一株宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的进化分析

裂解性噬菌体能够特异性裂解细菌,本研究分析了一株从自然界中分离的宽宿主谱裂解性大肠杆菌噬菌体的种属和进化关系。前期用Adams双层平板琼脂法从猪场污水中分离纯化出一株裂解性噬菌体v B_Eco M_JS09,裂解谱分析能够裂解禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌。扩增分析gene18、gene 23序列,并根据gp18和gp23氨基酸序列构建系统进化树,分析JS09的遗传进化关系。结果表明噬菌体v B_Eco M_JS09基因组为ds DNA,属于有尾噬菌体目、肌尾噬菌体科、T4-like噬菌体、T-evens亚群。其gp18氨基酸序列与大肠杆菌噬菌体RB69同源性最高,为100%;gp23氨基酸序列与大肠杆菌T4噬菌体同源性最高为96%。该结果为禽致病性大肠杆菌和产肠毒素大肠杆菌的防控提供了生物学基础。     

高效裂解性宽谱大肠杆菌噬菌体筛选方法探究

本试验以11株兔源致病性大肠杆菌为宿主菌,利用滴定法和双层平板法从莱芜和青岛规模化兔场污水中分离到2株噬菌体v B-Eco M-t E6和v B-Eco M-tE10。通过透射电镜观察,两株噬菌体均属于有尾噬菌体目,肌尾噬菌体科。噬菌体v B-Eco M-tE6和v B-Eco M-t E10的效价为5.42×10⁸ PFU/mL和8.26×10⁹ PFU/m L,能够裂解5种以上的兔致病性大肠杆菌,裂解性强、效价高、裂解谱广泛,具有较高的开发和利用价值。     

鸡大肠杆菌噬菌体分离及裂解性试验

大肠杆菌是引发肠道疾病的主要致病菌,严重危害人类健康和畜牧业生产。近几年80%大肠杆菌已对家禽临床上常用的抗生素产生较强的耐药性,且多重耐药菌株普遍。目前,噬菌体治疗细菌性疾病受到了人们的关注,与抗生素相比,     

致病性大肠杆菌噬菌体分离及裂解特性分析

以鸡源致病性大肠杆菌O18为宿主菌,采用双层琼脂平板法从鸡场粪样中分离出1株噬菌体,命名为Bp-YK2。采用经纯化的噬菌体对24株鸡源致病性大肠杆菌进行裂解试验,并利用PCR技术对衣壳基因gene23进行扩增。结果显示,该噬菌体效价为1.55×1010pfu/mL,宽噬率为41.67%;噬菌体衣壳基因gene23与噬菌体Bp7同源性最高,同源性为97%,推测该噬菌体为肠杆菌T4噬菌体。本研究为开发治疗耐药大肠杆菌的噬菌体制剂奠定基础。     

鸡致病性大肠杆菌噬菌体的分离

将微生物实验室分离保存的44株鸡致病性大肠杆菌进行生化鉴定,将鉴定正确的大肠杆菌接种于肉汤培养基,取幼龄培养物利用双层平板法进行大肠杆菌噬菌体的分离。对分离的噬菌体进行增殖后,经过滤除菌得到较纯噬菌体样品,并用甘油进行分装保存。     

