳,在600 bp处扩增出了一条清晰的条带,回收目的条带,测序,并与genebank中序列比对,确诊该菌为鸭疫里默氏菌.     

鸭疫里默氏杆菌免疫原性研究Ⅱ.荚膜提取物免疫原性测定

本研究对Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌的荚膜提取物的免疫原性进行了研究，结果表明，荚膜粗提物和经过苯酚抽提纯化后的荚膜提取物经２次免疫７日龄北京鸭后对同源细菌的攻毒保护率分别为９０％和７０％；采用ＥＬＩＳＡ检测荚膜提取物免疫后抗体产生规律显示，二者刺激机体产生的抗体水平有一定的差异，荚膜粗提物免疫组抗体水平高于纯化后的免疫组，前者抗体下降速度较后者慢。     

鸭疫里氏杆菌各血清型在我国的分布

鸭疫里氏杆菌病(Riemerella anatipestifersis,RA)是家鸭、火鸡、鹅和多种其它鸟类的一种接触性传染病,能引起1～8周龄的鸭发生浆膜炎、心包炎、气囊炎和肝周炎等为特征的急性败血性传染病。我国近年来对该病病原的分离及其血清型的鉴定等方面进行了较多的研究,目前已证实我国有1、2、3、4、5、6、7、8、10、11、13、14、15、17等14种血清型的RA,另新发现4种新血清型(22、23、24、25型),多种血清型的存在是造成该病防制困难的重要原因。本文介绍了我国对RA血清型的研究,及各血清型在我国的分布,以期对综合防制该病有一定的启发和指导。