犬细小病毒昆明流行株的分离鉴定与VP2基因序列分析

为了解昆明市犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)流行及抗原变异情况,有针对性地筛选疫苗及研发新疫苗,本研究从昆明市部分宠物医院收集6份疑似CPV粪便样品进行病毒分离培养,对获得的疑似病毒液进行PCR、免疫荧光试验(IFA)、血凝效价测定、TCID50测定及VP2基因序列分析。结果显示,分离的1株病毒能使F81猫肾细胞产生明显的细胞病变(CPE),PCR扩增产物大小为164bp,IFA鉴定感染的F81细胞出现绿色荧光,血凝效价为1∶512,病毒TCID50为10-4.375/0.1mL,VP2基因PCR扩增条带大小为1 755bp。对分离株VP2结构蛋白进行测序分析,判定该分离株为CPV-2a亚型,与标准毒株存在5个变异氨基酸位点,属于变异株。将测序结果与商品化疫苗株及国内参考株序列进行比对分析,结果显示与弱毒苗Intervet/vaccine/06和Pfizer/vaccine/06核苷酸同源性均为98.7%;与国内参考毒株序列同源性为98.2%～99.5%,与ANTU-1和WH02/06株同源性最高;与ANTU-1株、WH02/06株及BJ01株亲缘关系最近,位于进化树的同一簇。本研究对监测CPV的遗传变异趋势及疫苗的研制具有重要意义。     

犬细小病毒VP2蛋白特点及病毒样颗粒疫苗制备研究进展

犬细小病毒病危害犬的健康,传统疫苗不能有效保护犬免受病毒的侵扰,寻求新的疫苗是当前研究和关注的热点。VP2蛋白是犬细小病毒(Canine parvovirus, CPV)的主要保护性抗原蛋白,在决定宿主范围和入侵过程中起重要作用。此外,VP2蛋白在N-端结构域和环结构域中含有几个重要的B细胞表位,可在CPV感染过程中诱导产生有效的中和抗体。因此,在开发CPV基因组亚单位疫苗中,VP2蛋白可作为候选抗原的首选。病毒样颗粒(VLPs)与天然病毒相似,但不具备天然病毒的复制功能引起机体发生感染,故近几年来利用不同的表达系统组装VP2蛋白一直是研究者们研究的重点。笔者着重对CPV VP2蛋白的特点及构象进行分析,通过特点分析得知CPV衣壳的主要成分中含有VP2,不但具有血凝活性,还与CPV的宿主范围和抗原性密切相关,因此,有活性的VP2蛋白在CPV基因工程亚单位疫苗的开发中极其重要。通过构象分析得知CPV VP2蛋白环状结构(Flexible loop)具有更大的灵活性,这可能是CPV感染宿主范围不断扩大的分子基础。同时笔者对VLPs疫苗的制备方法及优缺点进行讨论,以期为CPV疫苗的研究制备提...     

两例犬细小病毒与犬冠状病毒的混合病例诊疗

应用犬细小病毒胶体金快速测试板和犬冠状病毒胶体金快速测试板检测2例收治于西宁市好伙伴宠物医院的雄性小泰迪犬病例,诊断为犬细小病毒和犬冠状病毒混合感染.采用注射犬单克隆抗体、犬免疫球蛋白、犬五连血清等特异性抗体疗法,结合抗感染、补液和对症治疗,取得了满意的治疗效果.     

犬细小病毒VP2蛋白的原核表达与纯化

为了研究犬细小病毒（canine parovirus,CPV）VP2蛋白的结构和功能,本试验对CPV VP2蛋白进行表达和纯化。采用大肠杆菌表达外源蛋白的方法,将CPV VP2基因插入原核表达载体pET-32a（+）中构建重组原核表达载体pET-VP2,转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,在不同IPTG浓度、诱导温度和诱导时间条件下进行原核表达,确定最佳诱导条件。最佳条件下的诱导产物经超声破碎离心后,利用镍柱对重组蛋白进行纯化并用SDS-PAGE和Western blotting进行双重鉴定。结果显示,重组质粒pET-VP2经双酶切鉴定分别获得大小为5 900 bp左右的载体条带和1 755 bp左右的目的基因条带,成功构建了pET-VP2重组质粒;重组VP2蛋白的分子质量约为64 ku,与预期大小一致,且在37℃、1.0 mmol/L IPTG、诱导5 h条件下表达量最高,条带最亮;蛋白超声破碎后经SDS-PAGE发现,只在沉淀中出现了目的条带,而上清中并未出现相应条带,说明重组蛋白均以包涵体的形式存在;纯化后获得的重组蛋白,经SDS-PAGE和Western blotting双重鉴定,均在64 ku处出现条带,说明纯化后的蛋白为重组蛋白pET-VP2。本试验通过对CPV VP2蛋白的原核表达及纯化成功获得了大量纯度较高的CPV VP2蛋白,为今后制备CPV VP2蛋白多克隆抗体及进一步研究该蛋白在对治疗犬细小病毒病中的临床应用价值提供了基础理论依据。     

