早熟桃胚愈伤组织的诱导与保持

以早熟桃品种西选一号胚为外植体,对愈伤组织的诱导、继代保持和分化进行了研究。结果表明:2,4-D浓度为2.0mg.L-1的MS培养基是愈伤组织诱导的最适宜培养基,诱导率最高,达90.2%,诱导的愈伤组织质量好;将2,4-D浓度降低至1.0 mg.L-1,采用MS、WPM 2种培养基进行交替继代,可以使愈伤组织长期保持,但这种愈伤组织不能分化出芽。     

油松胚性愈伤组织成熟培养的影响因素

以油松的胚性愈伤组织为材料,利用单因素试验设计探究ABA质量浓度、PEG质量浓度、植物凝胶质量浓度、糖的种类和其质量浓度对油松体细胞胚成熟率的影响;在此基础上采用正交试验筛选出最佳培养条件。单因素试验结果表明,成熟培养基中ABA质量浓度14~18 mg·L^-1、PEG质量浓度50~100 g·L^-1、植物凝胶质量浓度2.5~5.0 g·L^-1、麦芽糖和蔗糖质量浓度组合(15+25)g·L^-1时,体细胞胚的成熟效率较高;正交试验结果表明,成熟培养基中ABA质量浓度16 mg·L^-1、PEG质量浓度75 g·L^-1、植物凝胶质量浓度5 g·L^-1、麦芽糖和蔗糖质量浓度(10+30)g·L^-1时,油松体细胞胚的成熟效率提高了0.8倍。     

黄秋葵愈伤组织的产生及其切片观察

以黄秋葵(Abelmoschus manihot)植株的叶片、顶芽及无菌苗的子叶、胚轴和胚根为外植体进行离体培养,诱导产生了2种不同形态结构的愈伤组织:非胚性愈伤组织和胚性愈伤组织。通过观察,2种不同愈伤组织在细胞结构上有明显的差异。非胚性愈伤组织结构松软、灰褐色,生长缓慢且容易死亡;组织切片观察细胞大、排列无规律且间隔大。胚性愈伤组织结构紧密、呈黄白色或者淡绿色;组织切片观察细胞小且排列紧密;容易形成胚状体,从而进一步发展成为完整植株。     

白皮松胚性和非胚性愈伤组织生理生化特性研究

【目的】探讨白皮松体细胞胚胎发生过程中各项生理生化指标与体细胞胚胎发生、发育的关系。【方法】以白皮松体细胞胚发生诱导阶段不同发育时期的胚性愈伤组织(EC)和非胚性愈伤组织(N-EC)为材料,对其不同培养时间(5,15,25和35 d)的可溶性蛋白质、可溶性糖和淀粉含量及抗氧化物酶(POD,SOD,CAT)活性进行研究。【结果】EC中可溶性蛋白质和可溶性糖含量均在培养25 d时达到峰值,N-EC中可溶性蛋白和可溶性糖含量在培养15 d时达到峰值;EC中淀粉含量呈现先上升后下降再上升的变化趋势,N-EC淀粉含量一直呈下降趋势。EC中抗氧化物酶活性明显高于N-EC,SOD活性在培养15 d时达到峰值,表明SOD在体细胞胚诱导初期起主导作用;EC的CAT和POD活性均在培养25 d时达到峰值,说明CAT和POD在体细胞胚发生过程中对胚性细胞的进一步分化和发育起主导作用。【结论】白皮松体细胞胚胎发生诱导阶段,EC的生理生化代谢活性高于N-EC。     

