海带(Laminaria japonica Aresch)胚孢子萌发和配子体生长与光照波长间关系的研究

研究了紫外光和可见光谱内不同波长光及白光（全色光）与我国养殖海带（ＬａｍｉｎａｒｉａｊａｐｏｎｉｃａＡｒｅｓｃｈ）胚孢子萌发和配子体生长之间的关系,结果发现：不同波长光照（３００～７００ｎｍ）对海带胚孢子的萌发率、萌发管的生长及雌、雄配子体的生长均有显著影响,其影响特点是因个体生长发育时期的不同而有所不同。试验还表明,在海带配子体世代,细胞内光合色素的功能随着个体的生长发育渐趋完全。     

长心卡帕藻四分孢子发育成配子体的形态建成观察

2007年11月到2009年4月在海南黎安,以养殖多年的红褐色长心卡帕藻为材料,跟踪观察了四分孢子形成、释放、萌发以及配子体苗形态建成过程。结果表明,（1）该长心卡帕藻被确定为四分孢子体,四分孢子形成和释放主要发生在夏季和秋季（2008年4月到2008年10月）。（2）人工诱导可促使四分孢子萌发并形成胚苗,胚苗色泽出现明显分化,有红褐色、黄绿色、深绿色、黄绿—红嵌合等不同类型。（3）四分孢子萌发率达到87.1%±7.2%,培养皿内胚苗平均日生长率为（6.3±1.1） %/d,在四分孢子萌发10 d左右假根出现并于培养30 d左右消失。（4）胚苗经过约5个月实验室培养发育成的配子体苗达到了下海挂养程度大小,在海上培养初期配子体苗日生长率大多在10 %/d以上,最高可达21.2 %/d,但随着藻体长大生长速率逐渐下降。经过4个多月海上挂养栽培,获得了藻枝形态、粗细、疏密程度和生长速率等差异明显的多种配子体,部分配子体活力和抗逆性比其母本有显著增加。     

不同种类冷冻保护剂对海带配子体及孢子的毒性评价

为筛选用于海带超低温保存的冷冻保护剂，采用10%二甲基亚砜(DMSO)、10%甘油、10%蔗糖、10%乙二醇、10%DMSO+10%甘油、10%DMSO+8%葡萄糖、10%DMSO+10%蔗糖、10%DMSO+10%甘油+8%葡萄糖、10%DMSO+10%山梨醇等9种单一或复合冷冻保护剂，在0～4℃条件下分别对海带配子体和孢子进行处理，对配子体处理30 min、60 min、24 h,对孢子处理15、30、60 min,通过统计配子体细胞的存活率以及孢子萌发成配子体的比例，对不同种类的冷冻保护剂进行毒性评价。结果表明：9种冷冻保护剂均对海带配子体和孢子有一定的毒性作用，并且毒性随着处理时间的延长而增强。10%DMSO对海带配子体细胞的毒性最小，处理60 min后配子体细胞的存活率为100%;其次是10%乙二醇，处理30 min后配子体的存活率为100%;含10%甘油的单一或复合冷冻保护剂对配子体细胞毒性较大，处理后配子体的成活率显著低于DMSO和乙二醇组(P<0.05)。单一冷冻保护剂对海带孢子的毒性显著低于复合冷冻保护剂，除10%甘油组处理30、60 min外，其他单一冷冻保护...     

海水不同消毒方式对海带配子体克隆生长发育的影响

通过5种海水不同消毒方式对海带配子体克隆生长发育进行试验,结果表明:无论是静置还是充气条件下,煮沸海水培养的配子体克隆生长最快,盐酸消毒的海水次之,次氯酸钠消毒海水最差,紫外线消毒和臭氧介于其间。煮沸和紫外线消毒海水中的海带配子体克隆发育率较高,2者非常接近,盐酸消毒和臭氧消毒海水中的海带配子体克隆发育也较高,而次氯酸钠消毒海水中的海带配子体克隆发育非常缓慢。试验证明除煮沸消毒外,盐酸消毒海水可以用于海带配子体克隆扩大培养。     

光照强度对海带配子体克隆生长的影响

本试验研究了在充气悬浮培养及静置培养条件下，不同光照强度对海带配子体克隆生长的影响。结果表明：在4500lx光照强度、充气悬浮培养条件下，海带配子体克隆具有较高的瞬时生长率。     