犬细小病毒单克隆抗体研究进展

犬细小病毒２型（ＣＰＶ２）是引起犬急性出血性胃肠炎和幼犬急性心肌炎的病原,主要危害幼犬,特别是２～６月龄小犬。该病发病急,病程短,死亡率高,传染性强,危害严重。自Ｅｕｇｓｔｅｒ（１９７７）［１］在美国报道以来,世界各国均有发生和流行［２］。梁士哲等...     

南宁地区犬细小病毒VP2基因的克隆及遗传进化分析

为了解广西南宁地区犬细小病毒（CPV）的流行现状与病毒变异情况,本试验对初步确诊为犬细小病毒病的12份阳性病料提取基因组DNA,以提取的基因组DNA为模板,通过PCR扩增VP2基因序列并测序,将12个阳性毒株样本VP2基因测序结果与GenBank中登录的17株国内外CPV分离株VP2基因进行同源性比对,采用Mega 7.0软件绘制遗传进化树,分析其病毒亚型和遗传进化情况。结果显示,成功扩增得到12个毒株样本的VP2基因片段,大小约1 755 bp,12株阳性样本毒株的VP2基因同源性在99.2%~100.0%之间,其中NN01与NN07、NN02与NN06同源性最高,为100.0%;阳性样本毒株与国内其他分离株VP2基因的同源性为97.6%~100.0%,其中NN08、NN10及NN04与CPV-ZJ1579同源性最高,均为100.0%,属于CPV-2a亚型;阳性样本毒株与国外代表性毒株同源性在98.1%~99.8%之间。遗传进化树分析表明,12个样本毒株中有3株属于CPV-2a亚型,3株属于CPV-2b亚型,6株属于CPV-2c亚型。这是继2018年初广西分离到CPV-2c型CPV后,首次发现南宁地区大规模流行CPV-2c亚型病毒,预示着CPV-2c亚型CPV在国内的流行正在增加。综上所述,广西南宁地区CPV-2a、CPV-2b与CPV-2c亚型并存,但CPV-2c亚型的比重比其他地区大,这也给该地区提供了新的防治信息,在实际CPV防控工作中除了对CPV-2a、CPV-2b等传统流行亚型的关注之外,更应该重视CPV-2c亚型CPV的防控。     

犬细小病毒国内外流行病学研究进展

犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)已流行近40年,由于VP2基因不断变异,产生了多种变异毒株并广泛流行于全世界,给CPV的防控带来巨大挑战。因此,本文以CPV的起源进化、变异毒株的突变特点及CPV变异株在国内外流行特点进行综述分析,以期阐明CPV流行态势,为有效的精准防控提供支持。     

成都地区犬细小病毒VP2基因克隆分析及基因型鉴定

根据GenBank中犬细小病毒(canine parvovirus,CPV)VP2基因序列设计合成两对特异性引物1F/1R和2F/2R,从疑似CPV感染病犬的粪便病料中提取DNA作为模板,分段扩增涵盖VP2基因的两个片段,大小分别为1325和758 bp,并进行克隆、测序,通过拼接得到11条长度为1755 bp的VP2基因完整序列。核苷酸同源性分析表明,扩增得到的11个完整VP2基因序列与GenBank中发布的21株国内外参考毒株比较,核苷酸同源性为96.2%~99.8%。采用DNAStar软件分析,预测VP2蛋白可能成为B细胞表位的区段位于Met1-Val38、Met73-Val82、Met96-Ala103、Lys151-Thr170、Gly235-Phe243、Leu294-Phe303、Ala359-Thr399、Ile469-His483、Ala503-Arg520、Lys570-Tyr584。将扩增获得的VP2基因编码的氨基酸序列与CPV参考毒株进行比较,第426位和第555位氨基酸残基分别为Asp和Val,鉴定出本试验得到的CPV基因型均为2a型,初步证实成都地区仍以CPV-2a为主要流行毒株。     

