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1.
鹅细小病毒和番鸭细小病毒双重PCR检测方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
根据GenBank上登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)基因序列,分别设计合成针对GPV非结构蛋白(NS)和MDPV NS2-VP1基因片段的2对引物GPV U/L和MDPV U/L,将GPV和MDPV提取核酸混合后作为模板,优化PCR反应条件,建立了能同时检测这2种病毒的双重PCR。特异性试验结果显示,引物GPV U/L仅特异性扩增出GPV-GZ1和GPV-GZ2株730bp核酸片段,引物MDPVU/L仅特异性扩增出MDPV的624bp核酸片段,双重PCR扩增出长度分别为730bp和624bp的2条特异性片段,而扩增鸭瘟病毒(DPV)和鹅副黏病毒(GPMV)的核酸扩增结果均为阴性。敏感性试验结果显示,双重PCR能同时检测到14.4pg的GPV核酸和28.8pg的MDPV核酸。结果表明,建立的双重PCR可用于GPV和MDPV的鉴别诊断和联合检测。 相似文献
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广西番鸭细小病毒的分离和鉴定 总被引:2,自引:1,他引:1
198 5年以来在我国的福建、广东、浙江、江西等省先后发生了以腹泻、呼吸困难和脚软为主要症状的番鸭细小病毒病 ,对 1 -3周龄的雏番鸭危害极大。 1 989年法国西部也发生了致死率为 80 %的番鸭细小病毒病 ,并分离到了病毒。广西从 1 996年开始在番鸭中也出现了类似疾病 ,为了明确病因 ,我们从广西各地采集疑似番鸭细小病毒的病料 ,进行了病原分离和鉴定 ,结果如下。1 材料和方法1 .1 标本的采集和处理从南宁市郊、北流、博白、柳州等地采集 2 0余份病死雏番鸭的肝、脾、胰等脏器 ,用含双抗的Hank’s液按 1∶5的比例磨成组织混悬液 ,… 相似文献
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番鸭和鹅细小病毒PCR鉴别方法的建立 总被引:5,自引:0,他引:5
根据基因库中番鸭细小病毒(MDPV)FM株和鹅细小病毒(GPV)的B株的基因序列设计了3个引物PVC、MDPVdn、GPVdn,分别用MDPV—DNA、GPV—DNA、MDPV尿囊液、GPV尿囊液、鸭瘟病毒尿囊液、传染性喉气管炎病毒尿囊液和无离子水对照,以PVC/GPVdn和PVC/MDPVdn特异引物在同一条件下进行PCR扩增,产物经10g/L的琼脂糖凝胶电泳分析。在PVC/GPVdn系统中,MDPV—DNA、MD—PV尿囊液、DP、ILT和无离子水对照无条带,其余样品均出现约460bp的条带,在PVC/MD—PVdn系统中,只有MDPV—DNA、MDPV—GPV混合DNA、MDPV尿囊液中出现约900bp的条带,其余无特异性核酸带,对MDPV—DNA的敏感性达O.5pg,对MDPV尿囊液敏感性为1000ELD50/5弘L,对GPV—DNA的敏感性为0.5pg,对GPV尿囊液敏感性为10ELD50/5μL。分别将不同时间提取0.5ng/μL MDPV—DNA、0.5ng/μL GPV—DNA、MDPV尿囊液、GPV尿囊液和无离子水对照样,以PVC/GPVdn和PVC/MD—PVdn特异引物进行PCR扩增3次,结果稳定。表明该PCR检测技术可灵敏、快速鉴别番鸭和鹅细小病毒。 相似文献
4.
