抗鼠隐孢子虫单克隆抗体的研究

利用鼠隐孢子虫卵囊脱囊物免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与ＳＰ２／Ｏ细胞融合，经过３￣４次有限稀释法克隆化，获得５株持续分泌抗体的杂交瘤细胞株。所获抗体均属ＩｇＧ１。ＩＦＡ检测结果表明：２Ｇ７株单抗作用于卵囊壁抗原，而ＩＡ４、２Ｅ７、３Ｇ３、４Ａ７株单抗作用于子孢子表面抗原。诱生腹水经过反复冻融、冻干及硫酸铵沉淀后，抗体活性无明显变化。５株单抗均不与贝氏隐孢子虫及柔嫩艾美尔球虫产生交叉反应，与小孢隐     

应用巢式PCR-RFLP方法鉴别微小隐孢子虫、安氏隐孢子虫和火鸡隐孢子虫的研究

应用巢式聚合酶链反应（Nested PCR）-限制片段长度多态性 （restriction fragment length polymorphism, RFLP）方法对微小隐孢子虫（C．parvum）、安氏隐孢子虫（C．andersoni）和火鸡隐孢子虫（C．meleagrides）的鉴别进行了研究。结果显示C．parvum BOCC2、C．andesoni BOCC2和C．meleagrides CHCC1扩增产物片段大小分别为830bp、828bp和828bp，扩增产物分别经VspI酶切后形成3种不同的RFLP图谱，根据RFLP图谱可鉴别C．parvum、C．andersoni和C．meleagrides。本研究为我国隐孢子虫的分类和隐孢子虫病的分子流行病学研究打下了良好基础。     

巢式PCR-RFLP法检测奶牛隐孢子虫及虫种鉴定

采进口奶牛粪样200份,收集每份样品中的卵囊液,采用巢式PCR检测隐孢子虫(Cryptosporidium)18S rRNA基因,并用RFLP进行虫种鉴定,将目的片段克隆到pEGM-T easy vector,测序并进行同源性分析以进一步佐证虫种鉴定结果。结果表明,进口奶牛隐孢子虫阳性率为3.5%(7/200),514bp的目的片段不能被EcoT14 Ⅰ酶切。测序分析表明,获得的18S rRNA基因序列与NCBI上公布的微小隐孢子虫(C.parvum)相应序列同源性高达99.4%~100%,与安氏隐孢子虫(C.andersoni)同源性仅为91.1%。说明进口牛粪样中检测出的隐孢子虫为微小隐孢子虫。     

柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫感染情况调查与种类鉴定

[目的]掌握新疆维吾尔自治区阿克苏地区柯坪县规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染情况和种类分布情况。[方法]从柯坪县4个乡(镇)6个规模化双峰驼养殖场共收集516份粪便样本,全部提取DNA样本,基于隐孢子虫(Cryptosporidium)SSU rDNA序列进行PCR检测,序列比对分析后进行隐孢子虫种类鉴定;采用χ²检验法比较不同规模化养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率差异;将被鉴定为微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum,C. parvum)阳性的DNA样本,基于gp60基因序列进行PCR检测,序列比对分析后进行微小隐孢子虫亚型鉴定。[结果]516份双峰驼粪便DNA样本中检测出34份隐孢子虫阳性,总体感染率为6.59%(34/516),以阿恰勒镇养殖场2的双峰驼隐孢子虫感染率最高,为9.57%(9/94);不同养殖场双峰驼隐孢子虫的感染率统计学差异显著(χ²=5.497,P<0.05)。基于SSU rDNA序列,34条隐孢子虫序列经比对分析,鉴定出3种隐孢子虫,分别为安氏隐孢子虫(n=29)、隐孢子虫大鼠基因型Ⅳ(n=1)...     

