蜡蚧轮枝菌VL17菌株液体培养条件研究

蜡蚧轮枝菌VL17是沈阳农业大学农药科学实验室筛选出的对温室白粉虱和蚜虫具有高致病力的菌株。对VL17菌株的液体培养条件进行了研究,结果表明,蜡蚧轮枝菌VL17菌株的最适培养液为PSK和SCSC;最佳温度为25℃;于250 ml摇瓶恒温振荡培养5 d,加入150 ml培养液,菌丝干重达到0.7 g以上,孢子增长倍数达50倍以上。     

蜡蚧轮枝菌固体培养条件研究

以大米为固体培养基质,测定了不同培养条件下对蜡蚧轮枝菌产孢的影响。研究结果表明,当培养温度为25℃、料水比为1：0．33、光照24h／d、添加1％的酵母浸粉时对产孢最为适宜,蜡蚧轮枝菌产孢量最高;而添加葡萄糖时,对该菌产孢有抑制作用。     

蜡蚧轮枝菌VL17急性毒性及致敏试验

对生物农药蜡蚧轮枝菌VL17菌株进行了急性经口、经皮毒性试验,眼刺激试验和致敏(皮肤变态反应)试验.结果表明,蜡蚧轮枝菌VL17对雄、雌性大鼠急性经口LD50＞5000mg·kg-1;对雄、雌性大鼠急性经皮LD50(4 h)＞2 500 mg·kg-1;对试验兔急性眼刺激的平均指数为0;对大鼠致敏(皮肤变态反应)试验致敏率为0.表明蜡蚧轮枝菌VL17是一种低毒,对兔眼无刺激性,对皮肤无致敏性的安全的生物农药.     

蜡蚧轮枝菌高产毒素菌株的筛选

通过比较6株蜡蚧轮枝菌(V3450、Vp28、V l6063、V0175、V342和V341)对烟粉虱3龄若虫的毒力和6株菌株代谢浓缩液对烟粉虱1龄若虫的忌避作用和毒杀作用,筛选出高产毒素菌株.结果表明:6株蜡蚧轮枝菌的LC50分别为2.57×105、6.03×105、6.03×105、1.70×106、7.41×106、1.66×107孢子.mL-1,表明菌株V3450、Vp28、V l6063的毒力比另外3株高;6株菌株代谢浓缩液对烟粉虱1龄若虫的忌避率分别为76.40%、78.22%、73.54%、52.7%、40.80%、53.33%,死亡率分别为80.27%、71.90%、66.66%、50.86%、40.57%、46.67%,表明菌株V3450、Vp28、V l6063的产毒能力比另外3株强,由此筛选出V3450、Vp28、V l6063为高产毒素菌株.     

蜡蚧轮枝菌的碳·氮营养源研究

[目的]筛选影响蜡蚧轮枝菌生长的营养因子,为该菌的开发生产提供科学依据。[方法]以固体基础培养基1L水中20g葡萄糖的含碳量（8．00g／L）、2g蛋白胨的含氮量（0．29g/L）及少量无机盐为标准,用蔗糖等碳源及酵母膏等氮源分别取代基础培养基中的葡萄糖和蛋白胨。研究了固体培养基中不同碳、氮源对6株蜡蚧轮枝菌菌丝生长和产孢的影响。[结果]葡萄糖有利于V2、V4、V5和V6菌株的菌丝生长和产孢;可溶性淀粉为碳源时,V1和V3菌株的生物量和产孢量均很高;有机氮源酵母膏可大大提高各菌株的生物量及产孢量。[结论]葡萄糖与酵母膏组合是适合于多数供试蜡蚧轮枝菌菌株菌丝生长和产孢的碳氮源。．     

