应用间接ELISA和AGID检测雏鸡血清与卵黄中禽流感母源抗体的研究

作者对来自3个养鸡场父母代种鸡进行过禽流感H5亚型灭活苗紧急免疫接种的3批次共251只1日龄雏鸡,应用间接酶联免疫吸附试验（ELISA）与琼脂凝胶免疫扩散试验（AGID）进行了血清与卵黄中禽流感母源抗体符合性的比较试验。试验结果表明：应用ELISA法检测1日龄雏鸡卵黄中禽流感母源抗体快速、简易、准确、敏感、检出率高,适用于口岸检疫、国内引种检疫及疫情监测等方面。     

禽流感抗体斑点—ELISA诊断技术的研究

以混合纤维素酯微孔滤膜为固相载体,用自制的禽流感全病毒抗原和酶标抗体,建立了禽流感抗体斑点 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 检测法,其抗原最适包被量为 ０．０６μｇ／点;血清抗体最佳稀释度为 １１００;酶标抗体作 １２００ 稀释;出现明显清晰的斑点者判为禽流感抗体阳性。该方法对 Ｓ Ｐ Ｆ鸡血清及新城疫、传染性法氏囊病等其它 １１ 种鸡疫病阳性血清均为阴性,对不同亚型特异性的禽流感病毒（ Ａ Ｉ Ｖ）分型血清、琼扩（ Ａ Ｇ Ｐ）阳性血清及血凝抑制（ Ｈ Ｉ）阳性而 Ａ Ｇ Ｐ疑似的血清样品均呈阳性;对人工接种 Ａ Ｉ Ｖ 的 Ｓ Ｐ Ｆ鸡第 ３ 天即能检出抗体阳性,第 ５～１１７ 天可全部检出。与间接 Ｅ Ｌ Ｉ Ｓ Ａ 法比较,不仅其特异性、敏感性、重复性相一致,而且结果可用肉眼判定,更适合现地禽流感抗体监测及流行病学调查。     

自主活动鸟类禽流感及新城疫的生态学与流行病学调查分析

在2004年初H5亚型禽流感在中国内地引起暴发前后，于湖北、广西二疫区市县的生态系中，自健康的鹰、鸽子、野鸭和鹌鹑中采集了54份血清，应用血凝抑制试验（HI）对其进行了血清学检测，并将获得的血清学检测数据进行了统计学分析。分析结果显示，在总共采集的54份血清样品中，抗新城疫病毒（NDV）抗体、抗It6亚型禽流感病毒（H6）抗体、抗H9亚型禽流感病毒（H9）抗体、抗H5亚型禽流感病毒（H5）抗体阳性率分别为64．8％、64．8％、75．9％、29．6％。推断这一时期新城疫病毒（NDV）、H6亚型禽流感病毒（H6）、H9亚型禽流感病毒（H9）和H5亚型禽流感病毒（H5）共循环于该生态系中，其中新城疫病毒、H9、H6亚型禽流感病毒长期、稳定循环于该生态系中，为该生态系主要流行血清型。血凝抑制试验检测结果发现，抗H5亚型禽流感病毒抗体效价较低，最高仅为640，其阳性率为29．6％，推断其可能为新近传入的病毒或新近重组变异出现的新病毒、与该次流感暴发相关的新病毒，这一推断还有待于通过对病毒基因序列的分析而做进一步验证：另外，新城疫病毒在该生态系中的稳定循环，构成了对家禽持久、潜在的威胁。对于自1994年以来，长期稳定循环于我国生态系及家禽中的H9亚型禽流感病毒则仍然是以G9-like为优势亚组。本研究结果还提示我们，对我国自主活动鸟类的生态系中抗禽流感病毒抗体的监测是预警、预报我国家禽流感暴发的有效途径，也是十分必要的，同时，血清学的检测结果为我们进一步的分子水平的分析研究提供了明确的靶向。     

