牛源非结核分支杆菌血清型的初步鉴定

为了解近年来长春地区非结核分支杆菌血清型流行情况,及时掌握本地区的优势血清型,以利于疫苗株的选择和免疫程序的制定,更好地控制由非结构分支杆菌引起疾病的发生和流行.对从长春地区屠宰牛的颌下淋巴结和肠系膜淋巴结中分离得12株非结核分支杆菌制备抗血清,通过Schaefer的凝集反应和凝集素吸收试验,初步将其分为5种血清型.     

3种分支杆菌多重PCR快速检测方法的建立

本试验旨在构建一种以不同分支杆菌特异片段为目的基因的多重PCR检测方法。采用GenBank公布的结核分支杆菌RD10序列、牛分支杆菌moaB3序列、鸟分支杆菌16-23SrDNA序列设计并合成特异性引物,扩增产物条带分别为954bp、297bp、119bp。结果显示,三段目的基因都有很高的特异性,对比菌株均无扩增产物出现。对倍比稀释的模板质粒进行检测,该方法的最低检出量为103 copies/μL的DNA模板,该方法特异、敏感、重复性好。首次应用的moaB3基因所得扩增效果良好,成功区分出牛分支杆菌。此多重PCR方法可用于结核分支杆菌、牛分支杆菌、鸟分支杆菌的鉴别和牛结核病的快速临床检测。     

γ干扰素在非结核分支杆菌感染中的作用研究进展

非结核分支杆菌是指除结核分支杆菌复合群与麻风分支杆菌以外的其他分支杆菌。非结核分支杆菌广泛分布在土壤、水和自然环境中,研究人员发现非结核分支杆菌能够严重危害人类的健康。IFN-γ是一种具有免疫调节、抗肿瘤等作用的细胞因子,在非结核分支杆菌感染过程中起着重要的作用。论文就IFN-γ在非结核分支杆菌感染中起到的作用做一综述。     

牛分支杆菌主要保护性抗原研究进展

牛结核病是一种人兽共患病,是世界动物卫生组织(OIE)列为必须上报的传染病,主要由牛分支杆菌引起,其蛋白可以诱导动物机体产生相应抗体.这些蛋白可以用来诊断结核病,对新型疫苗的研制也具有重要意义.因此,这些蛋白一直是分子生物学研究领域中的热点.论文就牛分支杆菌主要保护性抗原的特性及其在诊断中的应用进行了综述.     

牛分枝杆菌主要分泌蛋白的研究进展

牛结核病主要是由牛分枝杆菌(Mycobacteriumbovis,MTB)引起的一种人兽共患传染病,国际兽疫局(OIE)将其列为B类动物传染病,在我国被列为二类动物疫病。目前,全球有5 000万头以上的牛患有牛结核病,每年造成大约30亿美元的经济损失。牛结核病的传播与流行不仅影响了养牛业的持续健康发展,而且严重威胁到食品安全和人类健康。目前,全     

牛分支杆菌MPT83基因的表达及重组蛋白的纯化

从牛分支杆菌培养物中抽提总DNA，扩增了MPT83基因，并克隆入pMD-18-T Simple Vector，将测序正确的目的基因插入表达载体pET-32a（＋）中，转化BL21（DE3）宿主菌，IPTG诱导表达，用亲和层析方法对表达蛋白进行了纯化。经测序，构建的克隆质粒pMD-MPT83与Gen-Bank中的序列一致；构建的表达质粒pET-MPT83经PCR和BamHI＋HindⅢ双酶切鉴定构建正确；经SDS-PAGE分析，在约42ku处出现新的蛋白条带，4h后表达量即达到高峰；Westernblotting分析表明，融合蛋白能够被牛分支杆菌阳性血清所识别；纯化的表达蛋白经SDS-PAGE电泳，出现清晰的单一条带。表明MPT83基因原核表达载体构建成功。     

结核分支杆菌核酸适配体研究进展

结核分支杆菌（MTB）是引起多种宿主感染结核病的重要病原菌,由于结核分支杆菌耐药菌株的产生,导致结核病在世界范围内呈高发趋势。由于 MTB 检出率较低,开发一种简单快速的诊断方法迫在眉睫。指数富集配体系统进化技术（SELEX）的原理是从随机寡核苷酸文库中筛选到能特异性结合靶物质的寡核苷酸配体（称为适配体）。论文对近几年国内外通过 SELEX 技术对结核分支杆菌筛选出的适配体做一综述,适配体的靶物质分别为分泌蛋白 MPT64,CFP10-ESAT6蛋白,多磷酸激酶2（PPK2）以及结核分支杆菌（H37Rv 株）整个菌体。体外筛选的结核分支杆菌适配体,能对结核病做出早期诊断,并能作为 MTB疫苗的免疫佐剂,在临床诊断及药物研究等方面有很大应用前景。     

