副猪嗜血杆菌的分离鉴定和药敏试验研究

从山东某繁育猪场送检的疑似病例中分离到4株革兰氏阴性细小杆菌,通过培养特性试验和生化试验初步诊断为副猪嗜血杆菌,根据副猪嗜血杆菌16S rRNA序列设计引物,进行PCR鉴定,结果表明4株分离菌株为副猪嗜血杆菌.对4株分离菌株进行小白鼠毒力试验和药敏试验,结果表明,4株分离菌能致死小白鼠,对头孢他啶,头孢噻呋、氧氟沙星、多西环素、环丙沙星敏感,对土霉素、链霉素、林可霉素抵抗.     

猪丹毒杆菌血清型鉴定及药敏特性研究

为确诊导致广西部分地区猪场发生生猪大量死亡的原因,采集病死猪心血、肝、脾等组织,经细菌分离、生理生化鉴定、致病性试验、16SrDNA序列分析、血清型鉴定等系统的鉴定与分析。结果表明,分离到12株猪丹毒杆菌,确定猪场发病的病原为猪丹毒杆菌,血清型为1a型。所有的分离菌株具有一致的形态特征和生理生化特性,致病性较强。按分离地区选择4株临床分离菌株与20世纪50至80年代分离的4株菌株同时进行药敏试验,结果发现:所有菌株对β-内酰胺类、氯霉素类、大环内酯类、硝基呋喃类和双萜类药物仍保持高敏,是治疗猪丹毒的首选药物;但对四环素、林可霉素、诺氟沙星敏感性出现差异,4株临床分离菌株对上述3种药物的敏感性显著低于4株老菌株,表现为一定的耐药。多数菌株对氨基糖苷类、多肽类、磺胺类、硝基咪唑类、利福霉素家族药物表现为耐药。MIC测定结果显示青霉素仍然是治疗猪丹毒的首选药物。     

苜蓿粉发酵用乳酸菌的筛选及特性研究

为筛选调制优质动物苜蓿青贮饲料的优良乳酸菌,本试验以从郑州地区9个苜蓿样品中分离得到的乳酸菌为试验材料,经抗菌活性、生长特性及产酸特性筛选菌株,根据16S r DNA序列,结合生理生化特征进行菌种鉴定,并通过发酵苜蓿粉考察菌株的发酵特性。结果表明,从分离的19株乳酸菌中筛选到4株具有高抗菌活性的菌株,其中菌株ZZU 457和ZZU 466在MRS液体培养基中生长及产酸性能较好,均能够耐受6.5%的盐浓度环境;菌株ZZU 457耐受10~45℃,以及p H为3.5的环境,而菌株ZZU 466能够耐受5~50℃,以及p H为4.0的环境;苜蓿粉发酵结果表明接种ZZU 457或ZZU 466在发酵18 h内均能快速产酸,其中接种ZZU 466的苜蓿粉发酵36 h时p H值达到4.2;结合理化特征及16S r RNA序列分析结果,ZZU 466被鉴定为融合魏斯氏菌。优良菌株ZZU 466在苜蓿青贮饲料调制加工中具有潜在的应用价值。     

禽卡氏杆菌分离鉴定及药敏试验

为了能更好地防治禽卡氏杆菌病,试验采用GAM培养基对病鸡输卵管进行了菌株分离,以革兰氏染色试验、生化试验、16S r DNA序列分析分子生物方法对该菌株进行鉴定,并对分离株进行了药敏试验。结果表明:该菌株为革兰氏阴性杆菌,生化试验结果与卡氏杆菌的生化特性一致。16S r DNA序列分析表明,分离株与Gen Bank上的卡氏杆菌16S r DNA序列同源性达到99%以上,最终确定分离株为卡氏杆菌,命名为Gallibacterium anatis C2-1-1。卡氏杆菌对青霉素、阿莫西林、米诺环素极度敏感,对氨苄西林、头孢氨苄、头孢曲松、氟苯尼考高度敏感,对头孢唑林、阿米卡星、头孢呋辛、四环素、环丙沙星中度敏感,对链霉素、林可霉素、红霉素等不敏感,该分离株具有一定耐药性。     