隐孢子虫研究进展

隐孢子虫病(Cryptosporidiosis)是由隐孢子虫(Cryptosporidium)引起的一种以腹泻为特征的人畜共患寄生原虫病。本病具有广泛的宿主类型，可以寄生于哺乳类、鸟类、爬行类及两栖类等150种以上的人和动物。对于免疫系统正在发育的幼儿和幼畜以及免疫缺陷病人，隐孢子虫入侵的机会较大，免疫系统发育正常的人和动物也能感染该病，但机会小一些。自Tyzzer(1907)在鼠胃腺中发现隐孢子虫以来，一直以为隐孢子虫感染并不常见，是一种条件性病原。直到1976年Nime才报道了第一例人的隐孢子虫病，从此以后，有关此病的报道越来越多，到了1986年，世界卫生组织(WHO)更将本病列为人的爱滋病(AIDS)怀疑指标之一。     

隐孢子虫病研究近况

隐孢子虫病(Ｃｒｙｔｏｒｒｉｏｄｉｓｉｓ)是一种人畜共患的、广泛存在的寄生性原虫病。病原是隐孢子虫,是仅次于轮状病毒的主要肠道疾病。隐孢子虫广泛寄生于哺乳动物、禽类、两栖类、鱼类及人的消化道及其它器官中,引起动物腹泻和隐性感染,它还能加速ＭＤ肿瘤的发生,与人的爱滋病(ＡＩＤＳ)有着密切的联系。对免疫力正常的动物来讲,其症状表现为自限性腹泻,当免疫功能缺损时,水泻不止而死亡。1　隐孢子虫病的分布及流行1907年Ｔｙｚｚｅｒ在小鼠胃腺粘膜中首次发现,1929年在鸡的盲肠上皮细胞中发现,自1971年发现第1例犊牛隐孢子虫病及197…     

隐孢子虫病的研究进展

隐孢子虫病的研究进展蒋金书，赵亚荣，胡景辉（北京农业大学１０００９４）隐孢子虫病是一种全世界性的人畜共患病。在１９７５年以前，从未引起人们的足够重视（Ｏ′Ｄｏｎｇｈｕｅ，１９８５），因而，截止到１９８０年，发表的论文只有３０余篇，且当时普遍认为隐孢子...     

上海市奶牛隐孢子虫感染现状调查

隐孢子虫病（Crytosporidiosis）是由隐孢子虫（Crytospridum spp）引起的一种全球性的人兽共患原虫病。主要症状为腹泻,一旦食物或水源遭到隐孢子虫卵囊污染即可经口传染给人和动物。该病正日益受到国内外广大学者关注,其原因是作为一种水源性疾病,它能引起免疫缺陷或免疫抑制者致死性腹泻,且迄今没有特效治疗药物。隐孢子虫对家畜的危害尤以对反刍动物牛的危害最大,     

鸡贫血病毒国内分离株的酶切图谱多态性分析

用套式PCR 扩增了鸡贫血病毒(CAV)长度为687 bp 的特异片段,以Hae Ⅲ、Hinf Ⅰ、Hpa Ⅱ分别酶切,通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分析了其限制性酶切片段的多态性。对几株国内外分离株的分析表明,TK5803和山东分离株SJ1、SJ2 应属于Todd 的限制性内切酶酶切图谱多态性分析法(RFLP)分类中的第2 组;吉林JL1 株和哈尔滨CL1 株相同,但与其他任何毒株均不相同,大连DL1 株也不同于任何现有毒株,因而都不能归属于Todd 划分的7 个小组;荷兰弱毒株与目前发现的所有毒株均不同,具有其特征性的酶切图谱。     

RT—PCR和RFLP对我国部分传染性支气管炎病毒分离株分型

用2 对引物分别对4 株传染性支气管炎病毒(IBV)标准毒株(Gray、M41、H120、MA5)和5 株国内地方分离株(KF8、18KF7、QF3、XF7、XF18)进行RT-PCR,结果均获得了与预期大小一致的片段。对此2 种PCR 产物进行了限制性片段长度多态性(RFLP)分析,分别用3 种限制性内切酶(HaeⅢ、HinfⅠ、PvuⅡ)进行酶切,根据不同的酶切图谱将测试的IBV 毒株分为不同的基因型。2 对引物的PCR 产物酶切分型结果基本一致。9 株IBV 毒株分为3 种基因型,即H120、M41、XF7、XF18、MA5 和KF8 属于Ⅰ型,Gray 属于Ⅱ型,QF3、18KF7 属于Ⅲ型     

