水稻纹枯病拮抗细菌的评价与利用

 从稻田土壤、纹枯菌菌核、病斑和水稻植株上共分离获得1437个细菌分离物。在离体条件下测定它们对水稻纹枯菌的拮抗能力。其中拮抗能力强的菌株61个,占4.8％;没有拮抗作用的菌株有486个,占38.1％;其余57％的菌株是略有拮抗作用。24个菌株对水稻纹枯病的防治效果的盆栽生物测定表明,其中有9个菌株的防效在60％以上。挑选了6个菌株在田间进一步测试其防效,结果证实了B916对水稻纹枯病的防治效果最好。1994～1997年连续4年在姜堰、吴江和句容3个基点示范推广使用B916发酵液防治水稻纹枯病,累计面积为2000 hm2以上。大田示范试验结果表明,拮抗菌B916发酵液能够有效地控制水稻纹枯病的为害,防效为50.0%～81.9%。     

黄绿木霉菌对大豆根腐病镰刀菌的拮抗作用

利用室内对峙培养与发酵液处理病原菌研究了黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)对大豆根腐病几种镰刀菌(Fusarium spp.)的拮抗作用,并利用盆栽试验研究了黄绿木霉对苗期大豆根腐病发生的影响.拮抗试验结果表明,黄绿木霉在与镰刀菌对峙培养中,菌丝交叉、接触与纠结,接触后镰刀菌菌丝被破坏;发酵产物只可延长镰刀菌孢子萌发的时间,但对孢子最终萌发率没有影响,发酵产物对菌丝生长速率的影响以山梨醇、葡萄糖及蔗糖作为碳源时,抑菌效果好,抑菌能力分别可达63%、51%、58%;盆栽试验证明黄绿木霉对大豆根腐病有较好的防治效果,防效可达73.2%,处理后幼苗株高与干重均高于未处理的对照.     

水稻纹枯病拮抗细菌7-5的鉴定及其生防机制初步研究

【目的】旨在获得对水稻纹枯病有生防效果的拮抗细菌,探索生防细菌作用机理。【方法】通过苗期防病试验从本实验室保存的7株拮抗细菌中筛选对水稻纹枯病有较好防病效果的菌株。结合生理生化性状和16S rDNA基因序列同源性分析,对生防细菌7-5进行初步鉴定,并通过PCR扩增、薄层层析等探讨7-5产生抗生素的种类。【结果】供试7株细菌中7-5、4-74和4-78对水稻纹枯病防效分别可达69.0%、70.8%和75.4%。其中4-74和4-78抑菌谱窄,7-5对水稻纹枯病菌、桃褐腐病菌和草莓灰霉病菌都具有较强抑菌能力。菌株7-5 鉴定为绿针假单胞菌;该菌株可产生吩嗪-1-羧酸、嗜铁素、氢氰酸、蛋白酶、藤黄绿脓菌素和2,4-二乙酰基间苯三酚等抗菌物质,不产生硝吡咯菌素、几丁质酶和纤维素酶。【结论】绿针假单胞菌7-5主要通过产生抗生素防治水稻纹枯病。     

木霉颗粒剂对大豆根腐病的防治作用

通过室内木霉菌对大豆根腐病优势病原菌--尖孢廉孢菌Fusarium oxysporum平板毒力(EC50)测定,在海伦市和哈尔滨市试验田采用随机区组法进行了木霉颗粒剂小同剂量对大豆根腐病的防治试验.结果表明:木霉菌株(Trichoderma sp.)对大豆根腐病病原菌(Fusarium oxysporum)的EC50为100.3个孢子·mL-1.木霉颗粒剂22.5kg·hm-2的田间防效好于30.0 kg·hm-2和37.5 kg·hm-2,海伦试验田的防效为14.6%～27.6%,哈尔滨试验田的防效为23.2%～43%,在两地分别增产22.3%和6.0%.可以看出该木霉菌对Fusarium oxysporum具有很强的抑制能力,不同用量对火豆根腐病的田间防治效果存在差异,并且在不同试验地点效果不同,木霉颗粒剂22.5 kg·hm-2处理具有明显的增产作用.     

黄绿木霉诱变菌株对大豆根腐病镰刀菌的拮抗

以黄绿木霉(Trichoderma aureoviride)为出发茵株,孢子经紫外线照射,亚硝酸及氯化锂复合处理后获得一株酶活增强的突变株.通过对峙培养与发酵液处理病原茵研究了该诱变株对大豆根腐病几种镰刀茵(Fusarium spp.)的拮抗作用.诱变株经传代30代后,其产酶活性仍保持增强,生防能力有所提高.拮抗试验结果明确了黄绿木霉诱变株对镰刀茵的拮抗机理以生存竞争和接触后对病原茵茵丝破坏的溶菌作用为主,且诱变株产孢速度快,分生孢子梗空间竞争优势强于原始茵株.酶活测定结果表明,诱变株的滤纸酶活提高85.7%,CMC-Na酶活提高26.7%,β-葡萄糖苷酶活提高130.3%.     