蜡蚧轮枝菌昆明菌株发酵培养技术研究

 用5种培养液对蜡蚧轮枝菌昆明菌株（KM9803）进行液体培养的结果:以改良的沙氏培养液和豆粉-土豆汁培养液中芽生孢子产量较高；摇瓶时间以4～5d较适宜。产孢量可以达到7.26×10⁸～9.09×10⁸个芽生孢子/mL; 固体培养阶段培养基：加水量以1∶0.6为宜，固体培养发酵时间以7d为宜,分生孢子产量可达到4.05×10⁹～4.11×10⁹孢子/g。     

环境条件对蜡蚧轮枝菌生长的影响及发酵培养研究进展

蜡蚧轮枝菌是一种地理分布和寄主范围均比较广泛的昆虫病原真菌,具有较好的生物防治功能。就蜡蚧轮枝菌优良菌的筛选、发酵培养条件的优化及影响其分生孢子产量的环境条件,如紫外线、温湿度、微量元素和维生素等进行了综述。     

蜡蚧轮枝菌液体发酵的代谢动力学

研究蜡蚧轮枝菌菌株在19 L全自动发酵罐发酵培养过程中生物量、产孢量和营养物质等代谢变化,并对其动力学特性进行了分析.结果表明,蜡蚧轮枝菌在发酵过程中菌体生长可分为延迟期、指数生长期、稳定期和衰退期,菌体生长量与葡萄糖消耗量密切相关,同时液生孢子产量的发酵动力学特征为部分生长连动型发酵.     

微量元素及维生素对蜡蚧轮枝菌分生孢子的影响

通过定量地向平皿PDA培养基中添加6种微量元素和7种维生素,并接种蜡蚧轮枝菌菌株Tri-BA81进行培养研究,初筛出微量元素Mn和Ni、维生素叶酸（VM）和烟酸（VB3）对分生孢子的产生具有促进作用。对初筛出的微量元素和维生素设置不同的浓度梯度添加到单一固体基质谷子中,进行发酵筛选,结果表明,微量元素Mn和Ni的最适使用浓度均为25μg·mL-1维生素叶酸（VM）、烟酸（VB3）的最适使用浓度分别为10、1μg·mL-1     

高杀线活性蜡蚧轮枝菌鉴定与发酵条件优化研究

通过室内试验,筛选得到1株具有高杀线活性的菌株Snef69,其发酵液的60%稀释液对南方根结线虫(Meloidogyne incognita)J2的校正致死率达到91.27%.通过ITS及形态学鉴定,并测定了不同发酵条件下Snef69菌株对南方根结线虫的毒力作用效果,结果表明该菌株为蜡蚧轮枝菌(Verticillium lecanii),随着发酵液浓度的增加,杀线活性增强,当发酵条件中碳源为麦芽糖、氮源为NaNO3、发酵天数为6～7 d、pH值=6时杀线虫效果最明显.     

玫烟色拟青霉固体培养基筛选及培养条件研究

玫烟色拟青霉IfB01菌株在25℃、RH85％下分别在4种单一培养基(大米、黄豆粉、玉米粉、小麦粉)和3种复合培养基(小麦粉∶麦麸1∶1、黄豆粉∶麦麸1∶1、玉米粉∶麦麸1∶1)培养,以产孢量为指标筛选出较佳的基础培养基配方.通过正交试验验证加入不同浓度的碳源、氮源优化的基础培养基,筛选较佳的固体培养基配方为:玉米粉培养基+0.2％KNO3+0.1％葡萄糖+水(1∶1.5=物料∶水质量比);通过单因素试验,确定菌株较佳的培养条件是28℃、光照黑暗交替培养14h∶10h、产孢前期湿度为80％、产孢后期湿度为50％.     