杉木体细胞胚胎发生胚性愈伤组织诱导条件的优化

目的优化杉木体细胞胚胎发生过程中胚性愈伤组织的诱导条件,探究基本培养基、供体母株基因型和外源添加剂对杉木体胚诱导的影响。方法以3个供体母株基因型（Z1、Z2、Z3）的杉木雌配子体（其未成熟合子胚处于裂生多胚期）为外植体,采用6种基本培养基及不同浓度的外源添加剂塞苯隆（TDZ）和茉莉酸甲酯（MeJA）处理,并对诱导培养过程中的愈伤组织进行细胞学观察。结果以DCR为基本培养基,诱导培养效果最好,愈伤组织诱导率达70.74%,胚性愈伤组织的诱导率达17.36%;供体母株基因型对胚性愈伤组织诱导有较大影响,Z1基因型供体母株的雌配子体最适合用于诱导产生胚性愈伤组织,诱导率为14.73%;诱导培养时以DCR为基本培养基,添加蔗糖30 g/L、活性炭1 g/L、倍力凝5 g/L并附加植物生长调节剂2,4-D 1.5 mg/L、KT 0.4 mg/L、MeJA 1.2 μmol/L和TDZ 0.004 mg/L,杉木胚性愈伤组织的诱导率最高,达19.83%;仅需4 d就可诱导产生胚性愈伤组织,不同阶段原胚团的结构和极性特征有明显差异。结论基本培养基、供体母株基因型和外源添加剂都会明显影响杉木体胚诱导培养,以Z1供体母株基因型的杉木雌配子体为外植体、DCR为培养基并组合添加MeJA和TDZ可明显提高杉木体胚诱导率。      

陆地棉胚性愈伤组织诱导和植株再生

以陆地棉“泗棉３号”、“北元２０３１”、“鲁９５５４”为材料进行全固体体细胞培养，获得了胚性愈伤组织和再生植株。起始愈伤组织阶段，用含２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．１ｍｇ／Ｌ和２，４－Ｄ０．１ｍｇ／Ｌ ＩＡＡ０．１ｍｇ／Ｌ，ＺＴ０．１ｍｇ／Ｌ的培养基效果较好；进入胚性愈伤组织诱导阶段，在含ＩＡＡ０．５ｍｇ／Ｌ，ＫＴ０．５ｍｇ／Ｌ的培养基上胚性愈伤组织诱导频率较高。     

不同植物生长调节物质对杂种落叶松胚性愈伤组织增殖的影响

以日本落叶松×长白落叶松的胚性愈伤组织为材料,研究不同植物生长调节物质对胚性愈伤组织增殖和体细胞胚形成能力的影响。结果表明:2,4-D质量浓度对胚性愈伤组织增殖有显著影响,胚性愈伤组织增殖率随2,4-D质量浓度的升高而下降。在添加2,4-D0.1mg·L-1 BA0.05mg·L-1 KT0.05mg·L-1与NAA0.5mg·L-1 BA0.05mg.L-1 KT0.05mg.L-1的培养基中,胚性愈伤组织可以长期维持与增殖;在添加IBA0.5mg·L-1 BA0.05mg·L-1 KT0.05mg·L-1的培养基中愈伤组织的增殖效果最好,增殖系数达到4.6倍,而且转到体细胞胚成熟培养基后形成的体细胞胚数也最多,达到88.6个·g-1。在添加2,4-D0.1mg·L-1 BA0.05mg·L-1 KT0.05mg·L-1的培养基增殖的胚性愈伤组织形成的体细胞胚的萌发率和植株再生率最高,分别为66.7%和50%。     

龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生

比较了龙眼不同类型胚性愈合伤组织，品种，蔗糖质量浓度，有机附加物，生长调节剂，光照度等因素对龙眼胚性愈组织体胚诱导的影响，结果表明，在优经的体胚发生条件下，选择适宜的胚性愈伤组织类型，可获得龙眼胚性愈伤组织的高频率体细胞胚胎发生，在低质量浓度蔗糖（≤３０ｇ．Ｌ＾－１）和黑暗条件下，松散型胚性愈伤组织的体胚分化频率为１００％，并且发生数量可达每克１万个左右。     

雨花2号桃离体微繁殖技术研究

以桃品种雨花2号春季嫩梢茎段为外植体,通过外植体消毒方法的筛选,以及腋芽诱导、腋芽增殖和生根培养基的筛选,以建立该品种的快繁体系,并解决桃离体快繁过程中常见的玻璃化和黄化问题.研究结果表明:最佳的外植体消毒方法为先以75.00%酒精浸润20 s,再用0.10% HgCl2 0.01%吐温对外植体表面消毒8 min;LP 6-BA 0.80 mg/L IBA 0.30 mg/L最利于腋芽萌发;LP 6-BA 1.50 mg/L IBA 0.20 mg/L的继代增殖培养基上4周芽增殖倍数达3.5～4.0,且植株健壮;适宜生根培养基为MS IAA 1.50 mg/L.同时,研究发现,在继代培养基中添加0.20 mg/L GA3可使黄化苗转绿,培养基中Ca2 浓度增加至0.729 mmol/L可以有效地抑制和消除玻璃化现象,培养基中使用6.50 g/L琼脂粉也可抑制玻璃化苗的产生.     

