鸡白痢沙门菌研究进展

本文就鸡白痢沙门菌的基因组学、与鸡伤寒沙门菌的鉴别方法、感染与致病机制、防治措施等方面的研究进展进行总结,以期为相关研究提供参考。     

鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌PCR-RFLP鉴别

根据鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌flic基因可变区两端的保守序列设计1对引物,PCR扩增出约866 bp的产物,用HinplI对PCR产物进行酶切,经RFLP分析区分鸡白痢沙门菌和鸡伤寒沙门菌.利用该技术对1株鸡白痢沙门菌标准株及2株鸡伤寒沙门菌标准株进行分子鉴别,结果与预计的RFLP模式相符,证明该方法可行.在此基础上...     

鸡白痢沙门菌基因组差异片段的筛选与分析

采用抑制性消减杂交技术（SSH）对鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门菌Sg9株进行了基因组差异片段分析.结果,从C79-13株中共检出13个特异性差异片段.经同源分析,这些序列可分为3类：噬菌体相关序列、质粒相关序列和已知功能序列.这些差异片段包含一些重要的沙门菌毒力相关基因,如编码大肠杆菌素、IpaJ蛋白、尾突蛋白、切除酶的基因.结果表明,鸡白痢沙门菌C79-13株与鸡伤寒沙门茵Sg9株基因组问存在较多差异基因,这些差异片段为确定鸡白痢沙门菌特异性遗传标志,建立分子鉴别新体系提供了基础.     

肉鸡鸡白痢沙门菌的分离鉴定

2009年5月,北京郊区某肉鸡养殖户的2 000只7日龄雏鸡出现拉白色稀粪,肝脏有黄色结节等症状和病变的疾病。为探索该病病因及制定有效防治措施,对病鸡样品进行了细菌学检验。通过细菌分离、生化试验、PCR及16 S rRNA基因测序鉴定出1株鸡白痢沙门菌。该分离株感染试验鸡能复制出与其临床表现一致的病例并能引起死亡。表明鸡白痢沙门菌是危害北京郊区该养殖户肉鸡的病原。     

鸡白痢与鸡伤寒沙门菌双重PCR方法的建立和初步应用

分析不同血清型/生物型沙门菌全基因组序列筛选出鸡白痢和鸡伤寒沙门菌特异性基因组序列,设计两对引物,建立双重PCR方法鉴别检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌不同生物型,并进行初步的临床应用。双重PCR方法结果显示,鸡白痢沙门菌显示417 bp条带,鸡伤寒沙门菌显示417 bp和636 bp两个条带,而阴性对照未出现条带,与预期设计相符。双重PCR体系对56株不同血清型沙门菌鉴定结果与细菌学分离的血清型鉴定结果完全一致,说明本试验建立的双重PCR体系特异性良好,应用上述方法检测鸡场疑似20份临床样本,结果发现8株鸡白痢沙门菌阳性,1株鸡伤寒沙门菌阳性。上述结果表明,已建立双重PCR方法特异性检测鸡白痢和鸡伤寒沙门菌。本试验为鸡白痢和鸡伤寒不同生物型沙门菌的检测提供了一种简洁、敏感、特异的新方法。     

鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的验证

为验证鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性,本研究以3株鸡白痢、鸡伤寒沙门菌国际参考菌株和306株国内分离株为研究对象,采用5种已知的分子分型方法开展验证性实验。结果发现,基于特定基因可变区的2种分型方法具有良好的特异性,其检测结果与生化分型结果一致,而3种基于特定基因单核苷酸多态性的分型方法则出现假阳性或假阴性的结果。上述结果表明,鸡白痢、鸡伤寒沙门菌分子分型方法的准确性仍需进一步验证。     

鸡白痢沙门菌毒力蛋白SpiC与肝损伤关系

旨在研究毒力蛋白SpiC在雏鸡肝组织内的动态分布及与肝脏损伤的关系。选用3日龄SPF雏鸡为试验对象,分别感染2株鸡白痢沙门菌(Salmonella pullorum,S.pullorum),并分别命名为S0701和S0702株。在进行致死性感染试验和半数致死量的测定后,建立动物感染模型。取肝脏于4%多聚甲醛中固定,并进行HE染色和毒力蛋白SpiC免疫组织化学染色。结果表明毒力蛋白SpiC主要分布于肝组织的巨噬细胞,肝窦内皮细胞及坏死灶内;毒力较强的S0701株感染雏鸡后肝脏中毒力蛋白SpiC的表达量高于S0702株。结果说明毒力蛋白SpiC与肝组织的损伤有关;毒力蛋白SpiC表达量与组织的损伤程度呈正相关,同时SpiC蛋白的表达量与菌株的毒力强弱呈正相关。     

鸡白痢沙门菌的分离鉴定与耐药性分析

本研究采集某鸡场疑似感染鸡白痢的病死鸡组织,进行了沙门菌的分离、鉴定,以及对10种常见抗生素的药物敏感性试验.结果显示:分离株均为鸡白痢沙门菌,对阿米卡星(0％)、庆大霉素(0％)、头孢噻肟(3.70％)的耐药率较低,对链霉素(88.89％)、四环素(62.96％)、阿莫西林(51.85％)的耐药率较高;分离株至少可对...     