结核分支杆菌重组活疫苗研究进展

结核分支杆菌(MTB)引起的结核病 是一种人兽共患的慢性传染病,短程督导化 疗是治疗该病的主要措施,卡介苗是预防该 病的惟一疫苗,但其免疫效果极不稳定。分 子生物学技术的发展为研制新型MTB疫苗 提供了理想方法,人们利用鼠伤寒沙门氏菌 (Salmonellatyphimurium,St)减毒株作为 载体,将编码MTB保护性抗原的基因导入其 中,可构建重组St疫苗,如rSt Ag85B疫苗 和rSt ESAT 6疫苗;将编码MTB保护性抗 原的基因导入小鼠巨噬细胞或骨髓细胞可构 建MTB活细胞疫苗,如J774 HSP65疫苗和 BMC HSP65疫苗;利用基因诱变可构建 MTB减毒活疫苗,如MTB嘌呤营养缺陷株, ICL基因剔除株,VitB5营养缺陷株和十一萜 醇激酶基因变异株。文章介绍了结核分支杆 菌重组鼠伤寒沙门氏菌疫苗,活细胞疫苗和 减毒活疫苗的构建及其免疫机制等方面的研 究进展。     

结核分支杆菌耐药机制的研究

结核分支杆菌（结核杆菌,Mycobacterium TuberculoSiS,M．TB）已经对多种药物产生耐药性,使得对结核病的治疗无效或者疗效降低,导致近年来结核病的发病率呈上升趋势。本文综述了结合分支杆菌对几种药物产生的耐药性的机理。     

牛结核病病原体研究进展

牛结核病是一种人畜共患传染病,人畜结核病的交叉传播是造成结核病广泛流行的重要原因之一。本病的传播流行直接影响着畜收业的发展,而且还会通过各种途径传染给人,给人类的健康也带来很大威胁。作者对结核病病原体的特点及分类进行了概述,并主要对牛分枝杆菌和结核分枝杆菌进行了基因组比较以及它们之间的区分和鉴定进行了综述。     

牛结核病诊断方法研究进展

牛结核病主要是由牛分支杆菌引起的一种人兽共患传染病,近年来发病率有所上升,给奶牛养殖业造成了巨大的危害。目前,牛结核病的诊断仍然以传统的迟发性变态反应试验为主,其他诊断方法有根据临床症状和病理变化诊断、抗酸染色法、细菌分离培养法、PCR法、血清学方法、淋巴细胞转化试验、γ-干扰素试验和菌体成分检测法等。为了净化该病,必须提高诊断方法的敏感性和特异性。文章对这些诊断方法及其优缺点做了概述,并指出结核病普查检测时,比较合理的诊断方式是迟发性变态反应试验和间接ELISA法同时运用。     

Individual animals of a cattle herd infected with the same Mycobacterium bovis genotype shows important variations in bacteriological, histopathological and immune response parameters

Cattle are the host and main reservoir of the etiologic agent of bovine tuberculosis, Mycobacterium bovis; although other mammalian species, including humans, are susceptible. The tuberculin test and/or slaughterhouse surveillance is the diagnostic method used by control programs all around the world to control and eradicate the disease. In order to compare different tuberculosis diagnostic tests and to reach disease confirmation, a study was performed in a group of 14 steers of Friesian breed, reacting positively to tuberculin test. Three ante-mortem assays were performed according to the type of sample: the gamma interferon (IFN-gamma) test (which quantifies the release of this cytokine by sensitized lymphocytes in whole blood in response to purified protein derivative (PPD) and recombinant ESAT-6 and CFP10 proteins); PCR and bacteriologic culture from nasal swab and intradermal tuberculin test. These assays were taken at different times to assess the evolution of clinical parameters. Post-mortem examination showed macroscopic and microscopic tuberculosis lesions with acid-fast bacillus and positive cultures. By spoligotyping, we observed that all the isolates showed the same pattern. The positive results based on comparison to lesions observed ranged from 58% to 75% for the IFN-gamma assays, to 72% for cultures, and ranged from 50% to 90% for PCR in nasal swabs. In conclusion, in a herd infected by the same strain, ante-mortem direct and immune-diagnostic parameters change, suggesting that several tests are needed for a faster control of infection at herd level.     

