应用PCR技术扩增大肠杆菌热敏肠毒素基因

以一对合成的特异性寡核苷酸片段为引物，通过聚合物酶链反应，对不同血清型的ＥＴＥＣ以及１０４份件，猪及鸡源大肠杆菌分离中ＬＴ基因片段进行扩增。３株已知血清型ＥＴＥＣ，１３份牛源，６份鸡源，１０份猪源的大肠杆菌扩增后可见一条３１４ｂｐ的片段，而非ＥＴＥＣ大肠杆菌，沙门氏菌等扩增后未出现这一片段。     

益生地衣芽孢杆菌天门冬氨酸激酶Ⅱ基因的PCR扩增及序列分析

通过聚合酶链反应（ＰＣＲ） 扩增得到了益生地衣芽孢杆菌Ｈ８８ － ３ 株天门冬氨酸激酶（Ａｓｐａｒ ｔｏｋｉｎａｓｅ,ＡＫ） Ⅱ基因,并用ＡＢＩＰＲＩＳＭＴＭ ３７７ ＤＮＡＳｅｑｕｅｎｃｅｒ 进行序列测定,所得核苷酸序列及推导的氨基酸序列与枯草芽孢杆菌ＶＢ２１７ 株进行了比较,结果它们的同源性非常高。     

干细胞因子基因5''''旁侧1.42 kb调控序列的PCR扩增

通过ＰＣＲ扩增从基因组中获得长达１．４２ｋｂ人干细胞因子基因５’旁侧调控序殓，为后续表达调控研究做准备。方法：对常规ＰＣＲ缓冲液调节ＰＨ值到９．０，ＴａｑＤＮＡ聚合酶中加入适量的具有校正功能的ＴｌｉＤＮＡ聚合酶，退火温度升至６８℃，加大模板量，增加模板预变性时间，进行２５个循环。结果经过改变条件，成功地获得了所需的１．４２ｋｂ的ＳＣＦ调控序列片段。结论在一般的ＰＣＲ体系中汪厍适量的具有３’→５’外     

用PCR法快速确定SRY基因及性别

性别确定有重要的临床意义，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ），扩增Ｙ染色体上的性别决定区（ＳＰＹ基因）的开放阅读框架（２１７ｂｐ），可确定临床患者是否存在ＳＲＹ基因，帮助了解性别异常的机制。讨论了一例染色体核型为４６，ＸＸ伴ＳＲＹ基因的性反转的发生原因。     

干细胞因子基因5′旁侧1.42kb调控序列的PCR扩增

目的 :通过 PCR扩增从基因组中获得长达 1.42 kb人干细胞因子基因 (SCF) 5’旁侧调控序列 ,为后续表达调控研究做准备。方法 :对常规 PCR缓冲液调节 p H值至 9.0 ,Taq DNA聚合酶中加入适量的具有校正功能的 Tli DNA聚合酶 ,退火温度升至 6 8℃ ,加大模板量 ,增加模板预变性时间 ,进行 2 5个循环。结果 :经过改变条件 ,成功地获得了所需的 1.42 kb的 SCF调控序列片段。结论 :在一般的 PCR体系中添加适量的具有 3’→ 5’外切核酸酶活性和校正功能的Tli DNA聚合酶扩增稍长 DNA片段是经济可行的     

鸡传染性贫血病毒ORF2基因的扩增及酶切分析

根据鸡传染性贫血病毒ＣＵＸ－１标准毒株ＤＮＡ序列中ＯＲＦ２基因片段设计一对引物，对ＣＵＸ－１进行扩增，得到参小为６８４ｂＰ的片段，符合设计目的。以疑似ＣＩＡＶ的分离物ＳＲ４３感染鸡马立克氏病淋巴瘤细胞，提取全细胞ＤＮＡ，用该引物进行扩增，也得到同样大小的片段。     