桃(Prunus persica L.)茎尖培养技术的研究

筛选出了适合于桃品种‘北农早艳’茎尖(0.2 mm 和0.5 mm)培养的培养基为:G培养基附加 IBA 0.25 mg/L+BA 0.5 mg/L+GA_3 1.0 mg/L+LH 500.0 mg/L。茎尖用聚氨酯海绵作支撑物的液体培养比琼脂培养成活率高2～5倍,且生长迅速。获得了0.2 mm 长茎尖的生根植株。     

桃果实生长素结合蛋白ABP1的组织定位及蛋白表达分析

【目的】生长素几乎参与调控植物发育的各个方面。生长素信号转导存在由ABP1（auxin binding protein 1）介导的途径,ABP1作为一种生长素快速响应蛋白参与调控果实发育等生理过程,其主要存在于正在发育的胚及胚的周围组织中。本文旨在研究ABP1是否参与桃果实发育过程,探讨其分布与表达特点,为进一步研究桃果实发育机制奠定理论基础。【方法】以‘24号’桃果实为研究对象,测定其生长曲线以确定果实发育的3个典型时期。分离不同发育时期的中果皮、内果皮和种子,切块后,一部分样品放入EDAC溶液抽真空后进行戊二醛和多聚甲醛固定,固定后的样品经脱水和浸蜡处理后用于石蜡切片;另一部分样品液氮速冻后-80℃保存提取蛋白。制备效价较高的ABP1兔源多克隆抗体,应用免疫组织化学定位技术对自然发育状态下不同发育时期桃果实种子和中果皮中ABP1进行定位分析;应用Western blot技术分析桃果实中果皮、内果皮和种子中ABP1的表达情况。【结果】根据桃果实生长曲线,将发育时期分为3个时期,即第一次快速生长期、硬核期和第二次快速生长期。免疫组织化学定位结果表明,同一发育时期ABP1在种子的不同部位都有分布,且分布信号差异不明显。在种子发育的各时期,ABP1在种子的不同部位都有分布,主要分布在种子的内外种皮细胞以及种皮内维管组织周围的细胞中,且在观测的发育时期内,ABP1的信号强弱没有明显变化。在种子内、外种皮之间的细胞层中会出现零散的、呈带状分布的ABP1信号。而在中果皮发育的整个时期,ABP1只在硬核期维管组织周围的细胞中有明显分布。Western blot结果表明,中果皮中ABP1的表达在果实第一次快速生长期开始（盛花后41 d）及第二次快速生长期开始（盛花后76 d）时的表达量最高,在盛花后39 d的表达量最低。种子中ABP1的表达量要高于中果皮与内果皮。【结论】ABP1在果实内的分布与表达水平存在组织和发育时期的差异性,ABP1因子参与了生长素对桃果实发育的调控过程。     

桃分子遗传图谱构建及红肉性状基因定位概述

红肉桃果肉颜色鲜艳,富含酚类物质和花色苷,抗氧化能力强,营养与保健价值高,成为目前研究热点之一。利用先进的分子标记技术辅助育种是加快红肉桃育种进程的重要手段,而构建高密度的遗传连锁图谱是红肉桃性状快速、定向改良的前提。对近年来国内外桃分子遗传图谱构建及红肉性状基因定位的研究进展进行了综述,并对今后的研究方向提出了建议,旨在为红肉桃品质改良和分子育种提供参考依据。     