宽裂解谱禽源沙门氏菌噬菌体的筛选及其裂解性能分析

为了筛选宽裂解谱禽源沙门氏菌噬菌体并分析其裂解性能,本试验首先对分离自不同年份、不同地区、不同宿主来源的238株禽源沙门氏菌(C01～C238株)进行药物敏感性检测和血清型鉴定,筛选出耐药率大于60.00%的抗生素;然后采用双层平板法测定50株沙门氏菌噬菌体(NP01～NP50)对238株禽源沙门氏菌的裂解谱并统计裂解率;最后选择裂解率最高的噬菌体,进一步统计其对筛选到的抗生素耐药的沙门氏菌菌株的裂解率及对不同分离年份、分离地区、宿主来源及血清型的沙门氏菌菌株的裂解率。结果表明：238株沙门氏菌对青霉素、阿莫西林、红霉素、利福平、复方新诺明的耐药率较高,均大于60.00%;其中对红霉素的耐药率最高,为88.24%;对头孢噻肟、氧氟沙星、庆大霉素、四环素的敏感率较高,为64.71%～86.13%。在238株被检沙门氏菌中,肠炎沙门氏菌有128株,鸡白痢沙门氏菌有95株,鼠伤寒沙门氏菌有6株,伤寒沙门氏菌有2株,甲型副伤寒沙门氏菌有1株,未定型沙门氏菌有6株。在50株沙门氏菌噬菌体中,有14株对238株沙门氏菌的裂解率在80.00%以上,有17株裂解率在20.00%以下;NP17的裂解率最...     

致病性鸡大肠杆菌噬菌体的分离

培养菌种A、B、C、Se制成悬液后与污水样品a、b、c共同培养。增殖后将混合培养液离心。制备裂解液,取上清液过滤除菌后,得到较纯噬菌体样品。通过单层平板法鉴定是否有噬菌体的存在。用双层平板法纯化噬菌体,制成噬菌体制剂。     

一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体的分离及生物学特性分析

为了分离一株裂解性鸡白痢沙门氏菌噬菌体,对抗多重耐药细菌,试验从健康鸡粪便中分离富集噬菌体,采用双层琼脂平板法纯化、增殖,超速离心法浓缩,利用透射电镜观察噬菌体形态,通过提取噬菌体基因组、酶切、电泳确定核酸类型,同时测定噬菌体的宿主谱、最佳感染复数、一步生长曲线、酸碱及热稳定性等生物学特性。结果表明：从鸡粪中分离得到1株裂解性噬菌体,命名为PSP2-22。该噬菌体头部直径为(60±5)nm,尾部长为(130±5)nm,为长尾噬菌体科;核酸类型为双链DNA。该噬菌体不仅能裂解鸡白痢沙门氏菌,还可裂解鼠伤寒沙门氏菌和奇异变形杆菌;最佳感染复数为0.1;平均裂解量约为136 pfu/cell,效价最高可达9.83 lg pfu/mL;在pH值6～11时相对稳定,70℃作用60 min之后仍具有一定活性。说明噬菌体PSP2-22是一株对不同温度和pH值有较强适应能力的双链DNA噬菌体,宿主谱相对较宽,具有潜在的应用价值。     

致病性耐药大肠杆菌的噬菌体裂解试验

临床分离的致病性大肠杆菌的耐药谱很广,常规抗生素的治疗效果较差,对18种抗生素的平均耐药率高达80%。而用从污水中分离得到的噬菌体,经纯化增殖提高效价后,用来进行裂解试验则取得了比较满意的效果,其中对H1、H2、B1、P等几种菌的裂解率在80%以上。     

1株可裂解肠道内和肠道外大肠杆菌的宽宿主谱噬菌体的分离与特性分析

本试验从猪粪中分离得1株大肠杆菌的烈性噬菌体ФNJ14。用实验室保存的大肠杆菌对其裂解谱进行检测,发现ФNJ14能裂解27株大肠杆菌,是一株对肠道内和肠道外大肠杆菌均有效的宽宿主谱的噬菌体。电镜观察结果表明,ФNJ14头部呈狭长的六面体,有一个可伸缩的尾部,属于肌尾噬菌体科成员。ФNJ14的生物学特性鉴定结果显示,其效价为1.28×1010PFU/m L,最佳感染复数(MOI)为100;对60℃以下的温度具有较好的耐受力,在70℃培养20min后活力显著下降;ФNJ14对碱的耐受力较强,在p H4~11之间都能保持较高的活力;一步生长曲线检测结果显示,ФNJ14潜伏期为20 min,复制周期为140 min。提示噬菌体ФNJ14对致病性大肠杆菌具有一定的防控潜力。     

