中国沙棘体细胞胚胎间接发生与植株再生

以中国沙棘组培苗茎尖为外植体,在1/4 MS基本培养基上,对愈伤组织、胚性愈伤组织及体细胞胚胎进行诱导,探讨植物生长调节剂配比对中国沙棘愈伤组织、胚性愈伤组织的诱导和体细胞胚发生的影响。结果表明:在KT 1.0 mg/L + NAA 0.3 mg/L的最佳组合中,暗培养20 d后,愈伤组织的诱导率达到90.10%;暗培养30 d后,胚性愈伤组织的诱导率达到77.67%;将胚性愈伤组织转移到新鲜诱导培养基上,光培养20 d,平均体细胞胚发生数达到15.48。为了得到完整的再生小植株,将胚状体转移到不含任何生长激素的体细胞胚发育及植株再生培养基上,分析了KT和白砂糖不同浓度的组合对小植株再生的影响。结果发现:WPM + KT 0.05 mg/L + 白砂糖 20 g/L + 琼脂粉 6.5 g/L + CH 0.5 g/L处理上的植株再生率达到60.30%。该研究建立起了完整的中国沙棘体细胞胚胎间接发生的再生体系。      

新疆陆地棉体细胞胚状体的发生和植株再生

以新疆陆地棉品种下胚轴为外植体，在含有４种激素（２，４－Ｄ、ＫＴ、ＮＡＡ、ＩＡＡ）不同组合的培养基上进行愈伤组织诱导，通过对体细胞胚胎发生的悬浮培养条件与植株再生各因子的比较研究，获得了陆地棉新陆中２号、新陆早１号两个优良栽培品种的体细胞胚胎的发生，体细胞胚经固体或液体培养，均可萌发，萌发的胚在成株培养基上形成了具有根、芽的完整再生植株。     

湿地松及其杂种的体细胞胚胎发生与植株再生

【目的】明确适合湿地松Pinus elliottii及其杂交种的体细胞胚胎发生条件,建立体胚成熟萌发的技术。【方法】以2016年6月采集的2个湿地松家系(EE1,EE2)、2个湿地松杂交种家系(EC,EH)的未成熟合子胚(含胚乳)为材料,从诱导、增殖、成熟到萌发配制3个系列培养基,比较外植体采集时间、家系、基本培养基对胚性愈伤组织诱导的影响。用显微镜进行胚性愈伤组织鉴别后,进一步挑选诱导形成的胚性愈伤组织进行增殖、成熟、萌发,最终获得再生植株。【结果】湿地松及其杂交种合子胚的发育进程可划分为8个阶段,阶段Ⅱ、Ⅲ为未成熟胚,适合体胚发生,EC最早出现阶段Ⅲ合子胚。外植体诱导产生具有胚性胚柄团(ESM)结构的胚性愈伤组织,可进一步增殖。诱导培养基对愈伤组织形成及胚性愈伤组织占比具有较大影响,3种诱导培养基(T1、T2和T3)产生愈伤组织效率最高的为T1培养基(49.0%),胚性愈伤组织所占愈伤组织的比例最高为T2培养基(22.4%)。培养基配方的诱导率存在基因型间的差异,T1培养基整体诱导率低;T2培养基对家系EE1诱导率最高,为5.82%;T3培养基对参试材料均能诱导成功,且平均诱导率最高,为3.75%。随采样时间延后,家系EE1、EH的体胚诱导率逐渐增加,家系EE2、EC的体胚诱导率则随采样时间延后逐渐降低。体胚诱导率与合子发育阶段结果基本一致,阶段Ⅲ合子胚均出现较晚,前期诱导率低。胚性愈伤组织继代24次以后,胚活性逐渐降低。成熟培养基T1S和T3S可完成胚的成熟,平均每克成熟培养基分别成熟23.3和15.9个子叶胚,萌发率为32.1%,移栽保存率为47.8%。【结论】诱导培养基T3对参试家系均能诱导成功,T3具有较广泛适用性,各家系在阶段Ⅲ合子胚出现时表现出较大的诱导率,阶段Ⅲ合子胚可能为体细胞胚发生的最佳诱导阶段。建立了湿地松及其杂种体细胞胚发生方法并形成了再生植株。     

三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生研究

以三叶木通成熟种子的幼胚为材料,探讨不同浓度2,4−D（1.0、2.0、4.0 mg/L）、NAA（0.05、0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、6−BA（0.1、0.2、0.5、1.0 mg/L）、KT（0.2、0.5、1.0 mg/L）的植物生长调节剂对三叶木通愈伤组织的诱导及体细胞胚胎发生的影响,分别筛选出诱导愈伤组织、体细胞胚、次生胚增殖、植株再生的最适培养基,以此间接途径建立三叶木通体细胞胚胎发生及植株再生体系。结果表明：三叶木通种子最佳灭菌处理方式为0.1 % HgCl₂灭菌18 min,无菌水冲洗干净后接种在添加了0.05 % PPM的愈伤诱导培养基上;三叶木通幼胚诱导愈伤组织的最佳培养基是 MS+2.0 mg/L 2,4−D+0.2 mg/L NAA,愈伤诱导率为95.67%;胚性愈伤诱导三叶木通体胚发生的最佳培养基为MS+0.1 mg/L NAA+0.2 mg/L 6−BA,体胚诱导率为55%;次生胚增殖的最佳培养基为MS+0.05 mg/L NAA+0.1 mg/L 6−BA,增殖倍数达19.84,体胚随继代次数增多逐渐分化,次生胚增殖活力变弱;成熟的体胚分化后一部分可再生成苗,在MS中能起到壮苗作用,再生植株转移至人工光照培养箱中炼苗3~5 d再转入V（泥炭土）∶V（蛭石）∶V（珍珠岩）为2∶1∶1的基质中能够稳定生根成活且形态正常。     