免疫层析试纸条(ICS)检测禽流感抗体

以纯化的禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）核蛋白作为捕捉抗原，金标兔抗鸡抗体作为金标二抗，建立检测禽流感血清抗体的胶体金免疫层析试纸条（immunochromatographic strip, ICS）。对标准阳性血清不同滴度进行检测，ICS试验的敏感性高于琼脂扩散试验（AGP）。特异性试验证实，禽流感的ICS试验与新城疫（ND）、传染性支气管炎（IBV）、鸡传染性法氏囊病（IBD）及减蛋综合症（EDS-76）均无交叉反应。同时，用ICS试验和HI试验检测105份鸡血清，两者具有较好的符合性。结果认为：禽流感ICS具有快速简便、特异、灵敏等优点。     

规模化肉种鸡场新城疫和禽流感带毒监测与抗体检测研究

为了了解规模化养殖模式下鸡群新城疫和禽流感带毒情况和抗体滴度,从2007年9月~2008年8月,对规模化养殖场肉种鸡定期进行新城疫和禽流感带毒监测和抗体检测。每月采集鸡群气管和泄殖腔棉拭子各30份（抽检率0.3%）进行新城疫和禽流感病毒监测,每2周采集30份血样（抽检率0.3%）进行新城疫和禽流感抗体检测。研究结果显示,监测鸡群从进雏到淘汰未发现新城疫和禽流感病毒感染;从6.5周龄开始,鸡群新城疫和禽流感(H9亚型)抗体一直维持在免疫保护临界值以上,比较之下,禽流感（H5亚型）抗体上升较慢,且滴度比H9低（2～4）log2。     

浅析影响禽流感血凝抑制试验的因素

禽流感是由正粘病毒科A型流感病毒引起的一种禽类烈性传染病，对养禽业及人类健康都可产生严重危害。对家禽进行禽流感疫苗预防接种是我国防治禽流感的主要措施之一。对禽流感抗体水平的监测一般采用血凝和血凝抑制试验（HA—HI试验），其技术规范依照（GB/T18936—2003）进行。该试验方法具有经济、快速可靠、操作简便和对抗体水平进行量化的优点，已在各地动物防疫监督机构、出入境检验检疫部门和养殖场广泛使用。     

三种检测禽副粘病毒2型(PMV-2)抗体方法的建立及其与HI方法的比较

建立了检测血清中禽副粘病毒2型（PMV-2）抗体的间接免疫荧光试验（IFA）、间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）以及斑点酶联免疫吸附试验（Dot—ELISA）方法，并将三种方法同血凝抑制试验（HI）进行了比较。结果表明，建立的IFA、间接ELISA和Dot—ELISA等三种抗体检测方法其敏感性、特异性均很好，与HI方法相比，敏感性也大大增强。     

禽流感灭活疫苗（H5N2亚型，D7株）与同类产品对鸭和鸡免疫后血清学比较试验

为评价禽流感灭活疫苗（H5N2亚型,D7株）与同类产品对不同日龄鸭及SPF鸡的免疫效果,将该疫苗与国内两家禽流感生产企业的2批重组禽流感灭活疫苗（H5N1亚型,Re-5株）分别免疫鸭和SPF鸡,免疫后14、21、28、42 d采血测定各免疫组的HI抗体效价。禽流感灭活疫苗（D7株）以0.25 mL剂量免疫鸭后14 d,所有免疫组鸭的HI抗体几何平均滴度（GMT）即能达到6㏒2以上,28 d HI抗体GMT达到峰值9.1㏒2,而两批重组禽流感灭活疫苗以0.5 mL剂量免疫鸭21 d后HI抗体GMT均没有达到6㏒2;两种疫苗分别免疫21日龄SPF鸡21 d后各免疫组的HI抗体GMT基本相似。试验结果表明,禽流感灭活疫苗（D7株）对鸭的免疫效果要明显优于重组禽流感灭活疫苗(Re-5株),而对鸡的免疫效果相似。     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

