槐米的高效毛细管电泳指纹图谱研究

以甲醇为提取溶剂,采用毛细管区带电泳,运行电压20 kV,运行缓冲液为40 mmol/L硼砂（pH=9.0）,建立了槐米的指纹图谱.槐米指纹图谱中,共有峰的相对迁移时间的相对标准偏差小于1.3%,共有峰中单峰面积超过10%总峰面积的色谱峰一个,各批次的相对峰面积比值相对标准偏差小于6.0%,满足建立中药指纹图谱的要求.高效毛细管电泳指纹图谱法可作为槐米药材的质量控制的一种方法.     

毛细管电泳在蛋白质和核酸分析研究中的应用

综述了毛细管电泳（CE）在蛋白质肽图构建与鉴定。物化常数和结构分析。动力学研究。定性定量与微量缺陷徊的应用以及在核酸的纯度检测，片段置备及PCR产物分析，DNA测序与基因突变检测中的应用。     

白僵蚕高效毛细管电泳指纹图谱研究

【研究目的】采用高效毛细管电泳法(HPCE)建立白僵蚕的指纹图谱。【方法】:电解质溶液由以10mmol/L磷酸二氢钠-20mmol/L的硼砂溶液(pH8.62)作缓冲液,在25℃,20kV的压力下进行电泳,201nm波长处检测,线性关系良好,在25min内完全分离。【结果】:上述条件下,白僵蚕成分得到了较好的分离,方法学考察结果符合定量测定和定性研究的要求。【结论】:该方法具有较好的分离效果和良好的精密度,可考虑作为白僵蚕的质量控制方法。     

思茅松AFLP分子标记体系的建立

采用改进的SDS法,提取思茅松胚乳DNA,获得较高质量的DNA样品,用Eco RI和Pst I 2种限制性内切酶完全酶切后,再经过预扩和选扩,从82对引物中筛选出24对带型分布均匀、多态性高且分辨力强的引物。扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后,可获得清晰指纹图谱,重复性较好。建立的思茅松AFLP体系可用于后续研究。     

应用高效毛细管电泳测定生物蛋白质样品

应用高效毛细管电泳仪（ＣＥ）测定了生物样品中的胃蛋白酶，卵清蛋白及枯草杆菌细菌蛋白等，经过对波长１８５ｍｍ与２１４ｍｍ条件下的测定结果进行比较试验，得出１８５ｍｍ波长下检测灵敏度大大高于２１４ｍｍ波长的检测灵敏度。     

槐米的高效毛细管电泳指纹图谱研究

以甲醇为提取溶剂,采用毛细管区带电泳,运行电压20 kV,运行缓冲液为40 mmol/L硼砂(pH=9.0),建立了槐米的指纹图谱.槐米指纹图谱中,共有峰的相对迁移时间的相对标准偏差小于1.3%,共有峰中单峰面积超过10%总峰面积的色谱峰一个,各批次的相对峰面积比值相对标准偏差小于6.0%,满足建立中药指纹图谱的要求.高效毛细管电泳指纹图谱法可作为槐米药材的质量控制的一种方法.     

