四川部分地区猪流行性腹泻的分子流行病学调查

本研究对四川猪流行性腹泻病毒(PEDV)开展了分子流行病学调查。参照毒株CV777的M基因序列,设计1对特异性引物(预期扩增大小为392bp),建立了快速检测PEDV的RT-PCR技术,对四川9个地区规模化猪场的75份仔猪腹泻病料进行检测与分析。再根据S基因的变异区域设计1对引物(扩增大小为947bp),选择扩增了四川9个地区的代表样品的S基因序列,并进行了进化与变异分析。结果显示,建立了检测PEDV的M基因的RT-PCR技术,并确定了最佳反应条件和反应体系,用该方法检测了四川75份腹泻病料,检出64份PEDV阳性,PEDV阳性检出率为86.67%,结果显示PEDV在四川地区发病季节除冬春季外,近年夏季也呈高发趋势。四川9株PEDV的S基因的核苷酸同源性为95.9%~100%,氨基酸同源性为95.1%~100%,四川毒株与14个国内外参考毒株的核苷酸同源性和氨基酸同源性分别为84.6%~99.5%和84.2%~99.5%;四川流行毒株的S基因(S蛋白)存在碱基(氨基酸)缺失和插入现象。结果表明,本研究从分子流行病学角度证实了四川部分地区PEDV的流行与变异情况,为指导该地区PEDV科学防控提供了依据。     

湖北地区猪流行性腹泻病毒流行病学调查及N基因的序列分析

为了解湖北地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行特征及变异情况。2021年3月-2022年2月,从湖北地区共收集腹泻症状的粪便-肛门棉拭子1580份,采用双重巢式PCR法进行检测,分析不同养殖阶段、季节间的感染差异;并选取部分阳性样品进行PEDV-N基因的扩增与遗传进化分析。1580份样品共检出阳性样品318份,阳性率为20.13%(318/1580)。其中0～28 d仔猪、28～70 d保育猪、70～120 d后备猪、120～270 d中大猪和>270 d猪只的阳性率分别为40.27%、26.89%、10.33%、8.07%和5.50%。冬季为PEDV感染的高发期(36.66%),其次是春季(19.00%)和秋季(11.49%),夏季(5.55%)的检出率相对较低。将部分阳性样品进行PEDV-N基因测序,随机挑选12株测序序列与24株参考株进行遗传进化分析,测序序列间N基因的核苷酸同源性为94.0%～99.7%,氨基酸同源性为93.9%～100.0%;测序序列与参考毒株的核苷酸同源性为94.5%～99.8%,氨基酸同源性为94.6%～100.0%。通过系统性发育进化树分析,PE...     

猪流行性腹泻病毒流行病学调查综述

由猪流行性腹泻病毒(PEDV)引发的猪流行性腹泻在世界范围内造成了巨大的经济损失,给广大养猪业主带来了沉重的苦恼。针对近年来我国PEDV的流行病学进行综述报告,为广大临床兽医人士提供一个基础性认识。     

广西猪流行性腹泻流行病学调查

对广西6个市的6个规模化猪场进行了猪流行性腹泻流行病学调查。对其中4个猪场统计，在11090头猪中，患流行性腹泻的猪4658头，发病率为42％；死亡265头，病死率为5．69％。对6个猪场的170头份血清检测，阳性血清14份，阳性率为8．24％。结果表明广西的一些规模化猪场有猪流行性腹泻存在。     

广西猪流行性腹泻流行病学调查

对广西6个市的6个规模化猪场进行了猪流行性腹泻流行病学调查。对其中4个猪场统计,在11090头猪中,患流行性腹泻的猪4658头,发病率为42%;死亡265头,病死率为5.69%。对6个猪场的170头份血清检测,阳性血清14份,阳性率为8.24%。结果表明广西的一些规模化猪场有猪流行性腹泻存在。     