2019年黑龙江省兽医实验室检测能力比对

2019年黑龙江省动物疫病预防与控制中心对全省13个市（地）、67个县（市、区）的80个兽医实验室开展了检测能力比对，比对项目包括禽流感抗体检测、猪瘟抗体检测、布鲁氏菌抗体检测、非洲猪瘟病毒核酸检测。结果显示，6个市级实验室和14个县级实验室比对结果正确率为100%，禽流感抗体、猪瘟抗体、布鲁氏菌抗体、非洲猪瘟病毒核酸检测项目结果正确率分别为71.2%、97.3%、73.3%、97.0%。比对结果客观反映了全省兽医系统实验室检测能力，提示应进一步加强实验室建设，加大资金投入，提升技术人员业务能力，规范实验室检测流程。     

肥东县某家禽交易市场新城疫、禽流感抗体监测分析

为了解流通领域家禽新城疫的免疫效果和禽流感免疫效果及带毒情况,2013年7-9月,在肥东县某家禽交易市场,采集不同来源、品种和养殖模式家禽的血样和对应棉拭子样品（咽喉、泄殖腔双份）600份,采用微量红细胞凝集抑制试验（HI）分别进行新城疫和禽流感抗体检测,检测结果：H5亚型高致病性禽流感平均免疫抗体合格率54.39%;新城疫平均免疫抗体合格率86.92%;H7亚型禽流感抗体结果均为阴性。结果表明规模场和农户新城疫的总体免疫效果要好于禽流感;散养户禽流感（H5亚型）、新城疫和水禽禽流感（H5亚型）的免疫效果不好;家禽禽流感（H7亚型）的感染率很低,家禽交易市场应坚持做好常规消毒和病死家禽的无害化处理工作。     

新城疫与禽流感(H9亚型)二联油乳剂灭活苗免疫效力试验

用新城疫病毒（NDV）LaSota株与禽流感病毒（AIV）F株尿囊腔接种非免疫难胚，取72－120小时死亡鸡胚液。灭活后分别制成新城疫油乳剂灭活苗、禽流感（H9亚型）油乳剂灭活苗、新城疫与禽流感（H9亚型）二联油乳剂灭活苗，免疫7日龄非免疫雏鸡，一周后开始检测ND、AI血凝抑制（HI）抗体体，两周时各免疫组鸡的抗体效价都达到6log2以上，3周达到高峰，后维持在较高水平达45天以上，在65日龄进行攻毒，结果单苗和二联苗免疫鸡全部得到保护。     

禽流感微量红细胞凝集抑制试验探讨

禽流感微量红细胞凝集抑制试验（HI检测），因为其微量、快速、可靠，能够处理大量的样品，并能在短时间内报告禽类血样的禽流感抗体滴度水平，因此成为出入境检验检疫部门基层实验室常用的方法。禽流感HI检测结果的准确与否，对于出入境检验检疫部门及时掌握禽群的禽流感抗体水平，提高对辖区内注册活禽养殖场的禽流感疫病的监控，保证供港澳活禽的顺利出口至关重要。笔者在长期的禽流感HI检测中，积累了如下经验，愿与大家进行交流探讨。     

和县肉鸭AI母源抗体消长规律试验

安徽和县肉鸭生产规模较大，据监测显示：肉鸭禽流感（AI）血清抗体水平普遍低，多数循环抗体水平存保护线以下，保护力很低，免疫接种达不到预期的免疫效果。为此，我们对和县樱桃芥肉鸭禽流感母源抗体水平的消长规律进行了研究．为制定合理的免疫程序提供参考依据。     