桃单果重与6个物候期性状的遗传关联分析

【目的】关联分析作为传统连锁分析方法的有效补充,可以鉴定果树的数量性状位点（Quantitative Trait Loci, QTLs）。本研究通过关联分析定位桃单果重及6个物候期性状的QTLs,以研究性状间的遗传相关,为提高桃品质育种的效率奠定理论基础。【方法】以来源于中国6个生态群的104份桃地方品种为试材,利用分布于桃8条连锁群上的53对SSR（Simple Sequence Repeats）引物,用STRUCTURE 2.3.3和TASSEL 2.0.1软件分别对群体结构和全基因组SSR位点间的连锁不平衡（Linkage Disequilibrium, LD）状况进行分析。在结合单果重和6个物候期性状表型数据后进行关联分析,以定位各性状的QTLs。【结果】群体结构显示供试的104份桃地方品种基于数学模型可以分为5群;LD分析表明在53个SSR位点组成的1378个成对组合中,23个成对位点存在着显著LD且得到统计概率支持。虽然相关性分析表明单果重只与展叶期显著相关,但关联分析却显示单果重不仅与盛花期、展叶期、果实成熟期和落叶期均具有相同的关联位点;而且桃单果重的关联位点与不同连锁群上盛花期、果实发育期和落叶期的关联位点也存在显著的LD现象。对单果重具有最大增效表型效应的等位变异UDP96-013-206同时具有提前花期1.46 d、延迟果实成熟期13.77 d、延迟落叶期2.17 d的表型效应。【结论】本研究得到27个与桃单果重及6个物候期性状关联的QTLs,部分位点与前人定位的连锁群相同。关联分析表明单果重与盛花期、展叶期、果实成熟期、果实发育期和落叶期确实存在遗传相关,主要表现为这几个性状可能受到基因多效性调控或者受连锁群内及连锁群间存在连锁或关联关系的基因调控。     

柑橘愈伤组织内源激素代谢与体细胞胚胎发育能力关系的研究Ⅰ．柑橘不同愈伤组织体细胞胚胎发生能力的比较

为了探明柑橘愈伤组织内源激素代谢与体细胞胚胎发生能力的关系，研究了长期继代保存的纽荷尔脐橙和伏令夏橙不同愈伤组织的体细胞胚胎发生。结果表明，无论是在加吸3％蔗糖的MT增殖培养基上，还是在加有30mL/L甘油的MT分化培养基上，纽荷尔脐橙的胚性愈伤组织和二倍体伏令夏橙愈伤组织的体细胞胚胎发生能力均较强，而纽荷尔脐橙的非胚性愈伤组织，四倍体和六倍体伏令夏橙愈伤组织的体细胞胚胎发生能力较弱。     

‘鲁星’桃中10个MADS-box基因克隆和表达分析

【目的】克隆‘鲁星’桃(Prunus persica var.nectarina‘Luxing’)中参与调控营养和生殖生长的MADS-box(Pp MADS)基因,研究其在不同组织器官中的表达特性,为解析该基因在花发育和果实发育及成熟过程中的功能奠定基础。【方法】利用同源比对和RT-PCR技术,克隆获得‘鲁星’桃中10个Pp MADS全长c DNA序列,并进行生物信息学相关分析;采用RT-PCR技术检测PpMADSs在茎、叶、萼片、子房、雄蕊、花瓣等组织以及花发育7个阶段和果实发育5个阶段的表达特性。【结果】测序结果显示,获得10个PpMADSs(Pp MADS11、12、19、20、21、22、28、29、30和31;Gen Bank登录号分别为KU559577、KU559578、KU559585、KU559586、KU559587、KU559588、KU559594、KU559595、KU559596和KU559597),其开放阅读框(open reading frame,ORF)分别为522、279、1 065、828、723、600、636、534、750和480 bp。进化分析表明,PpMADS11属于AP3亚组,PpMADS12是AGL17亚组,Pp MADS19属于MIKC*组,Pp MADS20、21和22同被分为Mα组,PpMADS28、29、30和31同属于Mγ组。亚细胞定位预测结果显示,10个PpMADS蛋白均定位于细胞核中。启动子分析显示,PpMADSs启动子区域含有多个顺式作用元件,包括光响应元件、防御及逆境响应元件、干旱诱导的MYB结合位点、热激响应元件、低温响应元件、真菌效应子响应元件、伤害响应元件、厌氧响应元件、GA响应元件、Auxin响应元件、Me JA响应元件、ABA响应元件、SA响应元件和乙烯响应元件。半定量RT-PCR和q RT-PCR结果显示,PpMADS11在茎、叶、萼片、子房、雄蕊、花瓣、花发育和果实发育中表达;PpMADS12在茎、叶、萼片、子房、雄蕊、花瓣和花发育中表达;Pp MADS19在萼片、雄蕊、花瓣和花发育中(苗期除外)表达;Mα组和Mγ组所有成员在茎、叶、萼片、子房、雄蕊、花瓣和花发育中均有表达,部分成员在果实发育中表达。【结论】10个PpMADS在‘鲁星’桃的营养生长以及花和果实发育过程中可能具有重要的调控作用。     