1株鸭源棒状杆菌的分离及鉴定

从四川某鸭场发病种鸭的肝脏组织中分离到1株革兰阳性杆菌,通过形态特征、培养特性、生化特性进行鉴定,并进行药敏试验,应用通用引物对其16S r RNA基因进行克隆与序列分析。结果显示,分离细菌在血琼脂平板生长良好,能发酵部分糖类。系统进化分析显示,分离菌株与棒状杆菌属细菌遗传进化关系较密切,其16S r RNA基因序列与棒状杆菌代表菌株的同源性在87.1%~98.9%之间,分离菌鉴定为棒状杆菌。     

猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

为了确定引起青岛市某猪场发病的主要病原菌,本试验对该猪场送检的病死猪进行剖检,从肺脏中分离得到一株细菌,随后进行分离菌的形态观察、生化试验、细菌16S r RNA基因测序与药敏试验。结果显示该株分离菌为革兰氏阴性杆菌;生化试验结果表明该株菌分解氨基酸、不分解糖类,与支气管败血波氏杆菌的生化试验结果大致相同;16S r RNA基因序列与支气管败血波氏杆菌(Gen Bank序列号:AP014582.1)同源性为100%;药敏试验结果表明该株分离菌对部分氟喹诺酮类、氨基糖苷类药物敏感。细菌分离鉴定和药敏试验的结果为猪场发生该病时如何用药治疗提供参考依据。     

猪源肺炎克雷伯菌的分离鉴定

为确定四川某猪场导致猪细菌性感染死亡的病原,本研究从送检病死猪肺脏样品中分离得到一株细菌,对该菌株进行培养特性观察、生化试验、动物致病性试验、药敏试验、16S r RNA基因的扩增及测序鉴定。结果显示其16S r RNA基因序列与肺炎克雷伯菌(Kpn)序列同源性达99%,表明该菌株为Kpn肺炎亚种;致病性试验结果显示其对小鼠具有强致病性;并且在血平板上出现α溶血现象;药敏试验结果显示分离菌株表现出多重耐药性,毒力较强,并且在培养特性上发生一定的改变。本实验为进一步研究Kpn耐药机制和致病机理奠定了基础。     

鸭疫里默菌的分离鉴定与动物回归实验

为了解最近吉林地区某鸭场大量鸭病死的原因,对该鸭场送检的病料进行细菌分离培养并成功分离出一株革兰阴性菌。通过生化试验、16S r RNA鉴定及序列测序分析、玻片凝集试验和动物回归试验等对分离菌进行鉴定,16S r RNA基因测序结果显示,分离菌与鸭疫里默菌同源性达到99%;该菌能够使雏鸭死亡且致病性较强。结果表明,该鸭场鸭群死亡原因是1株血清2型鸭疫里默菌感染。     

猪链球菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定某猪场仔猪死亡的主要病原菌,分析该病原菌的耐药性,本试验对病死猪进行剖检,并从肺脏、脾脏中分离到一株细菌,随后进行分离菌形态观察、生化试验、细菌16S r RNA基因测序与药敏试验。结果表明该株分离菌为革兰氏阳性链状球菌,生化试验结果与链球菌的生化试验结果大致相符;细菌的16S r RNA基因序列经Blast同源性比较,与猪链球菌(Gen Bank CP007497.1)同源性为99%;药敏试验结果表明该株分离菌对氟喹诺酮类、β-内酰胺类多种药物敏感。细菌分离鉴定和药敏试验的结果为猪场发生该病时药物治疗提供参考依据。     

绵羊刚果嗜皮菌的分离鉴定及某些生物学特性研究

从疑似嗜皮菌感染绵羊的皮肤疙瘩病料中分离到1株细菌,通过对其形态、培养特性、生长特征、生理生化特性、16S rRNA基因序列测定与同源性分析等研究,证明分离株为刚果嗜皮菌。人工感染羔羊表现出与自然发病绵羊相同的症状并死亡,从人工感染死亡绵羊皮肤中再次获得同种细菌。药敏试验结果表明:该菌对林可霉素、卡那霉素、氧氟沙星、复方磺胺、土霉素、氟苯尼考高度敏感。     