生物克隆繁殖的基因逐步缺失探讨

英国山羊"多莉"及中国山羊"元元"是将体细胞的细胞核植入去核卵细胞内再移植到母体子宫内繁殖出来的新的山羊个体,俗称"无性繁殖",或者说是个体复制或"克隆"(clone).当然,这种复制无需"授精"这一步骤,但也不是百分之百由体细胞发育成新个体,至少需要卵子,虽然卵细胞作出了去除细胞核的处理,但仍然保留了细胞除细胞核以外的物质,如细胞质及其质体.其实,细胞质具有遗传特性已是不争的事实,新的个体的许多特性是由细胞质的遗传物质所控制,这就是所谓的母性遗传或称细胞质遗传.尽管如此,这些轰动一时的克隆新的个体,仍然存在着一些缺陷.据报道,"多莉"产生了不合情理的老化进程,以及体内器官较大等缺陷.因此,不得不使人们对这种克隆新个体产生疑问:为什么会有这样的情况?这样就会使我们联想到其它的无性繁殖或有性繁殖产生的一些现象.     

食品中金黄色葡萄球菌的PCR检测

建立一种快速聚合酶链反应(PCR)方法,用于食品中金黄色葡萄球菌的检测.针对金黄色葡萄球菌独有的SEA基因设计1对引物,在PCR体系中对相应片断进行扩增,最后通过电泳技术与阳性对照进行对比来判断阴阳性.结果表明,该方法检出率高,样品中模板DNA含量仅有0.05 pg即可检出金黄色葡萄球菌,24 h即可报告结果.因此,PCR方法是一种高效、敏感、特异性高的检测技术,可用于食品中金黄色葡萄球菌的快速检测.     

抗浪鱼MC4R基因的PCR扩增及序列分析

[目的]对抗浪鱼MC4R基因进行PCR扩增。[方法]采用PCR方法,依据鲫鱼的黑素促黑素受体-4（MC4R）基因保守区的核苷酸序列,采用引物设计软件,对抗浪鱼的MC4R基因设计出一对引物进行PCR扩增和纯化测序,并利用phylip软件对抗浪鱼和其他已知MC4R基因序列的鱼类构建基因进化树。[结果]抗浪鱼MC4R基因的扩增长度为1001bp。9种鱼类的MC4R核苷酸序列聚为2大类。其中,比目鱼单独聚为一类;斑剑尾鱼、舌齿鲈、白斑角鲨、斑马鱼、抗浪鱼、黑青斑河豚、中华多纪豚和红旗东方豚聚为一类。[结论]抗浪鱼与斑马鱼的亲缘关系最近,与比目鱼的亲缘关系最远。     

聚合酶链反应法进行Puumala病毒RNA扩增的研究

应用ＰＣＲ技术进行Ｐｕｕｍａｌａ病毒核酸片段的特异性扩增．将为进一步研究Ｐｕｕｍａｌａ病毒和相关病毒．以及检测此类病毒感染提供更加特异、敏感、快速的方法。依据已知的Ｐｕｕｍａｌａ病毒核酸序列，从Ｍ节段选出５对寡核苷酸作为ＰＣＲ反应中的引物，以Ｐｕｕｍａｌａ病毒ＲＮＡ作为模板。做ＰＣＲ。ＰＣＲ产物分别经凝胶电泳和核酸杂交的方法进行测定，结果表明。目的核酸片段得到了很好的扩增。     

木质素合成酶COMT基因的PCR扩增条件优化

以2×CTAB法从欧美杨107号嫩叶提取的基因组DNA为试材,建立了木质素合成酶COMT基因的PCR扩增体系。通过对PCR反应的影响因子——模板DNA用量、dNTP浓度、DNA聚合酶量、引物浓度和退火温度进行优化,最终建立了扩增COMT的PCR优化体系为:在20μL的反应体系中,dNTP为2.5 pmol,引物各为5 pmol,模板为5 ng,Red TaqTMDNA聚合酶1.25 U,退火温度为51℃,可以扩增出清晰的扩增带。     

伪狂犬病基因缺失疫苗研究进展

 伪狂犬病是由疱疹病毒科α-疱疹病毒亚科猪疱疹病毒I型的伪狂犬病毒引起的包括多种家畜和野生动物共患的一种急性传染病。猪是本病病毒的天然宿主和贮存者,本病可引起猪严重的繁殖障碍,给我国乃至全世界的养猪业造成巨大经济损失。采取安全有效的疫苗进行免疫预防,是控制该病的主要手段。     