芒果AFLP分子标记体系的建立

[目的]构建我国芒果主要栽培品种的AFLP分子标记体系。[方法]供试31个芒果品种为：Banganapalli、台农1号、桂热10号、Carabao、Nang Klang wun、泰国506、紫花、Keitt、粤西1号、斯里兰卡811、龙井大芒、红象牙、小菲、泰国504、Spooner、R2E2、串芒、鹦鹉芒、Irwin、金煌、Kent、海豹、Haden、Dashehari、Neelum、桂香、Ono、白象牙、Bambaroo、Macheso、Zill。以粤西1号芒果幼嫩叶片为材料探索提取高质量DNA的方法,为了获得更高质量和数量的基因组DNA,对曾杰的方法进行了下列改良：A、用2％的CTAB提取液,其他不变;B、用3％的CTAB提取液,但在提取后只用氯仿异戊醇提取2次;C、用3％的CTAB提取液,但在提取后用氯仿异戊醇提取1次;D、用3％的CTAB提取液,但在提取后用酚氯仿异戊醇提取1次。用供试品种中的台农1号、Carabao、Keitt、Kent对64对引物组合进行筛选,其中8个EcoRI引物分别是E—AAC、E—AAG、E—ACA、E—ACT、E—ACC、E—ACG、E—AGC、E;AGG,8个MseI引物分别是M-CAA、M-CAC、M-CAG、M-CAT、M—CTA、M-CTC、M-CTG、M-CTT。利用AFLP分子标记在DNA水平上对芒果进行遗传多样性研究。[结果]4种方法提取的DNA较完整,均可得到明亮清晰的主带。且综合比较,用B方法（即采用较高浓度的提取液,提取后用氯仿异戊醇提取2次）可获得高质量、高纯度DNA,可用于芒果AFLP标记分析。供试64对引物组合中适用于芒果种质资源AFLP分析的引物组合共14对,分别是E—ACC／M-CAC、E—AAC／M-CAT、E—AAG／M-CAC、E-AAG／MoCAT、E—ACA／M-CAC、E—ACA／M-CAG、E—ACA／M-CAT、E—ACA／M-CTA、E．ACT／M-CAC、E—ACC／M—CTC、E—ACC／M—CTG、E-AG＆M-CAG、E．AGC／M—CTA、E—AGC/M-CTC。这14对引物组合在31份芒果种质中共扩增出1761条带,其中多样性带比例为97％。平均每对引物产生125．8条带和121．6条多样性带。14对引物均可将上述31个品种完全区别开来,其中E—ACA／M-CAT和E-AGC／M-CTC引物组合多态性最大,达100％,可用于芒果品种指纹图谱构建。[结论]利用AFLP可以高效检测芒果种质资源分子标记多样性。     

AFLP分子标记与作物改良

建立了于ＤＮＡ基础之上的分子标记对于作物改良具有重要作用，ＡＦＬＰ（Amplified fragment length polymorphism，简称ＡＦＬＰ）国内译为扩增片段长度多态性，是一种ＤＮＡ分子标记技术。利用 一方法，在不需要预先知道ＤＮＡ序列住处的情况下，可以同时进行多数ＤＮＡ酶切片断的ＰＣＲ扩增，目前该技术不仅在小麦、玉米、棉花和大豆等主要农作物上得以应用，而且在蔬菜（番茄、马铃薯、鹰嘴豆等）以植物基因组研究的模式植物拟南芥上广泛应用。讨论ＡＦＬＰ在主要作物的品种鉴定、遗传多样性分析，遗传作图，基因定位以及辅助选择等方面的应用进展。     

毛细管电泳在基因突变检测中的应用

简述了毛细管电泳的技术原理,综述了毛细管电泳在基因突变检测中的应用,包括CE-RFLP、CE-SSCP、CE-HA、CE-PEX、CE-CMC等。     

北京地区常见鼠尾草属植物AFLP亲缘关系分析(英文)

