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1.
参照澳大利亚鸡传染性法氏囊病病毒( I B D V)00273 毒株基因组序列设计的 1 对引物,位于 V P2 高可变区两端,通过 R T P C R,扩增了 5 个 I B D V 山东分离株 V P2 基因的 607~1 080 位核苷酸片段(aa203~306)。 P C R 产物经纯化后,分别用 Dra Ⅰ、 Sac Ⅰ、 Ssp Ⅰ、 Pst Ⅰ和 Sau3 A I共 5 种限制性内切酶( R E)进行消化处理,结果 5 个分离株均为 Dra Ⅰ(- )、 Sac Ⅰ(- )和 Sau 3 A I(+ ), L C2 和 T A 株为 Ssp Ⅰ(+ ), L C1 和 J N 株为 Ssp Ⅰ(- ), L C1 和 L C2 株为 Pst Ⅰ(+ ), J N、 L L 和 T A 株为 Pst Ⅰ(- );5 个分离株的酶切图谱与美国变异株迥异,而 T A 株与日本超强毒株 9011 相类似。5 个分离株与现用疫苗株对比,至少在 V P2 可变区内存在着一定的差异,这可能是 I B D V 接种免疫鸡群仍然暴发 I B D 的原因之一。  相似文献   

2.
伪狂犬病病毒鄂A株TK基因的克隆及其鉴定   总被引:6,自引:0,他引:6  
合成了 1 对能对伪狂犬病病毒( Pseudorabies virus, P R V) T K(thym idine kinase)基因+ 119~+ 1 071区进行特异扩增的引物,用猪 P R V 鄂 A 株细胞培养物提取的基因组作模板,扩增出 953 bp 长的片段,用地高辛标记该片段作探针,通过 South ern 杂交,从克隆有 P R V 鄂 A 株的 Bam H I片段的重组质粒中钓出含 T K 基因的重组质粒 p S T K。对 p S T K 进行酶切分析,绘制了含 T K 基因的 Bam H I片段的图谱,通过测序得出了 T K 基因的全序列。将该序列与 P R V N I A3 株 T K 基因进行比较,发现鄂 A 株的 T K 基因存在变异。  相似文献   

3.
实验研究了1日龄SPF雏鸡感染网状内皮组织增殖病病毒(Reticuloendotheliosisvirus,REV)后免疫器官匀浆涂片的免疫学变化。结果发现,雏鸡感染REV后其免疫器官法氏囊、胸腺、脾脏中淋巴细胞数、酯酶阳性(ANAE+)T细胞数以及颗粒型和弥散型ANAE+T淋巴细胞数显著降低(P<0.05,P<0.01)。表明1日龄SPF雏鸡感染REV后,其中枢免疫器官和外周免疫器官的细胞免疫呈现抑制。  相似文献   

4.
鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的高效表达   总被引:8,自引:1,他引:7  
将鸡传染性支气管炎病毒( I B V) S1 基因 c D N A 克隆至含有起始密码 A T G 的转移载体 p S X I V V I+ X3/4,构建成重组转移质粒 p S X I V V I+ X3/4 S1. Holte,再与粉纹夜蛾核型多角体病毒 Tn N P V S V I- G D N A( O C C- , gal+ )共转染 草地夜蛾( Sf9) 细胞, 经空斑纯化得 到已插入 S1 基 因并能形成多角体 的重组病毒 Tn N P V( X3/4) S1. Holte O C C+ 。以重组毒株感染 Tn5 B1 细胞,在不同时间收取感染了病毒的细胞进行 S D S P A G E 与 W estern 印迹检测。 Tn N P V( X3/4) S1. Holte O C C+ 在感染的细胞中高效表达了 S1 基因,表达产物为约 100 000 的融合蛋白,与预计的表达修饰后的产物大小相符,推测此蛋白已糖基化。 S D S P A G E凝胶薄层色谱分析结果显示,感染病毒后 48、72、96 h, S1 蛋白分别占细胞内总蛋白量的 287% 、358% 、371% 。  相似文献   

5.
红三叶组织培养及再生植株   总被引:9,自引:2,他引:7  
孟玉玲  韩榕 《草业学报》1994,3(2):51-54
本文采用MS,B5和PC一L2作为基本培养基,在不同激素组合条件下对红三叶(Trifoliumpratense)子叶及下胚轴进行组织培养。在MS,B5和PC一L2附加2mg/L2,4-D和0.5mg/LBA的培养基上,子叶及下胚轴愈伤组织诱导率均在89%以上。愈伤组织继代在B5无机盐十三倍MS有机成分+3%蔗糖+0.5mg/L2,4-D+0.5mg/L6BA0.2mg/LNAA,+10mg/LVc的培养基上生长良好。愈伤组织在B5附加0.1mg/L6BA+0.2mg/LIBA的培养基上再生植株。下胚轴在MS附加2mg/L6BA+1mg/LNAA的培养基上直接分化形成丛生苗,转入无激素NS培养基上再生根。实验表明VE,Vc,PVP和活性碳对愈伤组织褐化有抑制作用,10mg/LVc抗褐化作用最好。  相似文献   