大肠杆菌噬菌体BP16对鸡大肠杆菌病的防治效果

【目的】 探究大肠杆菌噬菌体BP16对O2血清型禽致病性大肠杆菌感染引起的鸡大肠杆菌病的防治效果, 以及噬菌体BP16的最佳治疗剂量。【方法】 将O2血清型禽致病性大肠杆菌新鲜培养物稀释成5×10¹⁰、5×10⁹、5×10⁸、5×10⁷和5×10⁶ CFU/mL 5个浓度梯度, 以测定禽致病性大肠杆菌的半数致死量(LD₅₀), 确定其感染剂量; 选取常用的对革兰阴性菌有抑菌或杀菌作用的药敏纸片进行药敏试验, 筛选出阳性对照药物; 经无菌试验和安全性试验确定噬菌体裂解液的无菌性及安全性, 用于后续试验。将80只雏鸡随机分为5个试验组与3个对照组, 试验组在雏鸡攻毒前后不同时间腹腔注射大肠杆菌噬菌体BP16, 3个对照组分别腹腔注射氟苯尼考、大肠杆菌菌液、生理盐水, 其余条件一致, 连续饲养7 d, 记录雏鸡的死亡率, 评价大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌人工感染试验鸡的防治效果。【结果】 O2血清型大肠杆菌的LD₅₀为1.5×10⁸ CFU/mL, 筛选出氟苯尼考作为阳性对照药物, 噬菌体裂解液中无菌, 噬菌体悬液对雏鸡安全, 可用于后续防治试验。雏鸡感染大肠杆菌前6 h使用噬菌体能有效预防大肠杆菌病, 在感染同时至感染后6 h内使用噬菌体, 能有效治疗大肠杆菌病, 且噬菌体治疗效果优于氟苯尼考; 当大肠杆菌攻毒剂量为1.5×10⁸ CFU时, 噬菌体剂量为1.5×10⁹ PFU时治疗效果为最佳。【结论】 大肠杆菌噬菌体BP16对大肠杆菌病具有防治作用, 本研究为进一步应用噬菌体防治大肠杆菌病及开发大肠杆菌噬菌体制剂提供了科学依据。     

1株禽大肠杆菌噬菌体的分离及杀菌效果评估

【目的】 探索噬菌体作为控制养殖环境致病性大肠杆菌的新手段。【方法】 本研究进行了大肠杆菌噬菌体的分离及相应指标评估。通过双层平板法从养殖环境中分离禽致病性大肠杆菌裂解性噬菌体。通过电镜及酶切鉴定、温度及酸碱稳定性、最佳感染复数、一步生长曲线及其在模拟环境中的杀菌效果对该噬菌体进行综合性评估。【结果】 分离得到的噬菌体具有正多面体的头部和细而长的尾部结构, 头部直径约98 nm, 尾部长约123 nm, 结合酶切鉴定结果初步判定该噬菌体为肌尾科双链DNA噬菌体。该噬菌体的温度耐受范围为37~50 ℃; 酸碱耐受范围为pH 3.0~11.0。当感染复数为0.00001时产生的子代噬菌体滴度最高; 一步生长曲线测定结果显示, 该噬菌体潜伏期为20~40 min, 裂解时间为80~100 min, 裂解量为4 133 PFU/cell。从该噬菌体对模拟环境中宿主大肠杆菌的杀菌效果可看出, 浓度为1×10⁴~1×10⁶ PFU/mL的噬菌体ФECP2-1对液体中目标大肠杆菌作用1~6 h, 杀菌率均在99.9%以上; 浓度为2×10⁴~2×10⁶ PFU/g的噬菌体ФECP2-1对鸡粪中目标大肠杆菌作用5~10 h, 杀菌率均在99%以上, 该噬菌体对鸡粪中目标大肠杆菌杀菌效果略低于对液体中目标大肠杆菌的杀菌效果。【结论】 ФECP2-1符合噬菌体类消毒剂相关特征, 是一株具有良好应用前景的噬菌体, 可作为一种生物消毒剂应用于养殖环境中禽大肠杆菌的防控。     