番鸭细小病毒与鹅细小病毒的PCR鉴别诊断 总被引:7,自引:0,他引:7
通过比较基因bank中番鸭细小病毒(MDPV)和鹅细小病毒(GPV)的全基因序列,针对两种病毒非结构蛋白基因序列的相同区段,分别设计了两对PCR引物LHMP/LHMP2和LHGP1/LHGP2,用这两对引物分别对MDPV和GPV进行检测,其结果引物LHMP1/LHMP2只特异性地扩增MDPV,而引物LHGP1/LHGP2也只特异性地扩增GPV,并且两对引物均扩增出约720bp的长度序列。 相似文献
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为建立鉴别鸭瘟病毒(DPV)、鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)的多重PCR检测方法,参考文献合成针对DPVUL6基因、GPVNS基因和MDPVVP1基因序列的特异性引物。通过优化多重PCR反应中的引物浓度和退火温度,建立快速鉴别3种病毒的多重PCR方法,并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行检验。结果显示,该方法对禽流感病毒、新城疫病毒、鸭肝炎病毒、鸭源巴氏杆菌、鸭疫里氏杆菌的核酸扩增结果均为阴性,表明特异性较强;DPV、GPV和MDPV的最低核酸检出量分别为237.3pg、22.45pg和204.6pg,表明敏感性良好;该方法对DPV+GPV+MDPV、DPV+GPV、DPV+MDPV、GPV+MDPV、DPV、GPV和MDPV的核酸均能扩增出与预期大小一致的目的条带,表明该多重PCR方法重复性较好。本研究方法具有特异性强、敏感性良好、重复性较好和快速简便等特点,可用于DPV、GPV和MDPV临床感染病例的联合检测与鉴别诊断。 相似文献
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通过比对分析GenBank上登录的多株番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)和鹅细小病毒(Goose parvovirus)全基因序列,选取两种病毒间相似性较低的区域设计合成了2对特异性引物,建立了能快速鉴别诊断MDPV的套式PCR方法。该法仅能特异地扩增MDPV,敏感性达到62copies/uL,比普通PCR高1000倍。运用该方法对分离的12份临床样品进行检测,结果检测出2份MDPV。本试验所建立的套式PCR方法可用于MDPV感染的临床诊断和流行病学调查。 相似文献
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番鸭细小病毒分离鉴定 总被引:2,自引:0,他引:2
《中国预防兽医学报》2000,(Z1)
采集以腹泻、呼吸困难为主要症状的雏番鸭肝、脾病料,接种14日龄非免疫番鸭胚,80%胚在3-7天死亡,胚体呈弥漫性充血、出血。接种番鸭胚成纤维原代细胞72小时可见细胞圆缩、聚团等变化。聚苯乙烯乳胶凝集试验呈阳性,提取病毒接种细胞及尿囊液 DNA,用自行设计引物扩增到与设计相符的 600bp片段,克隆至 T载体,经酶切及序列分析表明我们所分离到的病毒为雏番鸭细小病毒(Muscovy Duckiling Pavovirus,MPV)。 相似文献
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应用PCR快速鉴别番鸭和鹅细小病毒 总被引:12,自引:0,他引:12
根据已发表的番鸭和鹅细小病毒基因组全序列,设计并合成了1对通用引物(PC1/PC2)和1对MPV特异引物(PS1/PS2),以MPV-DNA,MPV尿囊液,MPV尿囊液和GPV尿囊液混合液,GPV-DNA,GPV尿囊液和GPV细胞培养物,DHV尿囊液和H2O为模板在同一条件下分别以2对引物进行扩增,PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳分析,结果显示,在PC1/PC2系统中,除DHV尿囊液和H2O外,所有样品均出现长约480bp的特异核酸带,对MPV-DNA的敏感性为0.2pg,对GPV-DNA的敏感性为2pg;对MPV尿囊液的敏感性为100ELD50/2ul,PS1/PS2系统中,只有MPV-DNA,MPV尿囊液及MPV尿囊液和GPV尿囊液混合液出现预期约1100bp特异扩增产物,对MPV-DNA的敏感性为0.2ng,对MPV尿囊液的敏感性为1000ELD50/2ul,而GPV-DNA,GPV尿囊液,GPV细胞培养物,DHV尿囊液和和空白对照均未见到条带,分别以1ngMPV0DNA,1ngMPV--DNA,1ngGPV-DNA,MPV尿囊液,GPV尿囊液,DHV尿囊液和空白对照样品进行扩增,3次重复实验结果完全一致,表明该PCR检测技术可准确,快速鉴别番鸭和鹅细小病毒,为临床上准确,快速鉴别诊断番鸭和鹅细小病毒病奠定了基础。 相似文献
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番鸭细小病毒与鸭圆环病毒二重PCR方法的建立 总被引:1,自引:0,他引:1
根据基因库中鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的基因序列,分别设计了两对特异性引物,通过对二重PCR扩增条件的优化,研究建立了可同时鉴别检测鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的二重PCR方法。用该方法对同一样品中鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的模板进行PCR扩增,结果均得到了与实验设计相符的351bp(鸭圆环病毒)和474bp(番鸭细小病毒)的扩增条带,而对鸭Ⅰ型肝炎病毒、鹅细小病毒、鸭副黏病毒、鸭瘟病毒和禽流感病毒等病原体的检测全为阴性。敏感性测定结果表明:该二重PCR技术最低能检出100fg的鸭圆环病毒和番鸭细小病毒DNA模板。研究建立的鸭圆环病毒和番鸭细小病毒的二重PCR方法,具有快速、敏感、特异、定量和重复性好等优点,可用于临床上鸭圆环病毒和番鸭细小病毒感染的检测。 相似文献
12.