砂生槐根瘤内抗小麦纹枯病生防菌株的筛选及其鉴定

为了筛选对小麦纹枯病菌具有生防作用的菌株,从西藏米林县采集的砂生槐根瘤中分离到45株内生细菌,采用平板对峙法、菌丝生长速率法进行拮抗菌株筛选,用显微观察法研究受抑制病原菌菌丝变化;通过摇瓶培养法测定所筛选拮抗菌株的溶磷、固氮及分泌IAA功能,并对其进行盆栽接种防效试验;依据形态观察、生理生化反应及16S rDNA序列同源性分析确定所筛选菌株系统发育地位。结果表明,经过初筛和复筛,45株内生菌中,菌株R4对小麦纹枯病菌的拮抗效果较明显,对其抑菌圈直径达20.5 mm,抑菌率达98.2%,显著推迟菌核的萌发。受R4作用的小麦纹枯病菌菌丝末端分枝增多、部分原生质浓缩、形成瘤状结。菌株R4抗菌谱广,具有溶磷、固氮和分泌IAA活性。盆栽防效试验中,经菌株R4发酵液处理后,小麦纹枯病发病率和病情指数均显著降低,防治效果最高达73.82%。通过形态、生理生化特性及16S rDNA基因序列同源性比对分析,该菌株被鉴定为土地类芽孢杆菌Paenibacillus terrae。     

2种木霉菌对寒地水稻立枯病病原菌的拮抗作用研究

为了明确哈茨木霉和短密木霉对水稻立枯病菌的拮抗作用,采用对峙培养、发酵液、非挥发性和挥发性抑制物抑菌活性检测,分析了哈茨木霉和短密木霉对引起寒地水稻立枯病4种病原菌的拮抗活性。结果表明,2种木霉菌对4种病原菌均有一定的抑制作用。对峙培养,哈茨木霉对尖孢镰孢菌的抑制率最高为79.04%,短密木霉对禾谷镰孢菌的抑制率最高为88.65%。2种木霉非挥发性物质对4种病原菌抑制作用均较强,其中,对禾谷镰孢菌抑制作用最强,抑制率分别为66.78%和70.12%。通过几丁质酶活性测定,发现哈茨木霉比短密木霉产生更高的几丁质酶活性。本研究结果可为研发木霉复合菌制剂防治水稻立枯病奠定基础。     

水稻纹枯病菌拮抗菌B34分离鉴定及杀菌蛋白的获得

从水稻植株上分离到1株对水稻纹枯病菌有较好拮抗作用编号为B34的菌株,室内对水稻纹枯病菌的抑菌带达到10.3 mm。经生理、生化检测及细胞壁化学成分分析,确定其为致黄假单胞菌（Pseudomonas aureofaciens）。其代谢粗提物经蛋白酶作用,拮抗作用消失。经70%饱和度的（NH4）2SO4沉淀,透析后得到粗杀菌蛋白,分别上样SephadexG-100和DEAE纤维素32LKB柱层析系统,分离纯化了杀菌蛋白,经SDS-PAGE检测其分子量约为33.0 kDa,经低温、真空干燥,得到了该杀菌蛋白的结晶体。     

不同药剂防治水稻纹枯病试验总结

为试验40%嘧菌·戊唑醇SC（颖润）等药剂对水稻纹枯病的防治效果及对水稻的安全性,进行了田间药效试验,试验结果表明：40%嘧菌·戊唑醇SC（颖润）等药剂防治水稻纹枯病具有良好的防治效果,且与当地常规药剂混用效果相近,防效无明显差异,施药后药剂对水稻安全无不良影响。     

在水稻生态系统中纹枯病拮抗细菌的分布和种类

 通过对从菲律宾Laguna省水稻植株上分离获得的700个细菌菌株进行离体与生物测定发现,在水稻生态系统中,存在着大量格兰氏阴性、非致病性、对纹枯病有拮抗作用的细菌微生物。根据拮抗细菌分离来源分析结果表明,从病株和水稻生长后期能分离到比健株和生长前期更多的拮抗细菌。用Biolog的方法测定了195个细菌菌株的种类。在147个格兰氏阴性菌株中有13个属39个种,在48个格兰氏阳性菌株中有8个属13个种。在195个被测菌株中有20个菌株对纹枯病菌具有较强的拮抗作用,它们分别归属于7个属12个种。     