6.
猪核移植重组胚胎的发育能力   总被引:1,自引:0,他引:1  
以McGrath-Solter(1983)提供的去(注)核方法,将猪胚胎的单个卵裂球细胞注入去核的次级成熟卵母细胞,借助电融合的方法(AC;5V,1.5MHz,12-15s;DC:2kV/cm,40μs。电激活/融合液:0.3mol/L甘露醇+-.1mmol/LMgSO4+0.1mmolCacL2+7.5mg/mlCCB)融入受体胞质构成重级胚,体外培养(培养液为改衣TCM-199;培养条件为5%  相似文献   

7.
1993年农业部批准的国家级新兽药(三)复合亚氯酸钠(达奥赛)FuheyaLusuannaNATRIICHLORITUMCOMPOSITA本品含二氧化氯(ClO2)应为22.5~27.5%(W/W);含活化剂以盐酸(HCl)计不得少于17.0%(g/...  相似文献   

8.
以中国优良品系E 126假俭草的侧芽为外植体建立高效的再生体系。试验结果显示,1)适宜于侧芽生长的培养基为MS+BAP2.0mg/L+NAA0.8 mg/L;2)在最佳诱导培养基MS+2,4 D1.0 mg/L+BAP0.1 mg/L上,侧芽愈伤诱导率达93%。较强的光照能提高愈伤组织的诱导率;3)在最佳分化培养基MS+KT2.0mg/L 上,绿苗分化率为12.6%;4)试管苗最佳生长培养基为MS+BAP2.0mg/L+NAA0.8 mg/L;5)在最佳生根培养基MS+NAA0.6mg/L 上,试管苗的生根率达98%,植株移栽成活率为94%。本试验为假俭草体细胞筛选和遗传转化提供依据。  相似文献   

9.
仔猪断奶应激对血液和生化的影响   总被引:13,自引:0,他引:13  
随机选取 10 头健康的42~45 天断奶长白仔猪,分别于断奶时、断奶后7 天、14 天上午采血,检验血液学、血清生化等多项指标,结果如下:仔猪血清 A S T、 C K、 L D H 活性在断奶后 7 天时都升高,其中 A S T、 L D H活性与断奶时相比差异极显著( P< 001);血清 A M Y L 活性,断奶后均比断奶时高,但无统计学上差异( P>005);血清 T P、 G L O B、 A L B、 B U N、 C H O L 含量在断奶后极显著或显著降低( P< 001 或 P< 005); G L U、 C R E A、 T C O2 含量降低,但无统计学上差异( P> 005)。血液 R B C、 H G B、 H C T、 M C V 断奶后极显著降低( P<001), M C H C 断奶后极显著升高( P< 001); W B C、 P L T 等断奶后虽有变化,但均无统计学上差异( P>005)。结果表明,仔猪在断奶后一段时间,处于营养缺乏性单纯小红细胞性贫血状态。  相似文献   

10.
用装有瘤胃瘘管和真胃瘘管的肥育阉牛,按完全拉丁方设计,连续定点消化道食糜采样,用KB-1型自控大型呼吸测热室测定能量平衡和氮平衡。结果表明,4种不同加工细度羊草,在维持饲养水平(1M)下的DE/GE,ME/DE,HP/ME,Km,VFA总量,乙酸:丙酸比例等的组间差异均不显著(P>0.05),代谢能转化为维持净能效率(Km)平均为65.69%(C.V=0.88%);1.3M饲养水平的各种能量参数,4组间的差异亦均不显著(P>0.05),代谢能转化为增重净能效率(Kf)平均33.92%(C.V=1.86%)。4种不同精料:羊草比例的日粮,在维持饲养水平下,CH4(KJ)/DE(KJ)=0.0738+0.0615(NDF/OM),r=0.8928,Km=60.8651+0.3304(丙酸mol/100molVFA),r=0.9955;在1.5M下,HP/ME=14.3838+0.7805(乙酸mol/100molVFA),r=0.9903,Kf=22.9697+0.6022(丙酸mol/100molVFA),r=0.9981,或Kf=57.2265-0.3817(NDF/OM),r=-0.9987。  相似文献   

11.
将PRRSVCH1a株N基因用EcoRI和PstI双酶切从重组质粒pUC18ORF7切下后,插入到原核表达载体pBV220的PR、PL启动子下游,得到重组表达质粒pBV220ORF7。转化了pBV220ORF7的大肠杆菌JM83经诱导培养后,用SDSPAGE和Westernblot检测表达产物。结果表明PRRSVCH1a株的N基因在原核载体上得到高效表达,表达产物占菌体总蛋白的153%。表达蛋白可望成为有价值的PRRS诊断抗原。  相似文献   