用DNA指纹技术研究Zmu-1:DHP豚鼠的群体遗传结构

为了鉴定Zm u-1∶DHP新品系豚鼠的遗传组成,试验以Jeffreys 33.6和33.15探针,分别与Zm u-1∶DHP和DHP 2个品系豚鼠基因组DNA的H in fⅠ和H aeⅢ酶切限制性片段进行Sou thern杂交,绘制豚鼠DNA指纹图,分析豚鼠基因组DNA限制性片段长度的多态性。结果显示,33.6探针与H in fⅠ酶组合应用,多态性程度较高,制图效果好;Zm u-1∶DHP豚鼠的DNA指纹图中,在6 kb和9 kb标记点出现特征性基因序列片段;Zm u-1∶DHP品系内的相似系数Fm=0.834±0.066,显著高于DHP品系内的Fm=0.653±0.158,也高于2个品系的Fm=0.670±0.115;Zm u-1∶DHP豚鼠2随机个体间遗传组成完全相同的机率Fmn=1.07×10-2,高于DHP豚鼠的Fmn=8.474×10-5。表明该方法用于豚鼠遗传质量检测和品系鉴定是可行的。Zm u-1∶DHP和DHP豚鼠都属远交系动物,但前者的遗传基因纯合性显著高于后者,结合性状可以看出,Zm u-1∶DHP豚鼠遗传分化形成了新的品系。     

PCR／PFLP鉴别伉禽白血病病毒

用PCR方法从禽白血病病毒（avian leukosis virus,ALY）亚群毒株RAV－1、RAV－2感染或未感染的SPF鸡胚成纤维细胞（CEF）分别扩增出1．2kb基因手段。RAV－1囊膜基因可初BglⅡ分为2条相近的600bp片段，RAV－2囊膜基因被BamHI分为2条约600bp片段，对照组基因片段（内源性病毒）不被BglⅡ和BamHI切割。结果显示，ALV囊膜基因PCR／RFLP可用于诊断禽白血病和鉴别不同的AVL毒株。     

中国部分地区绵羊肺炎支原体的基因多态性分析

为了解绵羊肺炎支原体(Mycoplasma ovi pneumoniae,Mo)在我国部分地区的流行病学特征,采用随机扩增多态性DNA(RAPD)及限制性片段长度多态性(RFLP)方法对26株Mo基因多态性进行了研究,并利用NTsys2.10e软件对获得的多态性图谱进行了聚类分析.结果在相似系数为0.70时,26株Mo可分成6个RAPD群或6个RFLP群;相似系数为0.90时,分成18个RAPD群或18个RFLP群;相似系数为1.00时,分成25个RAPD群或26个RFLP群.结果表明,我国Mo存在高度的基因多态性,这种多态性与地域差异相关,与宿主来源也具有一定的相关性.研究结果为了解我国Mo的分子流行病学特征打下了基础,也为建立有效的Mo诊断方法和疫苗研制提供了参考依据.     

套式PCR检测奶牛粪便中隐孢子虫

为了检测样品中的微量隐孢子虫，从含有不同数量隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中，直接提取DNA用作初始PCR（Initial-PCR）模板，以稀释的初始PCR的产物为模板进行套式PCR（Nested-PCR），用两对人工合成寡核苷酸分别作为两PCR的引物，扩增大小分别为540pb、258pb的特异片段。PCR产物经电泳鉴定，可从阳性粪便标本DNA抽提物中扩增出目的片段，而阴性对照不能扩增目的片段；初始PCR、套式PCR的敏感小生最低可分别检测到含卵囊100、5个／g粪便。初步应用结果表明某奶牛场的奶牛自然感染率为16.4％。试验表明套式PCR的敏感性比普通PCR约高100倍，能用于奶牛隐孢子虫感染情况的调查。     