盐度对笼目海带配子体生长发育的影响

通过设置培养液的不同盐度,在实验室条件下检验了笼目海带(Saccharina sculpera)在不同盐度的培养液中配子体生长发育情况。结果显示,在盐度20～30的条件下,笼目海带配子体大部分(60%～80%)进入了生殖生长状态,且其中50%以上为多细胞孢子体；在盐度35的条件下,大部分(80%～90%)笼目海带配子体维持在营养生长状态,虽然有小部分(7.30%)配子体进入了生殖生长状态,但生殖生长明显滞后于盐度20～30处理组。在盐度为40和45的培养条件下,所有海带配子体维持在营养生长状态。根据试验结果,建议将笼目海带配子体育苗的盐度保持在20～30。     

温度和时间对海带(Saccharina japonica)孢子囊孢子放散及后期生长发育的影响

为了能够节约制冷成本,合理延长种海带在海上的预留时间,系统研究了不同温度(20、21、22、23、24℃)和培养时间(4、8、12、16d)对两个海带品系(“205”和“C033”)孢子放散能力及胚孢子萌发率、受精率、雌配子体发育和幼孢子体生长的影响.结果显示,当海水温度达到24℃时,孢子囊几乎丧失了放散能力,20-23℃的游孢子放散量差别不显著.在相同温度下,孢子囊培养时间为12、16d的胚孢子萌发率大于4、8d;同时,孢子囊培养16d的雌配子体和幼孢子体具有最小值.在相同培养时间下,23℃(或24℃)的雌配子体和幼孢子体远远小于20-22℃的.相关性分析表明,海带雌配子体大小与幼孢子体大小具有显著正相关性(P＜0.01).结果显示,当温度达到23℃或培养时间达到16d时,海带孢子囊受到了胁迫,不利于雌配子体的发育和幼孢子体的生长.温度对孢子囊的作用更迅速,而时间对孢子囊的作用较为缓慢,可能是一种累积效应.     

温度和时间对海带(Saccharina japonica)孢子囊孢子放散及后期生长发育的影响

为了能够节约制冷成本,合理延长种海带在海上的预留时间,系统研究了不同温度(20、21、22、23、24℃)和培养时间(4、8、12、16 d)对两个海带品系("205"和"C033")孢子放散能力及胚孢子萌发率、受精率、雌配子体发育和幼孢子体生长的影响。结果显示,当海水温度达到24℃时,孢子囊几乎丧失了放散能力,20–23℃的游孢子放散量差别不显著。在相同温度下,孢子囊培养时间为12、16 d的胚孢子萌发率大于4、8 d;同时,孢子囊培养16 d的雌配子体和幼孢子体具有最小值。在相同培养时间下,23℃(或24℃)的雌配子体和幼孢子体远远小于20–22℃的。相关性分析表明,海带雌配子体大小与幼孢子体大小具有显著正相关性(P0.01)。结果显示,当温度达到23℃或培养时间达到16 d时,海带孢子囊受到了胁迫,不利于雌配子体的发育和幼孢子体的生长。温度对孢子囊的作用更迅速,而时间对孢子囊的作用较为缓慢,可能是一种累积效应。     

温度与照度对利尻海带配子体及幼孢子体的影响

利尻海带（LochotensisMiyabe）具有个体大、生长速度快、品质优良的特点,因此本实验主要进行了此种海带的室内培养,采用切碎的方法研究了不同温度、照度的相互作用对利夙海带配子体的生长、成熟及幼抱子体生长的影响,并取得了一定的结果。现报告如下：一、材料与方法1．材料利夙海带的配子体是直接从日本引进的,雌雄配子体分别装入三角烧瓶中,放于20CC恒温培养箱内保存,照度5（Xk－x000ltl,光照时间12h／d。所用培养液为自然海水经沉淀、砂滤再经玻璃丝2次过滤后,加入营养盐N8N03母液,N。HzPO‘母液,微量元素PI溶液各lffe…     