禾长蠕孢菌及其代谢产物Ophiobolin A防治水稻纹枯病

 为充分利用已有杂草生防菌菌种资源，进行了稗草生防菌禾长蠕孢菌(Helminthosporium gramineum Rabenh f. sp.echinochloae，HGE）防治水稻纹枯病的初步研究。菌落对峙实验结果表明HGE对纹枯病菌菌丝生长有较强的抑制作用。HGE菌株的发酵液对纹枯病菌的生长有较强的抑制活性，稀释5倍的发酵液24 h的抑菌率为84.1％。发酵液及菌丝的乙酸乙酯提取粗毒素在200 μg/mL浓度下100％抑制纹枯病菌的生长。从粗毒素中分离纯化的有很强抑菌活性的化合物经过NMR及MS波谱分析鉴定为Ophiobolin A。Ophiobolin A在25 μg/mL浓度下即100％抑制纹枯病菌的生长，浓度1 μg/mL时的抑菌率为70.2%。实验结果显示HGE菌及其代谢物Ophiobolin A具有开发成水稻纹枯病生物杀菌剂的潜力。     

羧基化壳寡糖络合碘（CCOS-I）对水稻纹枯病菌的抑制作用及机理初讨

为明确羧基化壳寡糖络合碘（CCOS-I）对水稻纹枯病的防治作用，以 20%井冈霉素可湿性粉剂为对照药剂，测定 CCOS-I 对水稻纹枯病菌的室内抑菌效果和田间防效，以及对超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD）、叶片过氧化物酶（peroridase，POD）、多酚氧化酶（polyphenol oxidase，PPO）、苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonia-lyase，PAL）和 β-1,3-葡聚糖酶（β-1,3-glucanase）等相关防御酶活性的影响。结果表明：羧基化壳寡糖络合碘对该病菌抑制效果明显，经室内毒力测定，其 EC50 值 12.22 mg/L，明显高于对照药剂 20%井冈霉素粉剂。田间药效试验结果表明，在水稻第 3 次用药后 14 d，100 g/hm2 的羧基化壳寡糖络合碘防效达到 80.66%，与井冈霉素有效剂量 150 g/hm2 的效果相当，优于同剂量井冈霉素处理。CCOS-I 在试验剂量范围内对水稻纹枯病有很好的防治作用，且对水稻生长无任何药害现在发生，可以诱导水稻相关防御酶活性提高，适用于水稻纹枯病的防治，具有一定的开发推广价值。     

Development of new bioformulations using Trichoderma and Talaromyces fungal antagonists for biological control of sugar beet damping-off disease

The aims of this study were to develop new bioformulations using Trichoderma harzianum, Trichoderma asperellum, and Talaromyces flavus and some organic and inorganic carriers and evaluate their effects against Rhizoctonia solani, the fungal causal agent of sugar beet seedling damping-off disease. Selected fungal isolates were first re-cultured and maintained on potato dextrose agar (PDA) culture medium. Antagonistic effects of eight isolates of the above-mentioned antagonistic fungi were then evaluated against R. solani, through volatile metabolites and non-volatile metabolites production mechanisms under laboratory conditions. In volatile and non-volatile metabolite experiments, five and seven isolates caused significant reduction in R. solani growth respectively. Based on the results of laboratory experiments, the most effective antagonistic isolates (one isolate from each species) were selected for development of nine bioformulations using peat, rice bran and talc as carriers. The effectiveness of developed bioformulations was then evaluated in controlling sugar beet damping-off disease in a greenhouse experiment where sugar beet seeds were coated with bioformulations and were sown in pasteurized field soil pre-inoculated with R. solani. Results of the greenhouse experiment 60 days after sowing showed that all bioformulations increased the number of healthy seedlings significantly (compared to the untreated control) with different rates. According to the results, the most effective bioformulation was Talc-T. harzianum followed by Peat-T. flavus, Talc-T. flavus and Rice bran-T. harzianum. In general, in both laboratory and greenhouse experiments, T. flavus was the most effective fungal antagonist followed by T. harzianum and T. asperellum. Based on the results of this study it is concluded that Trichoderma and Talaromyces employing different mechanisms might be potential biocontrol agents for controlling R. solani-induced sugar beet damping-off disease.     