山西省猪流行性腹泻流行病学调查

为了查清山西省猪流行性腹泻的流行情况,对山西11个地市的30个规模化猪场的仔猪腹泻发病情况进行了流行病学调查,并对采集的253份病料进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)、猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)检测。结果:共有5 158窝、52 533头仔猪发生腹泻,死亡40 059头,死亡率为76.25%;病料检测PEDV阳性率为73.26%,TGEV阳性率为7.36%。表明山西省猪群发生的腹泻,主要是由猪流行性腹泻病毒引起。     

2019—2021年云南省部分地区猪流行性腹泻血清流行病学调查

为了解云南省部分地区2019—2021年猪流行性腹泻的感染状况,采用ELISA（酶联免疫吸附试验）检测方法,对采自云南省8个地区284个规模化猪场（户）的2 319份种猪血清进行猪流行性腹泻的抗体检测。结果表明,2019—2021年云南省部分地区猪流行性腹泻平均感染率为28.46%,2021年阳性感染率最高为37.43%。不同地区猪场（户）猪流行性腹泻感染情况存在一定的差异,文山和西双版纳地区猪流行性腹泻感染的猪场（户）所占比率,2019—2021年猪流行性腹泻阳性率呈现出逐年增高的趋势;丽江2020年猪流行性腹泻阳性的猪场（户）比率明显高于其他2年。不同类别猪流行性腹泻的感染情况存在一定的差异,仔猪群感染猪流行性腹泻的阳性感染率最高达31.65%,其次是母猪群,阳性感染率为27.81%;肥育猪群的阳性感染率为24.93%。说明云南省部分地区猪流行性腹泻感染情况比较严重,应引起高度重视。     

2017—2020年华北地区猪流行性腹泻病毒分子流行病学调查

为了调查2017—2020年华北地区规模化猪场猪流行性腹泻(PED)流行情况,试验收集来自河北、山西、内蒙古、北京、天津等省(自治区和直辖市)的218个规模化猪场的4 030份腹泻仔猪病料样品并进行RT-PCR检测,对猪流行性腹泻病毒(PEDV)阳性样品S1基因部分片段进行扩增和测序,将测序结果与国内外参考毒株进行同源性分析并构建遗传进化树。结果表明：PED各季度都可以发生,以一季度和四季度多发。2017—2020年,样品PEDV核酸阳性率分别为20.21%、15.28%、10.88%、18.80%,总体呈逐年下降趋势,但2020年略有升高;猪场PEDV核酸阳性率分别为34.78%、28.00%、25.00%、22.73%,也呈逐年下降趋势。本研究测序毒株与以Vaccine CV777为代表的GⅠ基因型毒株的核苷酸相似性为87.9%～91.9%;与以AJ1102为代表的GⅡ基因型毒株的核苷酸相似性为95.7%～99.0%。测序的31个毒株都属于GⅡ基因型毒株,其中20株为GⅡa基因亚型,8株为GⅡb基因亚型,其余3株为GⅡc基因亚型。说明2017—2020年华北地区PED发生率总体上呈...     

连云港市规模猪场猪流行性腹泻流行病学调查

采用RT-PCR方法对从连云港市64个规模猪场(发生腹泻病)采集的960份猪肛拭粪便样本进行猪流行性腹泻病毒(PEDV)检测(其中腹泻样品640份、非腹泻样品320份),所有样本PEDV感染阳性率为38.33%(386/960),其中腹泻样本达46.25%(296/640),非腹泻样本达22.5%(72/320),哺乳仔猪达41.23%(336/815),育肥猪达22.07%(32/145),猪场阳性率为78.125%(50/64)。结果表明PEDV在连云港地区规模猪场腹泻猪群中感染率较高。     