12.
囊虫病循环抗原酶联免疫试剂检测盒的研制   总被引:7,自引:1,他引:6  
以部分纯化囊虫抗原免疫 B A L B/c 小鼠,取其脾细胞与 S P2/0 细胞融合制备抗囊虫循环抗原( C A) Mc Ab ,共获得 8 株分泌抗囊虫 C A M c Ab 细胞株。经鉴定,筛选出组合后能获得最佳检测效果的 C A M c Ab细胞株 M c Ab 1 C7(包被)和 H R P1 B5 作为检测用的 M c Ab,用其建立了检测囊虫 C A 的双抗体夹心 E L I S A方法,并研制了囊虫病 C A 检测试剂盒。试剂盒用于检测囊虫病 C A,敏感、特异、快速、简便,囊虫病血清 C A的检出率为 91.43% ,脑脊液 C A 的检出率为 94.44% 。  相似文献   

13.
以长×荣二元杂交猪为研究对象,通过饲养试验和屠宰试验,测定了试验猪20~35、35~50、50~80、80~100kg阶段的生产性能和胴体无脂瘦肉生长指数(胴体无脂瘦肉沉积速度)。试验结果表明:试验猪全期日增重平均为762g,平均日采食量2153g,饲料报酬(F/G)2.787,各生产性能公母间差异不显著(P>0.05);日增重与体重的回归方程为ADG(g/d)=293.03+15.1BW-0.1 034BW2(R2=0.9988);试验猪全期胴体无脂瘦肉生长指数为227g/d;体蛋白沉积模型Y(g/d)=72.211-1.5275BW+0.0648BW2-0.0005BW3(R2=0.955);真可消化赖氨酸需要模型Y(mg/d)=8665.41-183.3BW+7.7788BW2-0.0612BW3+36BW0.75,据此模型推算出20~50、50~80、80~100kg阶段真可消化赖氨酸需要量分别为9.67、13.63和11.61g/d,总赖氨酸需要量为11.12、15.76和13.42g/d,真可消化赖氨酸按占风干日粮的百分比表示为0.61%、0.56%和0.41%,总赖氨酸需要量按占风干日粮的百分  相似文献   

14.
引入青海的辽宁绒山羊心电图分析   总被引:1,自引:1,他引:0  
对34只引入青海的辽宁绒山羊肢 导联,双极胸导联 和A-B导联共10个导联的心电图进行了分析和研究,结果发现:①平均心电轴显著右偏,为+1 34.4°±76.7°;②皆为窦性心律,但窦律不齐的出现概率达64.7%;③P波和T波波向一致性 较好的有Ⅰ,Ⅱ,Ⅲ,aVF和A-B导联(正向)以及aVR导联(负向);④CⅡ,CⅢ和A-B导联的QRS 综合波波型较为恒定,分别呈qR型,qR型和R型以及rS型;⑤波及间期时限:P波,0.049s(0.04 ~0.08s);QRS综合波,0.059s(0.04~0.08s);T波,0.072s(0.04~0.12s);P-Q间期,0.10 7s(0.08~0.16s);Q-T间期,0.306s(0.22~0.38s);R-R间期,0.672s(0.42~1.11s)。  相似文献   

15.
本试验用抗 P R R S V 单克隆抗体( S D O W 17)建立了检测猪体内 P R R S V 抗原的免疫组化染色法,主要步骤:组织块在100 m L/ L中性缓冲液福尔马林中固定24~48 h→常规脱水、石蜡包埋、切片4~5μm →二甲苯脱蜡→100% 酒精→10 m L/ L盐酸酒精 30 m in(消除内源性过氧化物酶)→95% 酒精→85% 酒精→75% 酒精→蒸馏水→0.01 m ol/ L P B S→10% 马血清37 ℃30 m in 后转4 ℃过夜→0.01 m ol/ L P B S3×5 m in→生物素化马抗鼠 Ig G(1∶200) 37 ℃ 60 m in→0.01 m ol/ L P B S3× 5 m in→辣根酶标记链亲和素(1∶200)37℃ 60 m in→0.01 m ol/ L P B S3×5 m in→新鲜配制的 D A B室温下显色 5~15 m in→0.01 m ol/ L P B S洗→常规脱水、透明、封片。经对8 例试验感染 P R R S V 仔猪各种组织内 P R R S V 抗原的检测,本法具有简单、快速、特异性强,结果清晰、稳定及重复性好等特点,是检测组织内 P R R S V 抗原的一种好方法。  相似文献   