[目的]采用AFLP分子标记技术对北京地区鼠尾草属(Salviaspp.)植物的7个种23份样本进行亲缘关系分析。[方法]利用21对引物组合中筛选出的稳定性好、多态性较高的6对引物(E+ATT/M+AC;E+ATT/M+GA;E+AAG/M+CTG;E+AAG/M+CCT;E+AAG/M+ACT;E+AAC/M+ACT)用于扩增北京地区鼠尾草属植物基因组DNA,反应体系分为两步:①梯度降温扩增。第1个循环为94℃,30s;65℃,30s;72℃,60s。以后每个循环的退火温度依次降低0.7℃,共13个循环;②普通扩增。94℃,30s;56℃,30s;72℃,60s;23个循环。扩增后采用6%聚丙烯酰胺凝胶和BG-Power3500型电源和DYC-20A型电泳槽,在恒功率60W的条件下电泳至溴酚蓝指示线刚刚跑出玻璃板。银染后在灯光下统计扩增条带数,构成二进制矩阵表。用NTSYSpc2.10e软件进行分析,采用UPGMA方法进行聚类分析,通过Treeplot模块生成聚类图。[结果]对23份鼠尾草属植物进行AFLP分析,得到367个扩增位点,其中多态性位点359个,占总扩增位点的97.82%。在遗传距离为0.32的水平下,23份鼠尾草属植物样本归为7个组:一串红(S.splendens)组、蓝花鼠尾草(S.farinacea)组、朱唇(S.coccinea)组、雪见草(S.plebe-ia)组、丹参(S.miltiorrhiza)组、荫生鼠尾草(S.umbratica)组和罗马尼亚鼠尾草(S.officinalis)组。蓝花鼠尾草、朱唇、雪见草、丹参、荫生鼠尾草、罗马尼亚鼠尾草与一串红的亲缘关系依次增远;一串红种内,自选品种(系)与商品种亲缘关系较远。[结论]该研究结果可为北京地区开展鼠尾草属植物的种间和种内远缘杂交提供理论参考。     

木霉AFLP分子标记技术体系的建立

以摇床培养的木霉菌丝为材料,采用液氮研磨等方法提取到高质量的基因组DNA,能够用于AFLP实验分析,探索和优化酶切-连接反应、预扩增和选择性扩增反应过程中的关键因素,建立了适合木霉AFLP的最佳试验体系和反应条件。利用该技术体系对不同时期保存的菌株及融合子进行AFLP指纹分析,发现不同时期保存的同一菌株指纹相同,融合子指纹兼有亲本菌株的特性。通过对木霉AFLP条件的探索和研究,建立了木霉基因组AFLP反应体系,得到的扩增多态性条带完全能够用于木霉遗传稳定性和多样性分析。     

杞柳AFLP反应体系的建立与引物筛选

以杞柳F1群体为试验材料,采用改良的CTAB法提取基因组DNA,经过酶切、连接、预扩增和选择性扩增,建立杞柳AFLP的反应体系,筛选EcoRI和MseI各16条选择性扩增引物组成256对引物组合。结果表明:320 ng基因组DNA采用5U EcoRI和MseI双酶切6 h,20℃连接12 h,连接产物稀释10倍进行预扩增,预扩增产物稀释15倍进行选择性扩增,选择性扩增产物采用ABI-3130检测,可获得条带清晰的指纹图;从256对引物组合中共筛选出98对多态性较高的引物组合。     

AFLP分子标记的发展及应用

扩增片段长度多态性（AFLP）是一种高效的DNA分子标记技术,近年来其研究方法和检测技术不断改进和优化,并由此衍生出多种相关技术,使其在遗传多样性、种质鉴定、遗传图谱构建、基因定位等研究中得到广泛的应用。本文即对AFLP的原理、衍生技术及其应用等进行了介绍。     

割手密AFLP分子标记技术体系建立与优化

【目的】建立和优化割手密AFLP分子标记技术体系,为割手密遗传多样性分析、遗传图谱构建提供技术支持。【方法】以广西割手密GXS87—16、GXS85．30、GXS79—9、GXS96、GXS112、GXS212为材料,利用改良SDS法提取DNA,并用EcoR I和Mse I酶切,连接接头后,采用正交试验设计对影响预扩增反应和选择性扩增反应的主要成分如Mg^2＋、模板DNA、引物、dNTP、Taq聚合酶浓度进行优化。【结果】样品DNA用限制性内切酶＆0RI和MseI各3u于PCR仪过夜可完全酶切。经正交设计优化,较佳的预扩增体系包含0．4μL dNTPs（20mmol／mL）,1．6μLMg^2＋（25mmol／mL）,2．0μL EcoRI—P（5pmol／mL）,2．0IxLMseI-P（5pmol／mL）,1UTaq酶（1U／μL）,DNA模板稀释10倍;选择性扩增体系包含0．4μL dNTPS（20mmol／mL）,0．8μLMg^2＋（25mmol／mL）,1．0μL EcoR I—AAG（6pmol／mL）,1．0μL Mse I-CAG（6pmol／mL）,3U Taq酶（1U／μL）,DNA模板稀释20倍。以对优化反应体系扩增获得的PcR产物用5％变性聚丙烯酰胺凝胶电泳和银染后,可获得清晰的多态性指纹图谱。【结论】建立的割手密AFLP分子标记技术体系具有扩增条带清晰、多态性丰富的特点,可为构建割手密高密度遗传图谱提供技术支持。     