为研究番鸭细小病毒(MDPV)安徽分离株的遗传变异特征,通过PCR扩增获得了MDPV结构蛋白(VP)基因全长序列AH-MDPV-VP,并将该序列与GenBank中登录的12条MDPV和鹅细小病毒(GPV)VP基因序列进行比对。结果显示,AH-MDPV-VP基因全长2 199bp,包括完整的VP1、VP2和VP3蛋白编码区。MDPV与GPV的VP基因部分序列一致,但具有明显的差异。进化分析显示,MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH为同一分支,亲缘关系较近。同源性分析显示二者核苷酸序列同源性最高,为99.9%,且AH-MDPV-VP与GPV毒株SHFX1201的序列同源性也有89.5%。此外安徽分离株与其他MDPV的VP1、VP2和VP3基因同源性有逐步下降的趋势,而与GPV则相反呈上升趋势。进一步显示MDPV安徽分离株与基因重组型MDPV上海分离株SAAS-SHNH相似,可能为MDPV和GPV基因重组型水禽细小病毒。 相似文献
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根据GenBank中新城疫病毒(NDV)L基因和番鸭细小病毒(MDPV)Vp3基因的保守序列,采用Primer Premier 5.0软件设计并合成了2对引物。通过优化反应条件及特异性、敏感性评价,建立了能同时检测鸭源NDV和MDPV的二重PCR方法。该方法对鸭源NDV和MDPV的检测敏感性分别为30和16 fg。同时使用该方法对鸭瘟病毒、鸭肝炎病毒、鸭圆环病毒、H9亚型禽流感病毒、鸭黄病毒、沙门氏菌、大肠杆菌和禽多杀性巴氏杆菌进行检测,结果显示全为阴性。本研究建立的鸭源NDV和MDPV的二重PCR检测方法,具有特异、敏感、快速、重复性好等优点,可用于鸭源NDV和MDPV感染的快速鉴别检测。 相似文献
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番鸭细小病毒病(Muscovy duck parvovirosis),是由番鸭细小病毒(Muscovy Duckling Parvovirus Disease, MDPV)引起的番鸭病毒性传染病,其主要侵害1~3周龄的雏番鸭,俗称"三周病",该病的临床症状为喘气、腹泻、脚发软和进行性消瘦。番鸭细小病毒病的发病率和死亡率很高,是危害番鸭养殖业健康发展的主要病原之一。本文就番鸭细小病毒的病原学、流行病学、临床诊断及综合防控等方面进行综述,以期为广大养户提供指导。 相似文献
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番鸭细小病毒和鹅细小病毒生化及基因组特性的比较 总被引:12,自引:0,他引:12
番鸭细小病毒莆田株(MPV-P)和鹅细小病毒莆田株(GPV-P)分别感染的番鸭胚尿囊液经氯仿处理、PEG沉淀和Sepharose4B柱纯化。纯化样品在电镜下观察,均见到实心和空心2种病毒粒子。病毒粒子呈圆形,立体对称,无囊膜,直径为20-24nm。经SDS-PAGE分析,MPV和GPV均呈现3条结构蛋白带。MPV结构蛋白的相对分子质量约为VP1 89000、VP2 78000和VP3 61000,其中VP3为主要结构蛋白。GPV要相对分子质量与MPV有微小差别。MPV和GPV核酸均为单链DNA,长度约为51000bp。分别以MPV核酸和GPV核酸为模板,加到无引物的DNA聚合酶Ⅰ大片段合成体系中,合成产物经1%琼脂糖凝胶电泳,均可见长度约为5600bp的双链DNA带,证明MPV和GPV核酸的3'末端具有发夹结构。对这2种病毒核酸及经Klenow合成的双链核酸进行限制性内切酶分析,两者的酶切结果明显不同,表明MPV和GPV核酸在一级结构上存在明显差异。以上结果证明,MPV和GPV不但在致病性上有显著养异,而且在核酸结构上也有明显差异。 相似文献