犬细小病毒套式PCR检测方法的建立及应用

为建立一种快速的犬细小病毒(CPV)病原检测方法,本试验根据GenBank上登录的CPV基因序列,在保守的VP2基因内部设计合成内外2对引物,建立了检测CPV的套式PCR方法。该方法对犬瘟热病毒(CDV)、犬冠状病毒(CCoV)、犬腺病毒(CAV)、犬副流感病毒(CPIV)的扩增结果均为阴性;该检测方法最低可以检测出0.1 ng的病毒核酸,第2次比第1次扩增的敏感性高100倍。建立的套式PCR方法具有良好的特异性、敏感性,可以准确快速检测出极低含量的CPV,将为CPV的病原检测及分子流行病学调查等提供一种高效、快速、特异、灵敏的检测方法。     

吉林省犬细小病毒流行毒株的分离及VP2基因序列分析

为了解吉林省宠物医院就诊犬犬细小病毒流行现状及毒株变异情况,从吉林省长春、吉林、辽源、松原、九台地区采集就诊犬肛门拭子73份,采用胶体金快速检测试剂盒检测后,阳性样品15份。选取具有代表性的6份病料使用F81细胞进行病毒的分离,成功分离到6株病毒(暂命名为JL-CC1、JL-CC2、JL-JL、JL-SY、JL-JT、JL-LY),经通用引物鉴定均为犬细小病毒。VP2基因序列分析结果显示,6株CPV分离株之间的核苷酸同源性为99.3%~100%,与近年来国内分离株核苷酸同源性为98.9%~99.9%,与国外分离株核苷酸同源性为98.3%~99.7%。遗传进化树结果表明,6株分离株分属4个分枝:JL-CC1、JL-LY、JL-SY与山东、辽宁分离株同属1个分枝,JL-CC2与黑龙江分离株同属1个分枝,JL-JT与吉林分离株同属1个分枝,JL-JL与2013年吉林、黑龙江分离株同属1个分枝。氨基酸序列比对显示6株分离株JL-CC1、JL-CC2、JL-JT、JL-LY、JL-SY属于New CPV-2a基因亚型,JL-JL株为属于New CPV-2b基因亚型。此外,6株CPV分离株在267、324、377、440位氨基酸发生了变异。结果表明,吉林省CPV以CPV-2a亚型为主,CPV-2b亚型为辅,并存在基因多变现象,可为吉林省CPV的有效防控提供数据支持。     

犬细小病毒病的流行现状调查

对犬细小病毒病流行现状进行调查,为本病的预防、诊断和治疗提供依据。 用犬细小病毒抗原检测试剂盒对2008年门诊的具有腹泻、呕吐、粪便带血等体征的189只患犬作病原检测,对犬细小病毒阳性病例兼有发热、咳嗽体征的16例病犬同时作犬瘟热病毒抗原检测。结果犬细小病毒阳性病例共137只,发病年龄从1个月～15岁各年龄段均有分布,以6月龄以下幼龄动物发病较多,占65.7%。流行季节差异不大,以春季病例略多,占27.0%。犬细小病毒与犬瘟热病毒混合感染的有12例,占8.8%。对在疫苗接种免疫保护期内的4只患犬进行检测,3只犬细小病毒阳性。结论：①免疫力尚未建立是幼犬发病的主要原因;②不按规定的免疫程序对动物进行加强免疫是成年犬发病的主要原因;③在部分发病幼犬中存在犬细小病毒与犬瘟热病毒的混合感染;④老龄动物对免疫的应答能力下降可导致免疫失败。     

犬细小病毒病流行病学调查

犬细小病毒感染是由犬细小病毒引起的一种急性、热性、传染性疾病,临床上以出血性肠炎或心肌炎为主要特征。本研究对泰州某宠物门诊2010年1月－2011年3月期间接诊的260例犬细小病例进行了分析研究,旨在了解泰州地区犬细小病毒病发病率、死亡率与犬年龄、品种、免疫接种、季节等因素之间的关系,并总结防控犬细小病毒病最有效的方法。结果表明,犬细小病毒病发病率及死亡率与犬的年龄、品种、免疫接种、季节有很大的相关性,依此提出了防制对策,以期为防制犬细小病毒病提供参考。     

犬细小病毒感染对MDCK细胞增殖活性及ATP酶的影响

为了研究犬细小病毒感染对MDCK细胞增殖活性及能量代谢的影响,建立了犬细小病毒感染模型,并于病毒感染后6、12、18、24、30 h和36 h,观察细胞的生长状态,同时检测细胞增殖能力和ATP酶活性。与对照细胞相比,病毒感染细胞在24、30、36 h时增殖活性明显下降(P0.05)。     