2017年江西部分地区PEDV分子流行病学调查

为了解江西地区猪流行性腹泻病毒(PEDV)的流行和变异情况,本研究利用RT-PCR方法对2017年采自江西省部分地区规模化猪场182份腹泻仔猪小肠组织和粪便样品进行检测,并设计了2对引物对37份阳性病料的S基因进行扩增、克隆及序列测定,以及与GenBank中登录的22株PEDV S基因参考序列进行遗传进化分析。结果显示,37株PEDV江西流行株的S基因序列长为4 158或4 161 bp,编码1 385或1 386个氨基酸,全部为Group 1型,与美国流行毒株较为接近,而与欧洲毒株(Br1/87)及疫苗株(CV777)亲缘关系较远;37株PEDV中有36株为G1-1亚群,1株为G1-2亚群;37株PEDV江西毒株间的S基因核苷酸序列同源性为96.9%～100.0%,氨基酸序列同源性为96.1%～100.0%,与22株参考毒株的核苷酸、氨基酸序列同源性分别为92.7%～100.0%和91.5%～100.0%;相较于CV777疫苗株,PEDV江西流行毒株的S基因存在碱基缺失、插入和位点突变现象。本研究从分子流行病学角度证实了2017年江西部分地区PEDV的流行与变异情况,为指导江西省PEDV的科学防控提供了参考依据。     

猪流行性腹泻病毒及感染扩散途径

猪流行性腹泻病毒Porcine Epidemic Diarrhea Viruses(PEDV),是冠状病毒科,冠状病毒属。猪流行性腹泻病(PED)传播速度快,传播范围广。主要原因就是猪流行性腹泻病毒(PEDV)的传播途径多样化。文章就猪流行性腹泻病毒在空气、运输车辆、饲料生产设备、精液的传播途径和经鼻黏膜感染进行讨论。     

猪流行性腹泻病毒的分子生物学特性以及胰酶对其作用机理

猪流行性腹泻病毒(PEDV)在体外分离培养需依赖胰酶,目前胰酶对猪流行性腹泻病毒的作用机理尚未完全清晰,文中从分子生物学方面阐述胰酶对猪流行性腹泻病毒的作用。     

广东省猪流行性腹泻病毒S1基因的克隆与序列分析

为研究广东省猪流行性腹泻病毒S1基因的变异情况,于2012-2013年间从广东省不同地区猪场采集56份腹泻病仔猪样本。通过PCR方法扩增到12个样本的PEDV的S1基因序列,并进行序列比对及遗传分析。结果 12个样本PEDV的S1基因序列之间的核苷酸同源性为91.1%~99.6%,氨基酸的同源性为88.5%~99.1%。12个样本PEDV的S1基因序列与国内参考毒株核苷酸的同源性为91.0%~99.9%,氨基酸的同源性为88.5%~99.7%。与国外参考毒株核苷酸的同源性为89.0%~99.7%,氨基酸的同源性为86.5%~99.4%。与经典毒株CV777的核苷酸同源性为91.0%~100.0%,氨基酸的同源性为88.3%~99.9%。其中,仅GD-HY的S1基因与CV777的同源性达100.0%,其他同源性较低。表明近年广东省的PEDV流行毒株以变异株为主,与疫苗株(CV777)的亲缘关系较远。     

猪流行性腹泻病毒RT-PCR检测与ORF3基因分子流行病学调查

为调查乳仔猪腹泻引起疫情的病原,本研究自2011年2月至2012年3月收集华东地区47个规模猪场共153份腹泻病料样品,采用RT-PCR检测猪流行性腹泻病毒(PEDV),并进行ORF3基因序列分析.结果显示:26个猪场的88份样品为PEDV阳性,猪场阳性率达到55.32％,病料阳性率达到57.52％.ORF3基因测序分析显示:11个流行病毒株ORF3全基因序列大小均为675bp,编码224个氨基酸.11个流行株ORF3基因同源性为95.9％～99.9％,编码氨基酸同源性为96.4％～100％.与欧洲代表性强毒株CV777基因同源性为96.3％～97.0％,编码氨基酸同源性为95.1％～96.4％,与CV777弱毒疫苗株基因同源性为96.8％～97.6％,编码氨基酸同源性为92.3 ％～93.4％,并且无疫苗病毒株ORF3基因的49个碱基缺失.与韩国病毒株比较,其基因同源性为95.0 ％～98.5％,编码氨基酸同源性为95.5％～99.6％.基因遗传进化树分析表明,国内外PEDV株可分为4群.我国主要流行病毒株属于第1群,与韩国病毒袜亲缘关系较近,而与我国疫苗病毒株存在较大差异.该研究表明,PEDV可能是目前我国仔猪腹泻的主要病原之一,我国PEDV流行病毒株存在明显基因变异.     