7株拮抗细菌对蝴蝶兰叶基腐病菌的抑菌作用及其小区防效评价

以7株拮抗细菌对蝴蝶兰叶基腐病菌进行室内抑菌及小区防病试验。室内平板对峙法结果表明:以兰花内生枯草杆菌FJAT-9986的拮抗作用最强,其抑菌率为61.90%;JK-2抑菌率为50.44%;FJAT-8769的拮抗作用最弱,抑制率仅为34.09%。抑菌圈法复筛测定结果表明,菌株JK-2对蝴蝶兰叶基腐病菌的抑制作用最强,其抑菌圈直径为22.42 mm。拮抗细菌对病原菌孢子萌发实验结果表明,稀释50倍后,JK-2显示出强的抑制病原菌孢子的萌发作用,对蝴蝶兰叶基腐病的田间防效为76.7%,表明JK-2可作为田间防治的菌株。     

木霉菌株挥发性物质拮抗尖孢镰刀菌的效果及其鉴定

采用对扣法研究11株木霉菌株挥发性物质对尖孢镰刀菌的抑制效果,采用固相微萃取和气质联用技术对挥发性物质进行成分分析。结果表明,不同木霉菌株产生的挥发性物质的种类和含量差异较大。11株木霉共检出257种挥发性物质,均能检测到六甲基环三硅氧烷、八甲基环四硅氧烷两种化合物;聚类分析在相关系数距离为19时,可将11株木霉菌株归为三大类;257种挥发性物质可简化为3个主成分,包含30种挥发性物质,不同木霉挥发性物质主成分得分与拮抗尖孢镰刀菌的抑菌率之间极显著相关,表明11株木霉菌株对尖孢镰刀菌均有抑制作用。     

一个主栽粳稻品种的不同种植方式与稻纹枯病拮抗细菌的消长及种类的关系

 以晚粳品种丙96-42为试材对杭州临平镇条播、撒播和移栽方式下水稻纹枯病拮抗细菌的群体变化及种类进行了研究，从水稻不同生育期采集叶片、叶鞘和谷粒样本810份，获得细菌菌株7193个。结果显示，在每种种植方式下，稻株上的拮抗细菌数量都是叶鞘中最多，谷粒中最少。3种种植方式下水稻纹枯病拮抗细菌的群体数量基本上是随着稻株成熟而逐渐下降，在水稻6个生育期中，拮抗细菌出现的高峰因不同种植方式而有所差异。条播稻上拮抗细菌占细菌总量的比率从苗期到蜡熟期维持在3.6%～4.8%，各生育期之间无显著差异，但撒播和移栽稻上拮抗细菌所占的比率因不同生育期而有所不同。从539份纹枯病拮抗细菌中鉴定出8个属的14个种，不同种植方式与水稻纹枯病拮抗细菌的种类无明显差异。     

枯草芽孢杆菌A30菌株产生的拮抗肽的分离纯化与理化性质研究

平皿测试表明Bacillus subtilis A30菌株对多种植物病原真菌,例如水稻纹枯病菌(Rhizoctonia solani)、稻瘟病菌（Magnaporthe grisea）等有强烈抑制作用。在小区试验中A30菌液对水稻纹枯病也表现出了较好的防治效果。A30菌株培养液经硫酸铵沉淀、FPLC疏水色谱、HPLC反相色谱后,纯化得到一种拮抗活性物质,命名为P1。P1对热稳定,对蛋白酶不敏感;茚三酮反应呈阴性,用酸水解后茚三酮反应和双缩脲反应呈阳性。经LC-ESI-MS分析初步判断P1的分子量为1476.7 Da。     

小麦赤霉病拮抗菌的分离与鉴定

为寻找小麦赤霉病的强拮抗菌,探索生物防治的有效途径,对四川地区广泛种植的小麦品种川麦107的内生拮抗菌进行了研究.利用直接堆砌法培养6 d的结果表明,4个菌株对小麦赤霉病有明显的抑制作用,其中L16菌株的抑制作用明显高于分离的其他3个菌株,其平均抑菌圈达到2.2 cm.L16菌株对番茄灰霉病菌、油菜菌核病菌、炭疽病菌等都有拮抗作用,其发酵液在室外条件下仍保持良好的抑菌活性.根据培养特征和生理生化特性,初步鉴定L16菌株为链霉菌属的金色类群(Series Aureus).因此,L16菌株作为小麦赤霉病的生防材料,具有良好的开发应用前景.     

香蕉炭疽病优势拮抗酵母菌的分离及筛选

采用稀释平板法和平板划线法从8个不同品种的香蕉果实上分离纯化酵母菌,并将其与香蕉炭疽病原菌进行平板对峙培养及离体防效试验,以筛选优势拮抗酵母菌.结果表明:从香蕉果实上共分离纯化酵母菌329株;平板对峙培养后获得3株拮抗香蕉炭疽病原菌作用明显的酵母菌;离体防效试验筛选出1株拮抗效果较好且稳定的优势拮抗酵母菌Z-BR-16,以无菌水为对照,接种7d后,其1.0×108 CFU/mL菌液对香蕉炭疽病的抑制率为75.94％.