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从福建省番鸭主要饲养区共收集临床疑似番鸭细小病毒(Muscovy duck parvovirus,MDPV)病病料65份,进行病原学检测、病原分离、动物回归试验、免疫攻毒试验、基因片段序列分析,旨在研究福建省番鸭细小病毒病流行情况及病毒遗传变异状况。结果显示:仅有10份为MDPV感染,占比为15.2%;其余均为其他病原或两种病原混合感染。MDPV一年四季均能发生,但主要以冬春季节多发(占80%)。从分离的10株MDPV来看,分离株均能致死番鸭胚,番鸭感染MDPV分离株后发病率为80%~100%,死亡率为40%~60%,与1985年分离的MDPV-P株特性相似。1日龄番鸭免疫番鸭细小病毒病活疫苗后,7日龄进行分离株的攻毒,未见发病和死亡现象。基因进化树显示10株分离株与MDPV-P株属于同一分支。基于2018年流行的MDPV毒株与1985年MDPV-P株致病性、抗原性和基因序列特性相似,无明显变化,可使用番鸭细小病毒病活疫苗进行免疫可有效防控该病。 相似文献
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根据GenBank登录的鹅细小病毒(GPV)和番鸭细小病毒(MDPV)非结构蛋白(NS)基因特征,本研究设计1对特异性引物对GPV和MDPV基因组DNA进行PCR扩增,目的片段大小均为810 bp,并对PCR产物进行切胶回收。用EcoRⅠ酶对GPV和MDPV特异性胶回收产物进行酶切鉴定,结果显示MDPV经EcoRⅠ酶切后琼脂糖凝胶电泳检测片段为2段,大小为530和280 bp;而GPV经EcoRⅠ酶切后琼脂糖凝胶电泳检测片段大小不变。本研究建立了一种快速区别GPV和MDPV感染的检测方法,可对番鸭感染水禽细小病毒的情况进行快速鉴别诊断。 相似文献
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《动物医学进展》2015,(11)
为研究番鸭细小病毒基因遗传变异特征,通过PCR技术获得了番鸭细小病毒结构蛋白基因VP3序列AH-MDPV-VP3,并将该序列与GenBank数据库中登录的9条番鸭、鹅和鸭细小病毒基因相应序列进行了比对分析。测序结果可见番鸭细小病毒VP3基因全长1 605bp,编码534个氨基酸。氨基酸序列同源性和进化分析表明AH-MDPV-VP3与国内两个番鸭细小病毒基因KC171936和KM093740同源性较高,分别为100%和98.3%,且三者之间亲缘关系较近,来源于共同祖先;而与鹅细小病毒,尤其与台湾分离的鸭细小病毒基因AY382891和AY382892同源性相对较低,分别为91.6%和90.8%,遗传距离也相对较远。同时可见番鸭、鹅和鸭细小病毒的VP3基因各自较为保守,仅有少数氨基酸发生变异。本研究初步获得番鸭细小病毒VP3基因分子特征,为下一步该基因在免疫诊断及免疫防治中的应用奠定了基础。 相似文献