不同禽流感病毒含量的新-流二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平的监测

将未浓缩的新城疫抗原分别与未浓缩的、浓缩3倍、浓缩6倍的禽流感抗原混合,并制备成三组鸡新城疫、禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗（简称新-流二联灭活疫苗）,分别免疫21日龄SPF鸡,每羽0.3 mL,同时设置未免疫的空白对照组,免疫组与对照组均在免疫前及免疫后7、14、21、28、35 d进行采血,检测新城疫和禽流感抗体。结果发现,各免疫组在免后不同日龄的新城疫抗体基本一致,禽流感病毒抗原浓缩倍数越高（即禽流感病毒含量越高）的新-流二联灭活疫苗,免后14、21 d的抗体也越高;从免后21 d开始,各免疫组的禽流感抗体水平差异逐渐减小,免疫后禽流感抗体水平的高低可以反映该疫苗的免疫效果。试验结果表明,该疫苗可以通过浓缩提高抗原病毒含量的方法来提高免后早期抗体水平,取得良好的早期免疫效果。     

应用间接血凝试验监测猪瘟抗体

应用间接血凝试验监测猪瘟抗体石仕权（四川省内江市东兴区畜牧中心）在猪瘟抗体监测中，通常采用免体中和试验（ＳＮ），该试验方法需要大量的人力、物力、财力。常给监测工作带来诸多困难。为寻求简便、灵敏的监测手段。我们试用间接血凝（ｗＡ）试验监测猪瘟抗体，并以...     

新疆商品代AA肉鸡接种禽流感疫苗的免疫效力观察

分别应用禽流感灭活疫苗（H5亚型,N28株）、禽流感（H5N2＋H9N2）二价灭活疫苗（N28株＋SD696株）、禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1Re-1＋H9N2Re-2株）和禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL—H5株）4种禽流感疫苗,接种不同批次的商品代AA肉鸡,通过血凝抑制试验测定免疫后不同时期的抗体水平,确定各种疫苗对商品代从肉鸡的免疫效果。结果表明,在免疫20d后,禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1Re－1＋H9N2Re－2株）刺激肉鸡群产生的HI抗体均高于禽流感灭活疫苗（H5亚型,N28株）、禽流感（H5N2＋H9N2）二价灭活疫苗（N28株＋SD696株）和禽流感－新城疫重组二联活疫苗（rL—H5）．差异显著（P〈0．05）。     

商品代AA肉鸡接种禽流感疫苗的免疫效力观察

分别应用不同禽流感疫苗接种不同批次的商品代AA肉鸡,通过血凝抑制试验测定免疫后不同时期的抗体水平,确定各种疫苗对商品代AA肉鸡的免疫效果。结果表明,在免疫20天后,禽流感（H5＋H9）二价灭活疫苗（H5N1 Re-1＋H9N2 Re-2株）刺激肉鸡群产生的HI抗体均高于禽流感灭活疫苗（H5亚型,N28株）、禽流感（H5N2＋H9N2）二价灭活疫苗（N28株＋SD696株）和禽流感-新城疫重组二联活疫苗（rL-H5株）,与后三种疫苗接种商品代AA肉鸡的免疫抗体相比差异显著（P〈0.05）。     

血凝抑制(HI)抗体水平监测准确性的体会

禽流感（AI）、新城疫（ND）是威胁养鸡业发展较为严重的一种疾病。该病在全国范围内普遍存在。血凝抑制（HI）试验是监测AI、ND免疫状态的一种简便、快速的血清学方法。本人从事此项工作十余年，为了提高鸡禽流感、新城疫HI抗体测定的准确性，对其若干影响因素作了分析和试验，提出几点体会供参考。     

对某鸡场不同日龄鸡禽流感（H5亚型）免疫效果的评价

为评价某鸡场免疫鸡群鸡禽流感（H5亚型）的免疫效果我们用微量HA、HI试验对210份不同日龄鸡血清进行了检测.结果表明：1#（306天）、2#（76天）、3#（324天）、4#（186天）、6#（304天）、7#（243天）、8#（236天）鸡舍鸡群禽流感（H5亚型）抗体平均滴度分别为5lg2、9lg2、4.3lg2、4.2lg2、7.5lg2、7lg2、2.2lg2.禽流感抗体滴度最高为10lg2,平均滴度为5.61lg2,抗体滴度最低为0.