枸杞体细胞胚胎发生及植株再生的研究

以甘肃农业大学林学院实验基地内“宁杞 2 号”枸杞为材料,幼果用 0.1 % HgCl2进行消毒,在无菌条件下取出未成熟胚进行诱导,在胚成苗后进行继代和生根培养。培养结果表明:以 MS 为基本培养基,附加 6-BA1.0 mg/L和 IBA0.5 mg/L对体细胞胚胎诱导最有效;在 2,4-D为 1.0 mg/L和 1.5 mg/L时的培养基上胚性愈伤组织诱导率较高,分别为 51.0 %和 56.7 %;黑暗低温(10℃)处理 5d 不但可以促进细胞胚胎的发生,而且可以提高其发生的频率(60.0%)。     

影响棉花体细胞胚胎发生和植株再生的关键因素分析

[目的]棉花体细胞胚胎发生是转基因棉花新品种培育的重要条件,由于棉花不同品种中的基因型差别,棉花胚胎发生率及植株再生率较低.分析影响棉花体胚的成熟和萌发、体胚发生同步化控制、减少褐化率和畸形胚比例,以及提高植株再生率等主要因素,为解决棉花组织培养的关键问题提供参考.[方法]收集近年来棉花体细胞胚发生和应用研究进行总结与分析.[结果]分析了影响棉花体细胞胚胎发生和植株再生过程的主要限制性因素.[结论]明确了存在的主要问题及给出相应对策,为深入探讨棉花品种的体细胞胚的发生发育规律及高效组织培养体系的建立提供科学依据.     

毛泡桐体细胞胚胎发生及植株再生研究

以毛泡桐(Paulowniatomentosa)无菌苗叶片和茎段为外植体,在附加NAA0.3mg·L-1或2,4 D0.3mg·L-1与6 BA5～20mg·L-1植物生长调节物质组合的MS培养基上进行体细胞胚胎发生及植株再生的研究.结果表明,毛泡桐叶片和茎段在不同植物生长调节物质组合的12种培养基上愈伤组织诱导率可达100%,但在2,4 D与6 BA植物生长调节物质组合的MS培养基上,叶片和茎段胚性愈伤组织诱导率为0,而在MS+NAA0.3mg·L-1+6 BA17mg·L-1培养基上,叶片和茎段的胚性愈伤组织诱导率分别达到88.3%和46.7%.胚性愈伤组织在该培养基上可发育为成熟的体细胞胚胎,进而成为完整植株.     

玉米(Zea mays L.)体细胞胚状体的发生和植株再生

在 mMSA、mMSB 和 N_6C 三种培养基系列中分别培养11个玉米自交系的未成熟胚,其中10个系的幼胚盾片能诱导产生胚性愈伤组织和胚状体,并能再生植株。试验结果表明,适当调节培养基系列中不同培养基的蔗糖浓度能有效地促进胚状体的发生。通过扫描电镜观察了玉米体细胞胚状体的形态发生过程。部分再生植株移栽成活并结实。再生植株当代(R_0代)均有不同程度的形态变异。所观察的再生植株下一代(R_1代)根尖细胞染色体数目均为20条。文章对影响玉米体细胞胚状体发生的因素进行了讨论。     

烟草体细胞胚胎发生再生植株

以烤烟K326、红大、云85叶片诱导的愈伤组织为材料,在含不同激素配比的培养基上进行试验,研究其体细胞胚胎的发生能力.结果表明:不同品种之间体胚的发生能力存在较大差异,不同激素配比诱导体胚发生的频率也不同,K326、红大、云85体胚最高的发生频率分别为8.3%、47.4%和61.1%;最佳激素配比分别为2.0mg·L-1NAA+0.5mg·L-1BA、2.0mg·L-1NAA+0.2mg·L-1BA和2.0mg·L-1NAA+0.5mg·L-1BA.试验中观察到烟草体胚发育的各阶段,并最终再生成完整植株.     