检测猪流行性腹泻病毒的R-PCR方法的建立

根据猪流行性腹泻病毒 (PEDV)的N基因自行设计和合成了一对可扩增长度为 641bp目的片段的引物 ,成功地建立了检测的猪流行性腹泻病毒的RT PCR方法。对猪轮状病毒 (PRV)、猪传染性胃肠炎病毒 (TGEV)的RT PCR检测结果均呈阴性。对PEDV JS株的RT PCR产物的序列分析表明 ,与CV777株的同源性为 97 3 %。     

对山东某猪场一起仔猪腹泻的流行病学调查

本文针对发生腹泻疫情的某猪场开展了实验室检测和流行病学调查,实验室检测表明该疫情的病原为猪流行性腹泻病毒。流行病学调查显示,此次腹泻疫情于2013年11月份开始暴发,2014年3月份结束,发病猪的种类具有明显的次序,育肥猪首先发生,其次是母猪,新生仔猪最后发病;发病率和死亡率与猪的种类、日龄密切相关,育肥猪和母猪发病后仅出现腹泻症状而不死亡,仔猪发病后腹泻症状明显而且死亡率随着年龄的增长急剧下降,3日龄以下仔猪死亡率可达100%,1周龄仔猪死亡率降至72.73%,12日龄仔猪死亡率仅有10%。对猪场风险因素分析表明,饲料车辆直接进入猪场、卖猪车辆与饲养人员接触、粪便通道没有封闭、饲养人员流动等是影响此次腹泻疫情的高风险因素,通过降低高风险因素很好地控制了疫病。     

5株猪流行性腹泻病毒流行株的遗传变异分析

为了解当前猪流行性腹泻流行情况,对4个地区疑似PEDV S1、ORF3基因进行RT-PCR扩增,并对5株PEDV流行株进行核苷酸同源性及遗传进化分析。S1基因核苷酸同源性比较与进化分析显示,5株PEDV流行株与意大利Italy/69979-25株、美国OH851株、我国主要变异株W-pintung-52株、AH2012、JXGZ2013等位于同一进化分支,其核苷酸同源性达98%以上。ORF3基因核苷酸同源性比较与进化分析发现,5株PEDV流行株均属于野毒株,与Tottori/JPN/2014变异株亲缘关系较近,其核苷酸同源性高达98.8%～100%。提示当前猪流行性腹泻病毒仍以变异株为主。     

黄连素抑制猪流行性腹泻病毒复制和组装

通过Western blot、qRT-PCR、噬斑形成试验等方法检测细胞病变、病毒增殖水平、细胞中病毒蛋白水平与基因水平表达来探究黄连素是否具有抗猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)活性,并通过检测细胞凋亡相关的标志蛋白PARP1、caspase7以探究黄连素是否影响病毒引起的细胞凋亡。结果显示,黄连素明显抑制了PEDV在Vero细胞中引起的细胞病变,明显降低了细胞内与上清中的病毒粒子的产生。在后续研究中,发现黄连素抑制了PEDV的复制和组装阶段,对病毒的吸附、入胞、释放的过程并没有明显影响。另外,检测了细胞凋亡的标志蛋白PARP1和caspase7,发现黄连素下调了PARP1、caspase7的剪切,减弱了PEDV诱导的细胞凋亡。结果表明,黄连素具有抗PEDV活性,并抑制PEDV的复制与组装阶段,可作为一种针对PEDV感染的潜在抗病毒药物。