安阳地区副猪嗜血杆菌分离株的耐药性与耐药基因检测

为了分析安阳地区副猪嗜血杆菌分离株耐药性及耐药基因携带情况,采集患病猪的肺脏、脾脏、肝脏、关节渗出液等病料组织157份,分离得到了102株副猪嗜血杆菌.采用KB药敏纸片法和PCR法分别检测副猪嗜血杆菌分离株的耐药性和耐药基因.结果显示,分离的102株副猪嗜血杆菌对青霉素、阿莫西林、庆大霉素等10种的耐药率在44.1％以...     

副猪嗜血杆菌广西分离株耐药性分析

为了了解广西副猪嗜血杆菌(HPS)的耐药情况,试验应用纸片扩散法测定了2009年5月份至2011年3月份分离自广西壮族自治区南宁、桂林、玉林、钦州市65个猪场的31株副猪嗜血杆菌药物敏感性。结果表明:31株菌株对罗红霉素、多黏菌素B和链霉素的耐药率为58.1%、54.8%和51.6%;对头孢西丁、阿莫西林、氨苄西林、卡那霉素、阿米卡星、新霉素、环丙沙星、恩诺沙星的耐药率为16.1%～41.9%;对庆大霉素、氟苯尼考和头孢噻肟的耐药率只有6.5%、9.7%和9.7%。在31株HPS广西分离株中,只有1株菌株对14种抗菌药敏感,仅占3.2%;4株菌株只对1种抗菌药产生耐药性,占12.9%;其余26株菌株对2种以上抗菌药产生耐药性,占83.6%。     

副猪嗜血杆菌病

副猪嗜血杆菌病是由副猪嗜血杆菌引起的一种以纤维素性浆膜炎、多发性关节炎、胸膜炎和脑膜炎为特征的猪呼吸道传染病,严重危害各年龄段的猪群,病死率较高。近年来,该病成为危害全球养猪业的典型细菌性痰病,给养猪业造成了巨大的经济损失。为了全面地了解副猪嗜血杆菌病,就该病的病原学、流行病学、致病机理、诊断和防治等方面做以下综述。     

副猪嗜血杆菌江西分离株药物敏感性及四环素耐药基因tet(B)分析

为了解副猪嗜血杆菌江西株的药物敏感性及其耐药基因,本实验采用K-B法测定分离株对57种药物的敏感性,结果显示20株副猪嗜血杆菌均对阿洛西林和万古霉素敏感,80％及以上的分离株对氨苄西林\舒巴坦、阿莫西林\棒酸等高度敏感.但分离株对恩诺沙星、氨曲南、四环素等的耐受性较强,某些菌株对多种药物具有抗性,其中6株菌能够耐受5种药物,5株菌能够耐受12种药物,3株菌能够耐受13种药物,甚至有2株菌能够耐受多达22种药物.将江西分离株的药物敏感性结果与其它国家或地区以及不同时间分离菌株的结果相比较表明,不同地区及不同时间段分离的菌株药物敏感性存在较大差异.为探索副猪嗜血杆菌耐药的分子机制,本研究设计引物并建立了检测四环素耐药基因tet(B)的PCR方法.运用所建立的方法检测江西株tet(B)基因,在15株四环素耐药菌株中检测出其中9株菌存在该基因,推测tet(B)可能是介导该菌对四环素耐药的主要分子机制之一.     

不同药物对副猪嗜血杆菌病的疗效比较

在实际诊治中,由于养殖者的盲目、过度以及不合理的使用抗菌药物,导致该病菌的耐药性逐渐增强,极大降低抗菌药物的治疗效果,增加后期治疗难度。为尽快对病情进行确诊,该文对副猪嗜血杆菌的药物疗效进行了较为详细的研究,以科学合理地选择对应的抗菌药物进行参考治疗。     

副猪嗜血杆菌tbpA基因PCR—RFLP分型

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis,HPs）是目前影响世界养猪业的重要病原之一。本试验利用针对HPs转铁蛋白基因tbpA的PCR—RFLP分型方法,对2003-2008年分离自江苏、上海、广西、浙江、江西和安徽等6省市的57个HPs分离株及15个参考菌株进行PCR—RFLP分析。结果显示,15个血清型参考菌株分为9种基因型,57个HPs流行分离株分为15种基因型,其中在我国最为流行的基因型分别为DBN（38％）,ABN（18％）与DBP（12％）。本研究表明副猪嗜血杆菌在我国猪群中普遍存在,并至少有15个RFLP基因亚型,从而为我国HPs病的防治提供了重要理论依据。     

副猪嗜血杆菌研究进展

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)是一种存在于上呼吸道的共栖菌,可以引起猪的传染性多关节炎、多浆膜炎,近十年来给养猪业造成了严重的经济损失。本文就有关副猪嗜血杆菌的病原学、诊断防治等方面的情况做进一步介绍。     