PCR方法检测奶牛粪便中鼠隐孢子虫

从含有鼠隐孢子虫卵囊的奶牛粪便中,直接提取 Ｄ Ｎ Ａ 用作 Ｐ Ｃ Ｒ 模板,用 １ 对人工合成的寡核苷酸作为 Ｐ Ｃ Ｒ 引物,扩增大小为 ５４０ ｂｐ 的特异片段。 Ｐ Ｃ Ｒ 产物经电泳鉴定,表明可从含隐孢子卵囊的奶牛粪便标本 Ｄ Ｎ Ａ 抽提物中扩增出目的片段,而其他几种寄生虫及阴性对照均不能扩增出特异片段。本方法的敏感性最低可检测到含卵囊 ４００ 个／ｍ Ｌ 的样本,具有敏感性高、特异性强的特点。     

A human major histocompatibility complex (MHC) DNA probe recognizes goat genes

A human major histocompatibility complex (MHC) class II (DR-β) probe was hybridized with restriction enzyme digest of genomic DNA from 14 goats. Nine of the animals belonged to one family. Digestion of the DNA with the restriction enzyme Eco RI gave 7 fragments in 13 animals and 6 fragments in the last animal. No other polymorphism could be detected. Bam HI digestion gave from 3 to 6 fragments which displayed a considerable polymorphism. In the family studied, polymorphic fragments were inherited together with serologically defined lymphocyte antigen specificities believed to be coded for by MHC class I genes.     

传染性支气管炎病毒中国地方分离株RFLP基因分型的研究

为初步确定我国不同地区流行的传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）的基因分型，对分离自国内８个不同地域疫区的ＩＢＶＱＤ、ＧＺ、ＺＺ、ＴＪ、ＤＬ、ＹＣ、ＪＳ１和ＪＳ２及参考株Ｍ４１、Ｈ５２和Ｔ的Ｓ１基因ＲＴ－ＰＣＲ扩增ｃＤＮＡ进行ＨａｅⅢ的ＲＦＬＰ分析。结果，ＱＤ与ＭＤ４１、Ｈ５２同属Ｍａｓｓａｃｈｕｓｓｅｔｅ基因型，ＧＺ、ＺＺ、ＹＣ与Ｔ的基因型相同，ＤＬ、ＪＳ１和ＪＳ２则表现为各自独立的基因型，而ＴＪ则为ＤＬ和Ｔ２种基因型毒株的混合感染，表明我国的广大地域内存在着Ｍａｓｓ基因型、Ｔ基因型和可能的变异株ＩＢＶ的流行。     

河南IBV肾变型地方分离株的分型研究

在气管环上进行交叉中和试验,结果显示河南分离的肾变型宜毒株与除T株以外的其余标准血清型毒株(M41、Holte、Arka、Conn、Gray)均有不同程度的交叉,但与Ark株相关性最大,为25%.将除Holte株以外的5株标准株和宜株的0.6kb扩增产物,用三种限制性内切酶AluⅠ、TaqⅠ和AfaⅠ进行酶切,RFLP分析可分为三种模式,宜株与Ark株、Gray株、CoNn株属同一模式,AluⅠ和AfaⅠ酶切阳性而TaqⅠ酶切阴性.另AluⅠ、TaqⅠ、AfaⅠ酶切均阳性的M41模式和TaqⅠ、AfaⅠ酶切阳性而AluⅠ酶切阴性的T株模式.将地方株宜株的0.6kb扩增片段进行测序并与标准株Ark株、Gray株、Conn株、Holte株和M41株的相应序列进行分析比较,核苷酸、氨基酸同源性的分析显示,宜毒株与同一酶切类型的Ark-1529-29株同源性最高,核苷酸同源性为93%,氨基酸同源性为91.6%.推测宜株可能是Ark血清型毒株的变异株.宜株与Ark株在血清学分型与基因分型上的一致性,表明这两种分型方法之间有一定的内在联系.