藏獒犬细小病毒流行病学调查及其防治

为了解犬细小病发病率、死亡率与藏獒年龄、免疫接种、季节之间的关系,并总结出一套治疗藏獒犬细小病最有效的方法。在2009年1月至2010年2月收治100例临床藏獒犬细小病病例,从流行病学、各种诊断方法、病理剖检、治疗等方面进行深入全面的研究。结果表明,犬细小病发病率及死亡率与藏獒的年龄、免疫接种、季节有很大的关系;通过应用以被动免疫(犬细小病血清、犬细小单克隆抗体)和联合主动免疫(弱毒疫苗)为主的综合治疗方法取得了良好治疗效果。     

Immunization of Pups with Maternally Derived Antibodies to Canine Parvovirus (CPV) Using a Modified‐Live Variant(CPV‐2b)

The results of vaccination trials carried out on pups with maternally derived antibodies (MDA) to canine parvovirus (CPV), using a modified‐live CPV‐2b variant vaccine (29‐97/40 strain), are reported. The vaccine was able to overcome the obstacle of MDA, and to elicit protective immunity in 100% of the pups whose antibody titres were 1:10–1:40, 83% of the pups with titres of 1:80, 57% of the pups with titres of 1:160, and even in 60% of the pups with antibody titres of 1:320.     

犬细小病毒病的研究进展

犬细小病毒病，又称犬细小病毒性肠炎，是由犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)引起的一种高度接触性传染病。犬细小病毒病分布于全世界，我国也时有发生。本病以剧烈呕吐、出血性肠炎、白细胞显著减少为主要特征，不同品种和年龄的犬都易感，在幼犬中的发病率和死亡率都很高，8月龄以内幼犬的死亡率高达70％。近几年来，随着我国军犬、警犬、实验用犬和宠物犬饲养量大幅增加，以及异地交流日渐增多，犬感染细小病毒日趋严重，给犬饲养业带来了重大的经济损失，成为犬饲养业危害最大的疫病之一。现就近几年来我国对CPV的研究现状报道如下。     

兰州市犬瘟热、犬细小病毒病及犬副流感的感染调查分析

为查清兰州市宠物犬犬瘟热、犬细小病毒病、犬副流感的感染情况,本研究对2004年~2009年前来宠物医院就诊的有临床症状的犬进行检测,共采集犬瘟热疑似病犬眼鼻分泌物、唾液2238份;犬细小病毒病疑似病犬粪便2423份;犬副流感疑似病犬眼、鼻分泌物334份。用快速检测试纸卡进行检测,结果显示兰州市宠物犬犬瘟热平均阳性率达27.52%,自2004~2009年间呈逐渐下降趋势。犬细小病毒病平均阳性率为25.88%,自2004~2008年间呈逐渐下降趋势,2009年略有反弹。首次证实犬副流感在兰州市宠物犬中流行,其中犬副流感病毒平均阳性率为37.72%,犬腺病毒Ⅱ型平均阳性率为19.46%,从流行周期看,2004年以犬副流感病毒感染为主,2005年以犬腺病毒Ⅱ型感染为主,而后连续两年以混合感染为主,到2008年又以犬副流感病毒感染为主,2009年再次以混合感染为主。     

Canine parvovirus in New Zealand: Epidemiological features and diagnostic methods

Data from 763 cases of clinical canine parvovirus disease confirmed at the Ruakura Animal Health Laboratory were examined. The largest number of cases were seen in spring and summer months with the peak incidence in February 1981. The morbidity and mortality rates were highest in young dogs. Sixty-nine percent of all cases occurred in dogs less than six months of age, and 63 percent of dogs seven weeks of age or younger died. The laboratory methods used to diagnose canine parvovirus disease are compared and discussed.     

犬细小病毒病的研究进展

随着人民生活水平的提高，养犬、猫者日益增多，犬的疾病逐渐被人们所重视，对犬的各种疾病的研究也在不断深入。作者从病原学、流行病学、生物学特性、诊断方法及治疗等角度对犬细小病毒病的病原学研究进行综述。     

犬场蚊子与犬细小病毒

２０００年４月，应用套式ＰＣＲ技术从犬场蚊子的血液样品检测出犬细小病毒。将分离到的犬细小病毒ＶＰ２－Ｙ３４基因片段克隆到ＰＭＤ１８－Ｔ载全，其病毒基因组ＣＰＶ－ＰＶ２－Ｙ３４序列测定结果显示与作者在ＧＥＮＥＢＡＮＫ发表的肺病变犬细小病毒ＣＰＶ－ＨＮ－１株有９９％同源性。