桃叶绿体全序列微卫星分布规律研究

对桃叶绿体基因组全序列中微卫星的分布规律进行了全面分析.结果发现,cpSSR主要分布在大单拷贝区和小单拷贝区,以完全重复为主.单碱基重复最多,占总数的75.68％,二碱基重复占21.62％,单碱基重复主要以(A)n和(T)n为主,二者共占总数的67.57％,二碱基重复主要是(AT)n或(TA)n,占总数的20.47％.单碱基重复(A)n和(T)n的重复次数分别以11次和10次最多,而二碱基重复(AT)n、(TA)n和(TC)n的重复次数均为5～6次.研究结果为开发桃李属植物叶绿体通用引物提供了理论依据.     

不同类型桃果实内酯芳香物质构成与重要性评价

【目的】分析不同类型成熟桃果实的内酯芳香物质构成,并评价其对于桃果实芳香的重要性。【方法】以涵盖不同果肉质地、果肉颜色、果实成熟期等的多品种桃果实为试材,采用顶空固相微萃取-气相色谱质谱联用体系检测样品的芳香物质,通过精确的定性和定量分析,明确内酯芳香物质的构成,并结合芳香物质的气味活性值分析评价其重要性。【结果】内酯芳香物质存在于本研究全部桃品种的成熟果实中,样品中共检测到10种内酯芳香物质,包括γ-己内酯、γ-辛内酯、γ-庚内酯、γ-癸内酯、5-羟基-2, 4-癸二烯酸-δ-内酯、δ-癸内酯、γ-十一内酯、δ-辛内酯、茉莉内酯、顺式-4-羟基-6-十二烯酸内酯。各内酯物质具有特定的气味属性,主要散发果香（桃/椰子）、甜香、奶油香、焦糖香、花香和草本味等气味。不同品种的桃果实共有的内酯物质是γ-己内酯,较为普遍存在的内酯物质包括γ-癸内酯和δ-癸内酯,部分品种存在特有的内酯物质,如‘深州蜜桃’果实中的顺式-4-羟基-6-十二烯酸内酯。果实成熟期时,溶质‘白花水蜜’‘深州蜜桃’‘橙香’‘奉化玉露（晚）’‘肥城红里大桃’等品种中检测到较多种类的内酯芳香物质,硬质‘霞脆’‘秦王’‘华玉’等品种果实具有较少种类的内酯芳香物质。气味活性值分析表明,由于极低的气味阈值和较高的物质含量,γ-癸内酯存在于大部分品种中,且对于这些品种桃香气的形成具有重要贡献,使溶质‘深州蜜桃’‘橙香’‘奉化玉露（晚）’‘白花水蜜’等品种果实均具有较为强烈的典型的桃香气味,溶质‘阿初桃’和硬质‘华玉’品种的典型桃果芳香较淡,而未检测到该内酯的硬质‘秦王’‘霞脆’品种果实则没有典型的桃果芳香。此外,γ-辛内酯使部分品种（本研究中为‘橙香’和‘深州蜜桃’）桃果实呈现更为强烈的椰果味和非常甜的气味。【结论】内酯是桃果实挥发性芳香物质的一个重要类别,桃果实内酯物质构成丰富,成熟果实至少包含10种内酯芳香物质。内酯物质类别和含量的差异是不同品种尤其是不同果肉质地的桃果实芳香特征的一个重要体现,而不同果肉颜色或成熟期品种的内酯芳香无显著差异。γ-己内酯是品种之间共有的内酯物质,γ-癸内酯和δ-癸内酯是品种之间较为普遍存在的内酯,顺式-4-羟基-6-十二烯酸内酯等是部分品种特有的内酯物质。γ-癸内酯和γ-辛内酯等内酯对于品种的典型桃香气以及独特芳香气味的形成具有重要贡献。