16.
用从健康猪胸腺提取的 T 淋巴细胞作抗原免疫 B A L B/c 小鼠。取免疫鼠脾细胞与 S P2/0 骨髓瘤细胞融合,经 3 次克隆,共获得 10 株稳定分泌抗体的杂交瘤细胞。以细胞反应特异性试验、 W esternblotting 分析、流式细胞计数( F C M )等方法,确定了对猪 T 细胞表面抗原特异性反应的单抗( M c Abs),其中 2 D9 、3 B1 0 可以识别相对分子质量 50 000 的 T 细胞膜蛋白,能标记 96% 的胸腺细胞、89% 的外周血 T 淋巴细胞、87% 的脾 T 淋巴细胞,其特性与猪 C D2 抗原相符;另一株 1 G1 2 可识别相对分子质量 63 000 的 T 细胞膜蛋白,能标记 98% 的胸腺细胞、91% 的外周血 T 淋巴细胞、78% 的脾 T 淋巴细胞,其特性与猪 C D5 抗原相符。  相似文献   

17.
奶牛半胚裸露冷冻保存试验   总被引:4,自引:1,他引:3  
本试验研究了不同冷冻方法,半胚冷冻前不同培养时间及不同冷冻保护液对奶牛7日龄半胚裸露冷冻效果的影响,结果以10%(V/V)甘油+10%(W+V)葡聚糖(T-500)+0.1M蔗糖+20%FCS-PBS溶液为冷冻保护液,裸露冷冻前培养1.0小时的半胚,获得了82.4%(14/17)的较高存活率。试验结果表明,半胚冷冻前培养时间及不同保护液对奶牛半胚裸露冷冻有显著影响。  相似文献   

18.
从中国发病鸡群中分离的鸡减蛋综合征病毒(EDSV)AA-2株,经常规方法提取其病毒核酸后,构建了限制性内切酶PstⅠ及HindⅢ水解片段的基因文库。对其中HindⅢ-F片段(52.9~58.9mu)的正反2条链的序列测定发现,其反链存在1个编码容量为387个氨基酸(aa)的开放读码框架(openreadingframe,ORF),经Genebank/EMBL同源搜寻后证实其编码产物为EDSV的DNA结合蛋白(DBP)。与其他腺病毒DBP的氨基酸序列进行同源比较,其N端同源性在19.0%~46.2%之间,C端同源性在27.7%~60.4%之间。腺病毒DBP的3个保守序列CR1,CR2,CR3在EDSVDBP中有较大变化,但EDSVDBP的锌指框架(Zn2+fingermotif)却保留了对其功能必需的残基。  相似文献   

19.
bcl-2在鸡马立氏克氏病肿瘤中的表达   总被引:1,自引:0,他引:1  
用来克亨 S P F鸡复制马立克氏病( Marek’s disease, M D)肿瘤模型,取肿瘤和相应正常组织,液氮保存。 A G P C( Acid Guanidinium Thiocyanate Phenol Chloroform )法提取组织总 R N A( T R N A),紫外测定其浓度,甲醛变性胶电泳观察其纯度。将一个含鸡 bcl2 1.2 kb 片段的质粒( P T T B C1),经转化扩增,提取质粒 D N A,限制性内切酶( R E)消化,回收纯化bcl2片段,放射性 α32 P标记,制成探针。通过 Northern 分子交杂检测 M D 肿瘤组织中bcl2 的表达,并与相应的正常组织比较。结果:①鸡 M D 肿瘤组织和相应正常组织中均有 bcl2 的表达;② M D 肿瘤组织中bcl2 的表达显著高于相应的正常组织。结合已进行的凋亡研究表明,bcl2 表达产物通过阻遏细胞凋亡促进 M D 淋巴瘤的形成。  相似文献   

20.
狂犬病病毒糖蛋白基因在原核细胞中的表达   总被引:2,自引:0,他引:2  
将狂犬病病毒糖蛋白(RVgp)基因BglⅡ片段(1675bp)分别正向插入到原核高效表达载体pET-17b和pET-17b2(用SacⅠ-NdeⅠ缺失掉pET-17b60bp含起始密码子ATG小片段)的BamHⅠ切点,构建重组质粒pET-17bRVgp和pET-17b2RVgp。将其分别转化表达受体菌E.coliBL21(DE3)和E,coliBL21(DE3)plysS.IPTG诱导表达,菌体经超声波裂解处理后SDS-pAGE,染色,在分子量约60000处可见重组质粒表达的较宽的蛋白带,以抗RVgpMcAb进行Western-blot检测,表明该表达蛋白为RVgp。通过扫描显示,表达的RVgp占菌体总蛋白的10%~14%,其中pET-17b2RVgp在E。coliBL21(DE3)中的表达量最高。  相似文献   

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