铁离子对海带配子体克隆系生长发育的影响

为了探究Fe³⁺在不同氮、磷条件下对海带（）配子体生长发育的影响,以海带''黄官1号''雌、雄配子体克隆系为材料,以含有不同浓度的氮（N）、磷（P）营养盐的灭菌海水为培养液,添加不同浓度（0μmol/L、0.36 μmol/L、3.60 μmol/L、8.90 μmol/L、17.80 μmol/L）的铁离子（Fe³⁺）,通过测定光系统Ⅱ的最大荧光产量（）观察配子体营养生长状况,通过计算发育率（包括卵囊形成率、排卵率、幼苗形成率）观测配子体发育与生殖状况。结果显示,N、P浓度分别为0.825 mmol/L、0.0336 mmol/L的条件下,浓度为3.60 μmol/L的Fe³⁺对海带配子体营养生长阶段的促进作用最大;在不同N、P浓度条件下,Fe³⁺浓度为3.60~17.80 μmol/L时能够提高海带配子体的最大荧光产量,且各浓度组之间没有显著性差异（3+能够促进海带配子体由营养生长转向生殖生长,Fe³⁺浓度为3.60~17.80 μmol/L时可显著促进海带配子体的生殖生长,且各浓度组之间没有显著性差异（>0.05）;即使N、P浓度达到0.825 mmol/L、0.0336 mmol/L,在无铁条件下所有的海带配子体维持在营养生长状态;即使Fe³⁺浓度达到3.60 μmol/L,在N、P浓度0.007 mmol/L、0.0003 mmol/L条件下,大部分海带配子体（65%）维持在营养生长状态,虽然小部分海带配子体（35%）进入了生殖生长状态,但生殖生长明显滞后于实验中的其他各个N、P浓度组。本研究表明,铁和N、P营养盐对海带配子体的营养生长和生殖生长具有协同促进作用,铁是海带配子体由营养生长到发育成熟再到有性生殖过程中的关键因素;在添加适宜浓度的氮（0.275 mmol/L）、磷营养盐（0.0112 mmol/L）条件下,浓度为3.60 μmol/L的Fe³⁺对海带配子体的生长发育促进作用最大。该结果可为提高海带育苗效率提供理论依据。     

裙带菜配子体无菌培育消毒方法的研究

为了寻找裙带菜配子体无菌培育试验中对带有成熟孢子囊的裙带菜种带的最佳消毒方法,使用双抗海水(含120mg/L青霉素+100mg/L链霉素)、1.5%碘化钾、4%NaClO,这3种消毒剂及其不同的时间组合,试验对裙带菜种带块的消毒效果及胚孢子的萌发率。结果弄明,最有效的消毒方案为:常规擦洗后,无菌海水冲洗一次,再用双抗海水浸泡20min,然后用1.5%浓度的碘化钾海水溶液浸泡10min,最后用无菌海水浸泡10min,这种消毒效果最佳,且不影响胚孢子的萌发率。     

温度对“901”海带配子体克隆生长的影响

温度是影响“901”海带配子体克隆生长最重要的环境因子之一。试验结果表明，在15％条件下，配子体克隆的生长速度最快，其致死温度为25℃。在相同的环境条件下，细胞数基本相同的雌、雄配子体克隆的生长速度相近。     

不同培养与操作条件对海带配子体培养效果的影响

本文研究了不同培养操作条件对海带配子体培养效果的影响,结果如下:(1)培养瓶3种封口方式:封口膜(Parafilm)显著抑制配子体生长(P0.05),滤纸和滤纸膜无显著差异;(2)利用5种不同消毒方式处理的海水配制培养液:煮沸海水和抽滤煮沸海水试验组海带配子体团直径最大,两者之间差异不显著。抽滤煮沸双抗(青霉素+链霉素)海水、抽滤生海水和抽滤双抗生海水配子体团直径三者之间无显著差异,但均显著小于煮沸海水和抽滤煮沸海水试验组(P0.05),抽滤生海水和抽滤双抗生海水试验组出现明显染菌;(3)设置2种不同的环境条件放置培养箱:常规实验室和无菌室对海带配子体生长无显著影响;(4)设置3种操作环境下进行培养液更换:在无菌室超净台和常规实验室超净台更换培养液,海带配子体生长无显著差异,无染菌。在常规实验室实验台更换培养液试验组配子体生长显著低于无菌室超净台和常规实验室超净台试验组(P0.05),且染菌率超过60%。     

利用深井海水进行海带配子体克隆育苗试验

以海带配子体克隆为试验对象,研究了深井海水对海带配子体克隆生长、发育的影响,并利用深井海水进行了克隆育苗试验.试验结果表明,利用深井海水培养海带配子体克隆,配子体生长速度较自然海水稍慢,但深井海水可促进配子体发育,加快孢子体的形成,缩短育苗时间,而且利用深井海水进行克隆育苗可取得较好效果.综合考虑克隆培养效果及降低育苗成本,克隆育苗可采取自然海水与深井海水交替使用的模式进行.     