不同鸡种对鸡白痢沙门菌定植与免疫反应差异分析

试验对鸡白痢沙门菌在鸡肠道内定植及其对鸡免疫性能的影响进行探讨。选取狼山鸡、罗斯鸡各40只,分为攻毒组、空白组,攻毒组口服灌注0.5mL鸡白痢沙门菌(107cfu/mL),观察攻毒鸡群的发病状况,并采集盲肠内容物和血液分别进行菌落数和免疫指标的测定。结果发现,狼山鸡和罗斯鸡在肠道中的载菌量分别为4.94×107cfu/mL和5.18×107cfu/mL。免疫指标方面,狼山鸡中除IgM外,其余指标与空白组差异显著(P0.05),罗斯鸡中IgY、白细胞介素-1β与空白组差异显著(P0.05)。表明这2个鸡种对鸡白痢沙门菌均易感,但狼山鸡免疫反应优于罗斯鸡。     

鸡白痢沙门菌等位基因特异性PCR检测方法的建立

根据鸡白痢沙门菌与鸡伤寒沙门菌的rfbS基因在第237和第598位碱基的不同，设计和合成了等位基因特异性PCR引物，建立了快速检测鸡白痢沙门菌的PCR方法，并应用该方法对鸡白痢沙门菌临床分离样品进行了PCR鉴定。结果显示，该PCR方法能够特异性地鉴定鸡白痢沙门菌，检测灵敏度达100PgDNA。对35个经常规方法鉴定的鸡白痢沙门菌分离株应用等位基因特异性PCR方法进行鉴定，鉴定出33株鸡白痢沙门菌，符合率为94．3％。表明，建立的等位基因特异性PCR方法能够准确而快速地鉴定鸡白痢沙门菌。     

鸡白痢沙门氏菌脂多糖的保护性作用

用被动保护试验的方法,通过比较抗脂多糖（ＬＰＳ）血清组与ＬＰＳ中和抗鸡白痢血清组的ＬＤ５０,证明了ＬＰＳ的保护性作用。与攻菌对照组的ＬＤ５０相比,抗ＬＰＳ血清组有非常显著的差异（０．００２＞Ｐ＞０．００５）,ＬＰＳ中和抗鸡白痢血清组有显著差异（０．０２＞Ｐ＞０．０５）。试验证明,ＬＰＳ是鸡白痢沙门氏菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌａｐｕｌｏｒｕｍ）菌体主要的保护性抗原之一。     

Temporal changes in the population genetics of Salmonella pullorum

Salmonella pullorum is the cause of pullorum disease, which is characterized by white diarrhea and a high mortality rate in poultry. During the 1990s, the serologic "pullorum" test has occasionally failed to detect infected birds during the early stage of disease. To determine if any recent genetic changes have taken place in S. pullorum to account for poor seroconversion sometimes observed in infected flocks, S. pullorum from 1990s outbreaks and strains isolated prior to the 1980s were typed by random amplified polymorphic DNA (RAPD). Of 40 S. pullorum isolates typed by this method, eight distinct DNA patterns were identified with one of three RAPD polymerase chain reaction primers. Sixty-two percent of S. pullorum isolates shared the same RAPD DNA pattern, and a major proportion of these strains were from recent flock infections. The RAPD patterns for S. pullorum were clearly distinct from the avian Salmonella group B isolates included in this analysis. The distribution of Salmonella virulence genes among avian Salmonella isolates was also examined. Eighty-five percent of the S. pullorum isolates had both the virulence plasmid gene, spvB, and the invasion gene, invA, with the same percentage positive for the Salmonella enteriditis fimbrial gene, sef. However, significant variability was observed among S. pullorum in their ability to invade avian epithelial cells, despite the presence of the Salmonella invasion gene in these isolates.     

鸡白痢沙门氏菌Mini-Tn5转座子插入突变

将氯霉素（Cm）抗性基因克隆到pUTmini-Tn5Km2载体中,利用含卡那霉素（Km）和氯霉素（Cm）抗性基因的pUTmini-Tn5Km2（Cm）转座载体将Km和Cm抗性基因随机插入鸡白痢沙门氏菌基因组中,以相应的抗生素进行筛选,获得大量在不同位点插入突变的突变体,从中筛选鸡白痢沙门氏菌某功能缺陷型突变株。通过对突变株的基本特征以及PCR鉴定后,再进行插入基因定位。结果表明,Km和Cm抗性基因已成功转座至鸡白痢沙门氏菌基因组上;基因定位显示突变株均有且只有1个插入位点,插入位点的位置不尽相同。这为研究鸡白痢沙门氏菌功能基因和筛选特定突变株提供了必要的基础。