副猪嗜血杆菌的耐药机制

副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,Hps)能够引起猪的副猪嗜血杆菌病,主要表现为多发性浆膜炎、关节炎、脑膜炎等临床症状。副猪嗜血杆菌是一种无鞭毛、不运动、无芽孢、多形态的革兰氏阴性短小杆菌,通常具有荚膜。随着养猪业的规模化和产业化,副猪嗜血杆菌病已对全球养猪业造成巨大的威胁。抗生素对于副猪嗜血杆菌病的防治具有重要的作用,而目前该病难以控制主要是由于不合理用药导致副猪嗜血杆菌严重耐药造成的。Hps的耐药性严重影响了抗生素治疗的效果,同时对开发新型抗生素也提出了挑战。通过研究副猪嗜血杆菌的耐药机制可以为Hps的耐药性问题提供解决思路。     

副猪嗜血杆菌病诊断与耐药分析

2017年3月,河南省清丰县某猪场育肥猪发生咳嗽、腹式呼吸、体温升高等症状,为确诊病因,采集典型病猪的肺、心血,分离出一种细菌,通过染色镜检、氧化酶触酶试验和PCR分子鉴定,最终确定出分离菌为副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS),编号为qff01。选择14种药物,采用纸片扩散法,对已确定为副猪嗜血杆菌的分离菌株进行药敏试验,其结果表明分离菌株对头孢噻呋钠、阿莫西林-克拉维酸、恩诺沙星、头孢曲松、阿奇霉素等药物敏感,对氨苄西林、四环素、氯霉素、土霉素、磺胺甲恶唑/甲氧苄啶耐药。本研究结果对该猪场的副猪嗜血杆菌病防治工作提供了一定的参考依据。     

副猪嗜血杆菌黏附基因的表达和免疫原性鉴定

为获得副猪嗜血杆菌(HPS)黏附素基因的表达产物并对其进行免疫原性鉴定,本研究采用PCR技术扩增了HPS黏附素基因序列,将扩增产物与表达载体pET-32a(+)连接,得到表达重组质粒。通过EcoRⅤ和HindⅢ双酶切鉴定和测序确认正确后,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)中进行表达。经SDS-PAGE电泳分析,获得了59.5ku的表达产物,与预期大小的黏附素蛋白分子量一致。经western blot检测,表达产物与HPS阳性血清反应,证明表达产物具有一定的免疫活性。提示本研究所表达的蛋白将有助于HPS的血清学诊断和疫苗的研发。     

副猪嗜血杆菌ompP2基因的克隆鉴定及序列分析

用PCR技术对华南地区分离的17株不同血清型副猪嗜血杆菌菌株ompP2基因进行克隆鉴定,并以CLUSTALS1和PHYLIP-3.68软件将ompP2基因序列进行比对和遗传进化分析.17株副猪嗜血杆菌茵株中均能扩出ompP2基因,克隆测序结果发现ompP2基因大小有所不同,与参考序列ABKM01000007的同源性在92％～99％之间.序列比较结果显示,ompP2基因与GenBank公布的副猪嗜血杆茵全基因组测序中的ompP2基因序列具有较高的同源性,不同菌株ompP2基因序列大小存在差异,为进一步验证ompP2蛋白的功能及相关研究奠定了基础.     

副猪嗜血杆菌冻干保护剂的研究

采用冻存实验筛选出一种冻存存活率为100％的副猪嗜血杆菌保护剂(HPS-d),通过冷冻干燥实验测定HPS-d冻干存活率为25.94％.利用单因素分析实验优化保护剂HPS-d基质,在HPS-d中添加3种保护剂基质,结果显示:当海藻糖比例为1％、L-精氨酸盐酸盐比例为3％、BHI培养基/保护剂比例为1∶2时,冻干存活率达73.65％ ～77.61％.Plackett-Burman实验设计考察了保护剂8种组分的保护效果,结果显示:D-山梨醇、L-精氨酸盐酸盐和D-海藻糖是影响冻干存活率的显著因素.冷冻干燥验证实验证明优化后保护剂HPS-d平均冻干存活率达74.77％.     