出血性大肠杆菌噬菌体933W的分离鉴定和保存

采用双层琼脂平板法从EHEC 0157 EDL933基因组中诱导分离出了编码志贺毒素的噬菌体933W，并利用PCR技术对其进行了鉴定。对933W的不同保存方法进行比较，结果表明，将噬菌体933W置于SM溶液中加入CaCl2、lgCl2至终浓度10mmol／L，明胶浓度至0．1％（W／V）并于4℃冷藏是保存933W较好的方法。     

一株鸡大肠埃希氏菌裂解性噬菌体的分离与生物学特性分析

旨在为鸡大肠埃希氏菌病防治提供噬菌体材料.使用双层琼脂平板法从鸡场污水中分离纯化得到1株鸡埃希氏菌裂解性噬菌体vB-EcoM-IME540(IME540),并通过噬菌斑、透射电镜观察该噬菌体的噬菌斑和形态特征,测定其最佳感染复数、耐热稳定性、pH敏感性等生物学特性,并对其进行全基因组测序及进化分析.结果表明,噬菌体vB...     

奶牛乳房炎源大肠埃希氏菌噬菌体的分离与生物学特性分析

以实验室保存的奶牛乳房炎源大肠埃希氏菌为宿主菌,从石河子大学试验站奶牛圈舍内的污水中分离纯化到一株大肠埃希氏菌噬菌体,对其进行生物学特性分析.利用双层琼脂平板法分离纯化噬菌体,对噬菌体进行噬菌斑及电镜观察,测定其裂解率、核酸类型、最佳感染复数、一步生长曲线、热稳定性和酸碱稳定性.结果表明,该噬菌体形成的噬菌斑透亮、近似...     

禽大肠杆菌的分离与16S rRNA的鉴定

从疑似患有大肠杆菌病的病死鸡群中采取粪便样品,分离病原进行生化鉴定,从8份样品中分离鉴定出6株大肠杆菌。根据细菌16S rRNA 基因的高度保守性,设计合成大肠杆菌的共同引物,对随机选取的1株细菌进行PCR扩增,并与GenBank中的E.coli 16S rRNA进行序列比对,确定这株细菌与大肠杆菌的同源性达99%以上。本方法特异性好,为实验室鉴定大肠杆菌提供了一种简单、容易操作的手段。     

唐山地区致鸡肝炎大肠埃希菌分离鉴定及药物筛选试验

从唐山地区无菌采集临床上疑似大肠埃希菌病鸡的肝脏,进行细菌分离培养,根据细菌培养特性观察、形态学检查和生化试验及动物试验结果,鉴定出致鸡肝炎的大肠埃希菌18株。将分离的18株致病性大肠埃希菌对12种药物进行了药敏试验,结果表明分离的大肠埃希菌对大多数氨基糖苷类高度敏感,其中对硫酸新霉素的敏感率最高达100%;对青霉素类耐药程度较高,甚至对先锋V具有较严重的抗药性,其高敏感率接近0%;对喹诺酮类抗生素、黄连素也具有不同程度的耐药性。联合用药试验结果表明硫酸新霉素和头孢拉定联合用药对大肠埃希菌的抑制作用特别明显。临床试验证明硫酸新霉素和头孢拉定联合用药对大肠埃希菌预防保护率高达94%,治疗率在84%以上。     

河南省鸡源大肠杆菌的分离鉴定与耐药性分析

为了掌握河南省鸡源大肠杆菌的耐药性情况,从规模化鸡场抽取样品120批,通过细菌的分离、纯化,采用BD Phoenix^TM-100全自动微生物鉴定系统对分离的大肠杆菌进行鉴定,并通过微量肉汤稀释法对分离菌株进行药物敏感性分析。结果显示,共分离菌株100株,分离率为83.3%。分离菌株对四环素、氨苄西林、磺胺异噁唑、恩诺沙星、复方新诺明耐药严重,耐药率均在80%以上,表明河南省鸡源大肠杆菌耐药情况较为严重。