牛结核病新型疫苗的研究现状

在过去的20年里,人们应用分子生物学技术来研制更为有效的结核病疫苗,新型候选疫苗大量涌现。这些新型疫苗主要包括减毒活疫苗、重组活疫苗、亚单位疫苗和核酸疫苗。对防制牛结核病的各种新型疫苗也进行了相应的研究,并取得了令人振奋的进展。各种新型疫苗各有优缺点。目前看来,重组卡介苗和DNA疫苗被认为是最有前途的候选疫苗。但是,所有候选疫苗共同的也是致命的缺点是免疫保护力低。因此,牛结核病疫苗研制的主要努力方向还是在研究分支杆菌免疫机制和免疫失败原因的基础上,进一步增强现有候选疫苗的免疫效力或研制更为有效的新型疫苗。     

牛支原体生物学特性及其膜蛋白的研究进展

牛支原体(Mycoplasma bovis,Mb)是引起牛肺炎、关节炎、乳房炎和中耳炎等众多疾病的主要病原之一,牛支原体引起的疾病在欧美地区广泛蔓延并造成巨大的经济损失。中国2008年首次报道在犊牛肺炎中分离到牛支原体,目前国内对牛支原体的认识还很欠缺,现对牛支原体生物学特性及其膜蛋白进行简要综述,以期为牛支原体病的防控与治疗提供一定的参考依据。     

利用原位杂交技术检测新疆牛结核病标本中结核菌的研究

采用原位杂交技术将地高辛标记的牛结核杆菌特异性探针即２４８ｂｐ基因片段用于检测１０份患病牛肺病变组织福尔马林固定切片标本。结果表明：基因探针原位杂交技术对切片标本的检出率较常规涂片染色高,分别为８０％和５０％,其定位观察到组织切片中的结核杆菌,又能获得有关细菌及其周围组织的原有位置关系,是一种敏感、特异的诊断方法,适应于固定标本、涂片标本的结核菌检测。     

分枝杆菌分型三重PCR检测方法的建立及应用

本研究旨在建立一种快速鉴定分枝杆菌的三重PCR方法,并比较分析其在临床检测中的可靠性。根据已发表的结核分枝杆菌、牛分枝杆菌和非洲分枝杆菌rv 3036c基因,结核分枝杆菌rv 1970f基因(RD7)和牛分枝杆菌pncA基因的序列,改造并设计合成了3对特异性扩增引物,建立了一种能对分枝杆菌样品进行初步鉴定的三重PCR方法。结果显示该方法可针对rv 3036c、rv 1970f和pncA基因分别扩增出大小为500、125和249 bp的目的片段,能特异性检测出结核分枝杆菌(500和125 bp两条带)和牛分枝杆菌(500和249 bp两条带),并可将结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与其他分枝杆菌加以区分。本方法的检测灵敏度为50 pg/μL模板基因组DNA。对86株抗酸染色阳性菌进行三重PCR鉴定,鉴定结果与细菌16S rDNA和ITS序列测定结果一致,检测准确度为100%,优于生长特征和生化试验鉴定。     

结核杆菌多位点环介导等温扩增检测方法的建立

为建立一种快速、高敏感、高特异、鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的方法,本研究根据大多数致病性结核分枝杆菌共有序列esat-6,结核分枝杆菌和牛分枝杆菌gyrB共有特异性序列,以及结核分枝杆菌种特异序列mtp40设计6对特异性引物对痰液中的结核分枝杆菌进行检测,并与鉴别培养基分离培养结果以及常规PCR鉴定结果进行比较。实验结果表明,建立的LAMP检测方法具有很高的特异性。可区分致病性结核分枝杆菌和非致病结核分枝杆菌,也可鉴别结核分枝杆菌和牛分枝杆菌。LAMP检测技术的灵敏度比经典PCR技术高100倍左右,可检测到7拷贝/反应。另外,用3种方法同时检测样品发现,LAMP与细菌培养的符合率为90.91%,LAMP与常规PCR检测结果的符合率为100%。LAMP检测方法可以在流行病学调查及现场快速诊断方面广泛应用,并为临床治疗提供依据。     

Establishment and Application of Mycobacterium Typing Triple PCR Detection Method

This study was aimed to establish a triple PCR method to rapidly identify Mycobacterium species, and evaluate its testing reliability.Three pairs of primer that were respectively specific to rv 3036c, rv 1970f and pncA genes of Mycobacterium were designed to establish a triple PCR for preliminary identification of Mycobacterium tuberculosis(M.tuberculosis), Mycobacterium bovis(M.bovis) and other Mycobacterium spp.PCR products were the expected sizes of 500(rv3036c), 125(rv1970f) and 249 bp(pncA), and contained two DNA bands(500 and 125 bp) with M.tuberculosis DNA template, two DNA bands(500 and 249 bp) with M.bovis DNA template.No band or non-specific band appeared with Mycobacterium spp.except M.tuberculosis and M.bovis DNA templates.The sensitivity of the triple PCR was calculated to 50 pg/μL template of genomic DNA.86 acid-fast bacteria were detected by the triple PCR, 16S rDNA and ITS gene sequencing, growth test and biochemical test, and the results were consistent between triple PCR and 16S rDNA and ITS gene sequencing.The detecting accuracy of triple PCR was 100%, and higher than growth test and biochemical test.