一株黑叶猴源鸟肠球菌的分离鉴定及耐药分析

黑叶猴是我国一级重点保护动物,2018年11月贵州某动物园中黑叶猴出现死亡,为调查其原因,本研究采集病死黑叶猴的肺脏样品进行细菌分离纯化,并对分离菌进行革兰氏染色镜检、生化鉴定、16S rRNA基因序列鉴定、小鼠致病性试验及分离株的药敏试验和耐药基因检测。结果显示:经形态观察、培养特性鉴定以及16S r RNA的PCR鉴定,该分离株为鸟肠球菌,将其命名为GZ1811;16S rRNA基因的同源性分析及进化树结果显示,GZ1811株与GenBank中鸟肠球菌的一致性为100%;小鼠致病性试验结果显示,小鼠出现临床症状,甚至死亡,解剖可见其肺脏有散在出血点;药敏试验结果显示,分离株对四环素等药物耐药。耐药基因PCR检测结果显示分离菌株的四环素类耐药基因tetM呈阳性,表明耐药表型和耐药基因型一致。本实验为黑叶猴鸟肠球菌病的诊断和防治提供具有科学价值的参考依据。     

副猪嗜血杆菌分离株耐药性、血清型及RAPD基因型分析

为弄清某规模化养猪场感染和流行的副猪嗜血杆菌(HPS)菌株的耐药性、血清型及基因型,本试验自该猪场发生浆膜炎和关节炎病猪的不同组织样品中分离到6株HPS菌株,通过细菌培养特性、生化试验和PCR扩增细菌16S rRNA基因片段并测序对分离株进行鉴定;进而鉴定分离株对不同类别抗生素的耐药性;最后对分离株进行血清分型和RAPD基因分型并分析两者的相关性。结果显示,自病猪不同组织脏器中分离鉴定了6株HPS菌株,体外培养具有典型"卫星生长"现象;生化试验结果符合HPS反应特性;PCR均可扩增出821 bp的HPS 16S rRNA基因片段,且序列与HPS一致。药敏试验结果显示分离株对头孢菌素类、青霉素类、氨基糖苷类、大环内酯类和四环素类抗生素敏感,而对喹诺酮类、磺胺类、林可霉素类和氯霉素类抗生素产生耐药性。琼脂扩散试验结果显示HPS分离株均为血清5型;RAPD分析显示HPS分离株与15个血清型参考菌株可分为4个基因型。本试验结果为HPS的流行病学调查及防控具有一定的借鉴价值。     

猪支气管败血波氏杆菌的分离鉴定

从河北廊坊养猪场采集有明显呼吸道症状的猪肺脏进行病原菌分离培养,通过对分离菌株进行形态观察、培养特性、16S r RNA测定,以及支气管败血波氏杆菌fla及Dnt基因PCR鉴定,确定成功分离鉴定到4株猪支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,分离菌株对庆大霉素、替米考星、氟苯尼考、恩诺沙星及头孢吡肟高度敏感。对小鼠具有一定致病性。     

一株猪丹毒杆菌的分离及鉴定

猪丹毒为我国三大猪传染病之一,给养猪业造成严重的经济损失。为了诊断某猪场猪只发病情况,试验从送检病料中分离到一株分离菌,对分离菌株进行镜检、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析,结果判定分离菌株为猪丹毒杆菌,从而将此病例确诊为猪丹毒,为养殖场防治该病提供理论依据。     

一株斯里兰卡星龟体内香味类香味菌高度同源株的分离与鉴定

旨在对海南某陆龟保育基地内患病斯里兰卡星龟体内的病原菌进行分离鉴定。收集了2只死亡斯里兰卡星龟的病料,通过病理解剖、触片镜检、细菌分离培养、16S r RNA基因扩增测序等方法鉴定细菌,基于16S r RNA序列构建系统发育树,鉴定分离菌生理生化特征,进行药敏试验筛选敏感药物。结果:从2只病死星龟病料内分离得到6株相互间高度同源的革兰阴性杆菌,为同一种属细菌,命名为HN20161121SUN,16S r RNA鉴定显示出该菌与香味类香味菌(Myroides odoratimimus)CCUG 39352同源性达99.41%,且在系统进化树上聚为一枝,生理生化特征鉴定进一步验证该菌符合香味类香味菌细菌生理生化特征,药敏试验显示该分离菌仅对测试的16种抗生素中的磺胺异噁唑敏感。     