蜡蚧轮枝菌VL17菌株杀虫毒素对温室白粉虱乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的影响

采用常规生化酶活力测定方法,对蜡蚧轮枝菌VL17菌株杀虫毒素的作用机制进行了研究,测定了它对温室白粉虱(Whitefly)成虫和若虫的离体乙酰胆碱酯酶和羧酸酯酶的影响。结果显示,该杀虫毒素对温室白粉虱成虫和若虫的离体乙酰胆碱酯酶活性均有极显著的抑制作用,毒素处理4h后对酶活性的抑制率分别高达90.8%和54.0%;该杀虫毒素对温室白粉虱成虫和若虫离体羧酸酯酶的抑制率极低,仅为1.9%和18.0%。因此,蜡蚧轮枝菌VL17菌株杀虫毒素对乙酰胆碱酯酶的强烈抑制作用可能是致死温室白粉虱的主要原因。     

棉花黄萎病拮抗细菌12-47发酵条件的优化

为了对棉花黄萎病生物防治的进一步研究,筛选出一株编号12-47的对大丽轮枝菌具有拮抗作用的菌株并设计了该实验对其实验室发酵条件进行了摸索。笔者采用单因素实验的方法在摇床培养的基础上对影响棉花黄萎病拮抗细菌12-47菌株产生拮抗物质的营养因素进行了考察,并在此基础上通过正交试验对各因素的浓度和组合进行了优化;通过L16(43)正交实验对培养最佳培养基条件进行了摸索。由实验数据笔者确定优化后的培养基为:碳源玉米粉3%、氮源大豆蛋白胨5%、无机盐Mn2 0.1%、K 0.05%、起始pH8.0、装液量100ml/250ml三角瓶、接种量8%、发酵时间48h。最终通过优化后的培养基进行发酵,发酵液抑菌活性比优化前提高了269%。     

出芽短梗霉菌PA-2发酵培养基及发酵条件优化

[目的]优化出芽短梗霉菌(Aureobasidium pullulans)PA-2菌株产孢发酵培养基和发酵条件,以提高PA-2菌株的产孢量,为该菌的开发和生产应用提供理论依据.[方法]以PA-2菌株发酵液中的产孢量为检测指标,采用单因子优化PA-2菌株发酵培养基和最佳发酵条件,通过中心组合设计(Central composite design,CCD)筛选培养基成分最佳配比;用PA-2菌株制成可湿性粉剂用于杂草藜田间防除试验.[结果]经优化后,PA-2菌株产孢最佳培养基配方为葡萄糖84.60 g/L、大豆粉46.35 g/L、NaCl 2.59 g/L、MgSO40.52 g/L、KCl 0.78 g/L、K2HPO46.50 g/L、(NH4)2SO40.52 g/L;最佳发酵条件为pH 7、温度25℃、装液量60 mL/250 mL、转速180 r/min、接种量8%、培养时间120 h.田间防除试验结果表明,PA-2可湿性粉剂对杂草藜的鲜重防效最高可达75.0%.[结论]优化后的培养和发酵条件可有效提高PA-2菌株的产孢量,降低发酵成本,适合发酵放大试验及相关剂型的开发研究;可采用PA-2菌株生产菌剂应用于杂草防除.     

不同培养条件下蜡蚧轮枝菌VL17分生孢子的耐热力及孢壁疏水蛋白含量的分析

比较了不同培养条件下蜡蚧轮枝菌VL17分生孢子耐热力及其孢壁疏水蛋白(FAE)含量的变化,结果表明:葡萄糖为碳源,酵母浸膏为氮源时孢子表现出较强的耐热力,残存指数(Is)分别为0.72和0.69;而麦芽糖为碳源,酵母浸膏为氮源时,FAE蛋白含量高达28.7μg·mg-1和24.7μg·mg-1;培养基中添加50μg·mL-1Mn2+时所产孢子的耐热力最强,Is为0.68,而Zn2+浓度50μg·mL-1的培养基所产孢子FAE蛋白的含量最高,为19.9μg·mg-1;培养基pH值在6~7时所产孢子的耐热力及FEA蛋白含量都处于较高水平,Is值为0.51,FAE含量为24.3μg·mg-1;30℃培养条件下所获孢子的耐热力显著高于常温所产孢子,Is值为0.57,但FAE蛋白含量较常温所产孢子略有下降。