西洋参体细胞胚胎发生及植株再生

西洋参不同外植体诱导愈伤组织的能力存在明显差异,以子叶的愈伤组织诱导率最高。愈伤组织的分化能力随继代培养而增强,5％聚乙二醇可促进西洋参体细胞胚胎的发生。去除硝酸铵有助于西洋参再生小植株根系的生长发育。     

油棕体细胞胚的诱导和次生胚的增殖研究

油棕体细胞胚的诱导是油棕体胚发生技术体系中最关键的培养过程,通过建立油棕次生胚增殖培养方法可有效地实现油棕组培苗快速的增殖繁育。本研究通过系统的对油棕体细胞胚发生及次生胚再生途径中若干影响因子的比较研究,建立油棕体细胞胚和次生胚再生体系。结果表明:油棕体细胞胚再生体系在不同基因型的油棕品种内诱导率存在较大差别,其中植物外源激素二氯苯氧乙酸(2,4-D)对油棕胚诱导效果较好;油棕次生胚增殖在不同基因型的油棕品种内差异不显著,木本植物培养基(WPM)在油棕次生胚增殖中培养效果最好。     

Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Two Recalcitrant Genotypes of Gossypium hirsutum L.

An improved protocol has been developed for somatic embryogenesis and plant regeneration of recalcitrant cotton cultivars. High callus frequencies and embryogenic tissue were developed in MSB medium supplemented with gradient concentrations of KT and 2,4-D, their concentration decreasing from 0.1 to 0.01 mg L⁻¹. Somatic embryos were successfully incubated in 1/2 macronutrient MSB suspension supplemented with 0.5 g L⁻¹ glutamine and 0.5 g L⁻¹ asparagine. Decrease in macronutrient concentration of MSB significantly alleviated browning and was beneficial to suspension cells. Transformation of somatic embryos into plants was induced in MSB medium supplemented with 3% sucrose, 0.5 g L⁻¹ glutamine, 0.5 g L⁻¹ asparagine, and 6.0 g L⁻¹ agar. The effect of sucrose as carbohydrate was better than that of glucose for plant germination. Using this protocol, regenerated plantlets from the CCRI521 and Zhongzhi86-6 reached to as much as 19.6 and 18.5% somatic embryos, respectively.     

植物体胚成苗培养的研究进展

体胚成苗方式是愈伤组织成苗的主要方式之一，综述了植物体胚成苗培养中的主要问题及解决的方法。     

棉花优良品种中棉所27直接胚胎发生与植株再生

选用我国难培养基因型优良棉花品种中棉所27进行组织培养,研究了该品种体细胞胚胎发生与植株再生能力。该品种体细胞胚胎发生有2种情况:一是由外植体直接诱导获得胚性愈伤组织并形成不同发育时期的胚状体;二是先诱导获得非胚性愈伤组织,再经多次继代培养,获得胚胎发生。不同激素及其组合和浓度配比是影响中棉所27直接诱导获得胚性愈伤组织及体细胞胚胎发生的直接因素。另外,饥饿培养及继代周期对胚胎发生也有重要影响。0.1mg/LKT和0.1mg/LIAA组合、0.1mg/LKT和0.1mg/LZT组合、0.1mg/LZT单独使用,在饥饿条件下培养,均能直接高效诱导获得大量胚性愈伤组织,并有短期内形成不同发育时期的胚状体。胚状体在不含任何激素的MS B5培养基上培养有利于植株再生,并降低畸形苗形成率。另外,还发现不同培养基对中棉所27胚性愈伤组织增殖、体细胞胚形成和萌发的影响不同。     

磁处理对大蒜胚性愈伤组织生长和体胚发生的影响

以大蒜为试材，研究了磁处理对其胚性愈伤组织生长和发生的效应。结果表明：在0．23T磁感应强度下，0－20min之间的磁处理对大蒜胚性愈伤组织的生长和增殖影响不明显，磁处理时间超过20min后，明显对愈伤组织的生长和增殖产生抑制或破坏作用。5min磁处理能显著地促进大蒜体胚的发生和发育，在10－80min内，随磁处理时间延长，平均每克鲜物质体胚数呈缓慢递增趋势，5－10min磁处理的体胚发育状态更趋成熟。     

棉花体细胞胚胎发生及主要物质生化代谢机制

本文利用组织培养和生理生化分析技术对陆地棉体细胞胚胎发生及主要生化代谢物质蛋白质、氨基酸、碳水化合物、可溶性糖等进行了初步的分析，对于鲜重变化进行了测定。结果表明：胚性愈伤组织蛋白质和碳水化合物含量则减少；氨基酸含量胚性愈伤组织普遍高于非胚性愈伤组织，个别氨基酸含量则明显增加或降低。胚性愈伤组织干物质累积较非胚性愈伤组织显著。     

Somatic Embryogenesis and Plant Regeneration from Leaflets of Fritillaria ussuriensis M.

A method for the production of somatic embryos and subsequent plant regeneration for fritillaria ussuriensis M.is described.Whole leaflet explants,derived from plantlets grown in vitro,formed light yellowith embryogenic calli within one month of culture in the dark.Somatic embryogenesis was obtained after a 28d incubation on MS induction medium supplemented with 2mg/L 2,4-D 0.5mg/L BA,0.5mg/L KT and 500mg/L CH followed by transfer to a second N medium containing 0.5mg/L KT and 100mg/L CH.Somatic embryos were transferred to MS medium with 0.1mg/L NAA placed in the light for regeneration ,After two weeks,mature somatic embryo developed into whole phantlet.