一株血鹦鹉嗜水气单胞菌的分离鉴定

为确诊天津市某水产养殖场血鹦鹉突发传染病病原,并对其进行有效的预防和治疗,本实验对患病血鹦鹉进行了病原的分离鉴定及生物学特性研究。从病灶部位共分离出一株疑似病原菌,经人工感染后发现编号为YW01的分离株具有较高的致病性,临床症状与自然发病症状一致,LD50为9.55×109cfu/m L。YW01革兰氏染色呈阴性,杆状。16S r RNA基因序列分析结果显示,YW01菌株在系统发育树上与嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)聚类,同源性达到99%。综合生理生化特征、形态学观察、人工感染以及16S r RNA基因序列分析,表明YW01分离株为嗜水气单胞菌。YW01分离株的最适生长p H为7~8,最适生长温度为32℃。在32℃200 r/min条件下的生长周期是:0~4 h为生长延迟期,4 h~10 h为对数生长期,10 h~22 h为稳定期,22 h~48 h为衰亡期。药敏试验表明,YW01分离株对多粘霉素B、阿米卡星、诺氟沙星等高度敏感,对磺胺异恶唑中度敏感,对麦迪霉素、氨苄西林、林可霉素、头孢拉定等不敏感。本研究为该病的防治提供了实验依据。     

一株猪丹毒杆菌的分离及鉴定

猪丹毒为我国三大猪传染病之一,给养猪业造成严重的经济损失。为了诊断某猪场猪只发病情况,试验从送检病料中分离到一株分离菌,对分离菌株进行镜检、生化鉴定和16S rDNA基因序列分析,结果判定分离菌株为猪丹毒杆菌,从而将此病例确诊为猪丹毒,为养殖场防治该病提供理论依据。     

进口蜂蜜中幼虫芽孢杆菌的分离鉴定及调查

为调查分析进口蜂蜜中携带幼虫芽孢杆菌的情况和菌株特性,本研究对2017年度来自10个国家和地区的71份蜂蜜样品进行幼虫芽孢杆菌分离并纯化培养,将分离的菌株进行生化、16S r RNA基因鉴定和序列分析。结果显示:分离的31株均为幼虫芽孢杆菌,阳性率为43.6%(31/71);16S r RNA基因序列分析结果显示其与幼虫芽孢杆菌(ATCC9545)等同源性在97%以上。31株分离株16S r RNA基因保守性强,同源性达99.8%以上,遗传变异性较弱。本研究在国内首次为进口蜂蜜传播美洲幼虫腐臭病风险分析提供基础数据,为制定进口蜂蜜风险控制措施提供依据。     

一株猪丹毒杆菌分离株的致病性与耐药性分析

从某猪场病死猪心血、肝、脾等组织分离到1株革兰阳性杆菌,经细菌形态、16S rRNA基因扩增,确定分离菌为猪丹毒杆菌。对分离菌进一步开展了药物敏感性试验、耐药基因的检测、细菌致病性试验及免疫保护性试验。结果发现:分离株对β-内酰胺类、大环内酯类、氟苯尼考高敏,但对氨基糖苷类、四环素、林可霉素、诺氟沙星等耐药;分离株可扩增出氨基糖苷类耐药基因aac C2和四环素耐药基因tetB,但菌株中没有扩增到四环素耐药基因tetA。细菌致病性试验表明该毒株对小鼠的LD50为1.77×10~5cfu/mL。小鼠免疫保护试验结果表明,疫苗G4T10免疫后28 d,以分离株攻毒,对照组全部死亡(5/5),免疫组小鼠攻毒后没有死亡,仅表现为体重减轻,表明现用猪丹毒疫苗能保护小鼠抵抗猪丹毒的致死性攻击。     

新疆石河子地区某规模奶牛场奶牛乳房炎链球菌的分离鉴定及药敏试验

对准备进行抗生素治疗的24头患乳房炎奶牛的36个乳区样品进行链球菌的分离与鉴定,共分离出12株链球菌。通过形态学特征观察、生化特性鉴定、16S r RNA鉴定,最终确定12株分离菌均为链球菌,并对其做耐药性分析,为后期奶牛乳房炎治疗提供指导。