4-碘苯氧乙酸在海带夏苗培育中的应用

本文报道了4-碘苯氧乙酸(4-IPOAA)在海带夏苗培育中应用的试验结果。4-IPOAA对海带配子体和幼孢子体的生长发育有着明显的影响，高剂量的4-IPOAA(500mg／L)对配子体的发育有明显的抑制作用；解除4-IPOAA对配子体的抑制，配子体在短期内即能正常排卵、排精并受精形成孢子体；低浓度的4-IPOAA（25mg／L以下)能促进幼孢子体的生长。这项试验结果表明，有可能利用4-IPOAA对配子体的抑制特性，来改进目前所采用的低温、自然光条件下培育海带夏苗的工艺。作者建议把海带夏苗培育工艺改为以下步骤：(1)在常温下采苗；(2)在18℃以下水温条件下培育配子体；(3)在配子体成熟前用4-IPOAA处理，使其停止发育，在较高水温(20℃左右)条件下静水培养被抑制的配子体；(4)在计划夏苗出库前40—50天，解除4-IPOAA对配子体的抑制，恢复最适条件下流水培育；(5)肉眼见苗后及时下海暂养。     

海带种质固相保存技术

将海带种质的无菌采集与配子体固相保存相结合,对种海带的处理、游孢子的采集、配子体的分离与固相接种等关键步骤进行了研究和改进,建立了一种高效的海带配子体固相保存方法,此方法从源头降低了细菌的污染,减少了配子体保存过程中污染细菌的机会,简化了常规固相保存的菌处理流程,提高了保种效率,有利于固相保存方法的大规模应用。     

生态因子对萱藻生长发育影响的研究现状及展望

主要阐述了国内外有关于生态因子对萱藻(Scytosiphon lomentaria)生长发育影响的研究现状,并对有关于萱藻的进一步研究提出了展望。温度、光照、盐度、营养液及抗生素等生态因子均会对萱藻生长发育造成不同程度的影响,温度和光照变化对萱藻生长发育的影响最为明显。萱藻配子体阶段的适宜温度较低,为6～12℃,而孢子体阶段在5～23℃范围内均可生长,生长速度随温度上升而增加;萱藻不同生长阶段的最适光照强度也有所不同,萱藻配子体阶段的最适光照范围为36～54μmol·m^-2·s^-1,较低光强6～30μmol·m^-2·s^-1是萱藻孢子体生长发育的适宜范围,而高光强54μmol·m^-2·s^-1有利于萱藻孢子的附着;盐度、pH对萱藻生长发育影响显著,过高或过低均不利于萱藻生长;不同营养盐、维生素及抗生素对萱藻的生长发育产生的影响不同,在萱藻不同的生长阶段,应根据生长状况及时给予适宜浓度的营养盐或药物添加剂以促进萱藻生长。     

不同封口方式对901杂交海带♂配子体的影响

传统的海带配子体种质资源保存是用锥形瓶保存,纸盖封口,但由于近些年来污染比较严重,所保存的海带配子体附着大量的细菌和各种杂藻,对克隆生长有很大的影响。为了更有效地保存海带种质资源,我们实验了三种不同的封口方式进行培养,探求其对克隆生长状态的影响。结果证明,最有效的封口方式为:滤纸膜的封口方式,不论是对配子体细胞状态,还是对克隆增殖都要好于其它方式。     

不同pH和培养方式对海带配子体生长发育的影响

为了解决海带配子体人工高密度培养过程中因海水中游离CO₂减少及pH升高而导致生长受限的问题,本研究以海带’奔牛’(Sacchatina japonica)雌雄配子体为材料,以不用pH的富营养灭菌海水(10 mg/L N,1 mg/L P)为培养液,通过测量配子体长度,计算相对生长率,比较不同pH对配子体生长的影响,结果显示,pH(P<0.001)、性别(P=0.016<0.05)对海带’奔牛’配子体生长有显著影响,长期处在pH<7培养条件下的雌雄配子体相对生长率显著低于其他2组,雌配子体的相对生长率(4.61%)显著高于雄配子体(3.35%)。初始pH为7.0的处理组与对照组相比,雌雄配子体的相对生长率均无显著差异(P>0.05)。在此基础上,采用在通空气悬浮培养同时补充CO₂的方式进行配子体扩增培养,利用纯CO₂压力罐(出气量120 L/h),15 L培养液每2d补充CO₂ 1～2 min,培养液pH范围即可控制在7.0～8.4,以此排除pH对配子体生长不利影响,并避免频繁...     

褐藻酸降解菌对海带配子体克隆的作用及其药物防治研究

通过回染实验，确认褐藻酸降解菌是海带配子体克隆病害的主要致病菌；观察了对其海带配子体克隆细胞侵染的现象，并研究了抗生素对海带配子体克隆细胞和褐藻酸降解菌的作用，发现0．5－100mg/L青霉素对配子体克隆细胞的生长有一定促进作用，实验范围内各浓度青霉素对褐藻酸降解菌均有较好的抑菌效果，且抑菌效果随浓度的提高而加强。其中100mg/L青霉素10d内可将褐藻酸降解菌浓度降低到初始浓度的1／20以下，可作为海带配子体克隆保存中有效的抑菌药物。