Drug-susceptibility and isolation of a plasmid in Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae

We isolated 56 Haemophilus (Actinobacillus) pleuropneumoniae strains from the pneumonic porcine lung tissues and tested them for antimicrobial susceptibility. Two drug-resistant strains were obtained. One, named KH-265, was resistant to streptomycin (SM) and sulfonamide (SA), and the other, named KH-195, was resistant to tetracycline (TC). The minimum inhibitory concentrations (MICs) of drugs for resistant strains were 100 micrograms/mliters for SM, 3200 micrograms/mliters for SA, and 12.5 micrograms/mliters for TC. KH-265 possessed a 8.3Kb nonconjugative plasmid, pMS260, encoding SM and SA resistance, which was transformable to E. coli strains. pMS260 belonged to none of 14 incompatibility groups including Inc. P and Inc. Q, so far tested. It was mobilizable to various causative strains for respiratory infections, Pseudomonas aeruginosa, Bordetella bronchiseptica, Pasteurella multocida and Haemophilus pleuropneumoniae, by RP4 (Inc. P) plasmid.     

aroA gene PCR-RFLP diversity patterns in Haemophilus parasuis and Actinobacillus species

The Haemophilus parasuis aroA gene encodes 5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase and participates in the aromatic amino acids and the folic acid universal metabolic pathway of bacteria. The application of aroA-based PCR-RFLP methodology yields a significant degree of diversity in H. parasuis and Actinobacillus species. PCR amplification of the aroA gene rendered a 1,067-bp fragment in all 15 H. parasuis serovars, and also in Actinobacillus pleuropneumoniae serotypes 1-12, Actinobacillus lignieresii, Actinobacillus equuli, Actinobacillus porcinus, Actinobacillus rossii, Actinobacillus suis, Actinobacillus ureae, Actinobacillus minor and Actinobacillus indolicus. Sau3AI and RsaI digestions of the aroA PCR products rendered seven different restriction fragment length polymorphism (RFLP) patterns: group I (H. parasuis serovars 1, 2, 4-6, and 8-15, A. porcinus and A. ureae), group II (H. parasuis serovars 3 and 7, and A. pleuropneumoniae serotypes 1, 4, 5, 9, 11 and 12), group III (A. lignieresii), group IV (A. pleuropneumoniae serotype 7), group V (A. pleuropneumoniae serotypes 2, 3, 6 and 8, A. equuli, A. rossii, A. minor and A. indolicus), group VI (A. suis) and group VII (A. pleuropneumoniae serotype 10). This is the first report describing the presence of aroA gene in H. parasuis, A. lignieresii, A. porcinus, A. rossii, A. suis, A. ureae, A. minor and A. indolicus and the data presented here demonstrates a significant degree of aroA genetic diversity in H. parasuis and species of the genus Actinobacillus.     

副猪嗜血杆菌研究进展

近年来 ,国内外许多猪场出现了一种以多发性浆膜炎和关节炎及高死亡率为特征 ,严重危害仔猪和青年猪的传染病。经细菌分离培养、生化鉴定和分子生物学试验证明 ,该传染病主要是由副猪嗜血杆菌所引起。为了更加全面地认识该病原体 ,文章对其流性病学、理化特性、分子生物学、诊断及防制作了较为全面的概述。     

Typing of Haemophilus parasuis strains by PCR-RFLP analysis of the tbpA gene

On the basis of a species-specific PCR assay, a RFLP analysis for typing of Haemophilus parasuis strains was developed and evaluated. Amplification was based on the gene tbpA, encoding a transferrin-binding protein. RFLP analysis of the 1.9-kb tbpA-amplicon using TaqI, AvaI and RsaI endonucleases produced 12 different patterns for the reference strains of the 15 known H. parasuis serovars, and showed a high heterogeneity (33 RFLP groups) for 101 H. parasuis clinical isolates tested. The sensitivity, typeability (100% versus 65% for immunodiffusion), high degree of discrimination (0.93 versus 0.84 for immunodiffusion), simplicity and low cost per test make this PCR-RFLP assay a useful method for typing H. parasuis and, therefore, for studying the epidemiology of outbreaks of Gl?sser's disease.     

副猪嗜血杆菌外膜蛋白TbpB基因的克隆和表达

为了克隆和表达副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis,HPS)外膜蛋白TbpB基因,试验采用基因工程的方法对已发布的HPS外膜蛋白P5序列进行相关序列分析,设计并合成引物,以HPS血清5型基因组为模板,通过PCR扩增HPS外膜蛋白P5编码基因,获得长为1 116 bp的预期基因片段。该基因编码372个氨基酸的蛋白质,预测分子质量约为41 ku,将该基因片段定向克隆至表达载体pGE X-6p-1中。结果表明:诱导表达后分子质量约为67 ku,与副猪嗜血杆菌阳性血清发生了特异性反应。说明该蛋白与抗体发生了反应,有一定免疫原性。     

副猪嗜血杆菌Plp4蛋白的原核表达及免疫原性分析

为原核表达副猪嗜血杆菌P1p4蛋白,本研究通过PCR方法扩增P1p4全长基因并克隆于pET-28a(+)载体中,将重组质粒转化BL21(DE3)感受态中,采用0.4 mM IPTG经22℃诱导表达了35 ku的重组蛋白.经western blot试验证明Plp4蛋白具有良好的反应原性,免疫6周龄昆明小鼠制备免疫血清,ELISA检测表明制备的抗血清效价在1∶15000以上,表明P1p4蛋白具有良好的免疫原性.