利用AFLP分子标记分析夏枯草种质资源遗传多样性

通过对8份夏枯草种质资源的AFLP分析,探求各种质间的遗传多样性.利用扩增片段长度多态性 (AFLP)标记,在DNA水平上进行遗传多样性研究,筛选32对选择性扩增引物,将扩增出的条带作为原始矩阵,用NTSYS-PC软件计算并分析夏枯草种质间的相似度,构建遗传系统进化树.结果显示:(1) SDS法提取的夏枯草基因组DNA质量较佳,能够满足AFLP分析的要求;(2) 从32对选择性扩增引物中,筛选出10对多态性较强、带型较好、分辨率较高的组合;(3)构建夏枯草AFLP 指纹图谱,将8个夏枯草种质全部区分开来;(4)通过构建进化树,把8个种质分成3类.夏枯草种质资源有丰富的遗传多样性,某些形态特征差异和基因型存在相关性.     

旱柳根系蛋白质双向电泳体系的建立

林木抗逆机制的研究是林木抗逆育种的重要基础。为了解旱柳Salix matsudana 耐盐机制,实验采用蛋白质双向电泳技术研究盐碱胁迫前后旱柳蛋白表达变化,分离鉴定旱柳耐盐相关基因,建立一套适合于旱柳根系蛋白质的双向电泳技术体系是蛋白质组学的基础。用改进的酚抽法抽提旱柳根总蛋白,此方法不仅能很好地分离蛋白,而且能有效去除样品中的盐分。通过比较分析了双向电泳不同条件对电泳结果的影响,确立了900 μg·胶条^-1的最佳上样量,10 min平衡时间以及10万 V·h 的聚焦时间的双向电泳条件。还比较了氯化钠胁迫后双向电泳图谱差异,发现了39个差异表达蛋白,其中15个下调,24个上调（11个新诱导表达）,为下一步通过质谱鉴定分析旱柳耐盐分子机制及抗性基因分离奠定了基础。图9参23     

四川省葛藤属根瘤菌的遗传多样性研究

 用AFLP、REP-PCR、23S rDNA PCR-RFLP等方法对分离自四川的23株葛藤属的根瘤菌的遗传特性进行了研究。结果表明，供试的葛藤根瘤菌遗传特性存在明显差异。 AFLP分析结果显示，23个菌株分为7个AFLP遗传群；在BOXAIR-PCR分析中，23株根瘤菌则被分为5个遗传群；对23S rDNA PCR-RFLP分析表明，葛藤根瘤菌分属于中慢生根瘤菌属（Mesorhizobium）、慢生根瘤菌属（Bradyrhizobium）2个属，聚类分析结果将其划分为5个遗传群。分离自四川省的葛藤根瘤菌存在较大的遗传多样性。     

番茄成熟突变体rin基因的AFLP分子标记

研究以番茄成熟突变体品种07905和正常成熟品种07009为亲本材料,分析鉴定了其F1代及F2代分离群体各单株在完熟期果实的成熟表现。结果表明,番茄成熟突变体rin基因所控制的性状是单隐性遗传性状。用1 024对引物对2个亲本及F2代分离群体进行AFLP分析,得到4个与番茄成熟突变体rin基因紧密连锁的标记,分别为E51M81-B、E46M37-F、E32M33-A和E60M81-E,与突变体rin基因的连锁遗传距离分别为4.9、8.8、10.9和12.5 cM。