利用降落PCR扩增KS基因

通过优化SDS法提取链霉菌(Streptomyces spiramyceticus)和2株由生物技术与资源利用国家民委——教育部重点实验室分离获得的放线菌D8和D18基因组DNA,同时应用降落PCR和普通PCR扩增酮基合酶基因(ketosynthase,KS)。结果表明,扩增出的特异性条带与目的基因片段长度一致,降落PCR法较普通PCR法扩增KS基因特异性更高。使用普通Taq酶,降落PCR程序能明显提高PCR的特异性,它可用于扩增普通PCR难以扩增的基因片段,或在假阳性难以去除的情况下提高PCR的特异性。     

稻田土壤DNA的提取及nifA基因的PCR扩增

为弄清茅贡米土壤微生物群落结构和生物固氮等代谢活动机制,采用试剂盒、SDS高盐和土壤预处理+SDS高盐3种土壤DNA提取方法,以从贵州茅贡米基地采集的土样提取的宏基因组DNA为模板,进行nifA基因的PCR扩增,比较了3种土壤DNA提取方法的效果.结果表明,试剂盒提取的DNA扩增到约200 bp和900 bp的nifA...     

PCR法扩增钙激活酶激活蛋白cDNA

钙激活酶激活蛋白是钙激活酶的激活蛋白, 可以促进钙激活酶活性的发挥, 从而促进肉的嫩化。采用PCR技术, 以山羊肝脏cDNA为模板经扩增得到钙激活酶激活蛋白(calpainactivator) 基因, 并进行了序列测定。该片段长1 017bp, 5′—端非翻译区长39bp, 3′—端非翻译区长567bp。编码区长411bp, 编码一个长137个氨基酸残基的蛋白质, 其理论分子量为14 298Da。与EdonMelloni等(1998) 报道的从牛脑中提取纯化的钙激活酶激活蛋白的氨基酸序列相比发现, 二者仅有五个位点不同。     

锯缘青蟹Sox基因的PCR扩增

SRY基因(sex-determining region of the Y chromosome)是人类及哺乳动物睾丸决定因子TDF(testisdetermining factor)的最佳候选基因。SRY蛋白含有204个氨基酸,其中1个约79个氨基酸区域即HMG盒(high mobility group box)是SRY基因编码蛋白质的唯一功能区。由于SRY的发现,人们进而发现了1个庞大的与性别决定有关的SRY盒-Sox(SRY-related HMG box gene)基因家族。锯缘青蟹是我国重要的海洋经济蟹类之一,其性染色体和性别决定机制仍处于进化的早期阶段,在分子水平上探讨其性别决定机制尚不多见。通过采用PCR技术,以特异扩增人SRY基因HMG盒保守区的1对兼并引物,扩增了锯缘青蟹基因组的Sox基因。结果表明锯缘青蟹雌雄个体与人一样,均能扩增出1条大小约为216bp左右的基因片段,显示出该基因在进化上的高度保守性,为探索锯缘青蟹的性别决定机制及Sox基因的进化提供了分子资料。     

马立克氏病病毒Ⅰ型疫苗毒克隆株pp38基因同源物的扩增和克隆

用ＰＣＲ技术,从马立克氏病病毒（ＭＤＶ）ＣＶ１９８８／Ｃ株感染的鸡胚成纤维细胞（ＣＥＦ）基因组ＤＮＡ中扩增出含起始密码子的ＭＤＶｐｐ３８基因同源物编码序列,在以Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ标记的ｐｐ３８基因作为探针,在Ｓｏｕｌｔｈｅｒｎ ｂｌｏｔ中,该探针能识别该ＰＣＲ扩增片段。将该ＰＣＲ扩增片段在ＢａｍＨ Ｉ和ＰｓｔＩ位点克隆进ｐＵ１８质粒载体,酶切分析筛选到含ｐｐ３８基因同源物的重组质粒并进行了全序     

白来航鸡干扰素刺激基因12 PCR扩增

本试验拟克隆白来航鸡干扰素刺激基因12(ISG12),并对其进行生物信息学预测分析.根据ncbi发表的原鸡ISG12基因序列(登录号:BN000223.1),设计ISG12基因特异性扩增引物.提取白来航鸡的肝脏、脾脏RNA,并反转录为cD-NA,利用RT-PCR技术扩增白来航鸡ISG12基因序列,并利用生物软件对其编码...