高质量的滇重楼胚总RNA的提取方法研究及LD_PCR检测

探讨一种有效提取滇重楼胚总RNA方法。以滇重楼的胚为实验材料,将常规的SDS提取植物总RNA的方法做了改进：在RNA提取缓冲液中加入SDS的步骤上进行了调整,结合异丙醇和醋酸钠室温沉淀能更有效的去除多糖;醋酸-醋酸钠的缓冲体系维持提取液较低pH值,有效抑制RNA酶活性;将SDS的浓度提高到5%并且结合酸酚/氯仿抽提去除蛋白质污染,首次建立了一种简单有效的从滇重楼胚中提取总RNA的方法。该方法所提RNA的A260/A230均大于2.0,A260/A280的值为1.8~2.0,电泳条带清晰,RNA完整性好。利用该方法提取的滇重楼幼胚总RNA具有很高的纯度和质量,可以满足后续LD-PCR及文库构建等分子生物学研究。     

一种有效的菊花总RNA提取方法

菊花组织或器官中含有大量的酚类、多糖、蛋白质等次生代谢物质,影响了菊花总RNA的提取质量。本研究用改良TRIZOL法提取菊花不同器官总RNA,并用凝胶电泳、紫外分光光度计对提取的总RNA质量和完整性进行检测,并对叶片总RNA进行反转录,通过RT-PCR扩增了菊花管家基因Actin的部分片断。结果表明,采用改良TRIZOL法提取的RNA条带清晰、完整性好、质量高,其中A260/A280比值在2.08~2.19。通过RT-PCR从叶片中扩增出了目的基因cDNA片断。该方法是一种快速、有效的提取菊花总RNA的方法;该方法适用于根、茎、叶、花等器官或组织总RNA的提取,可作为菊花不同组织和器官总RNA提取的通用方法。     

玛咖贮藏根总RNA提取方法的比较

为了筛选出适合玛咖贮藏根总RNA的提取方法,本研究比较了改良异硫氰酸胍法、CTAB法、Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法等4种方法对玛咖根总RNA提取的效果。结果表明:改良异硫氰酸胍法提取效果不理想,CTAB法存在DNA污染;Trizol法和E.Z.N.A.TM Plant mi RNA Kit试剂盒法能有效去除多糖,提取出质量高、完整性好的RNA,OD260/OD280值大部分都在1.8~2.0之间,但Trizol法提取RNA的平均得率(156.3μg/g)是E.Z.N.A.TMPlant mi RNA Kit试剂盒法提取RNA的平均得率(48.6μg/g)的3.2倍,说明Trizol法可作为玛咖根总RNA提取的首选方法。     

花生总RNA提取方法比较研究

通过对2种RNA提取方法（改良CTAB法和Trizol法）和2种RNA提取试剂盒（AXYGEN总RNA提取试剂盒和TIANDZ总RNA提取试剂盒）进行比较研究,以期获得质量较好的花生不同器官的总RNA,为后续分子生物学实验奠定基础。实验结果表明,与TRIZOL法及2种RNA提取试剂盒相比,改良CTAB法提取的花生总RNA完整性好,得率高,稳定性好,并且无DNA污染,可以进一步满足半定量RT-PCR等实验需要。     

不同方法提取绿豆总RNA的比较和改进

利用CTAB法、SDS法、Trizol法,从绿豆叶片中提取了总RNA：利用改进的GT法从绿豆叶、茎和子叶中提取了总RNA,提取结果通过凝胶电泳和紫外吸光光度值检测。结果显示：用改良的GT法提取的总RNA,凝胶电泳图上28S条带是18S条带亮度的两倍以上：而用其它3种方法提取的总RNA电泳条带不如GT法提取的总RNA清晰。用GT法从绿豆叶片中提取的总RNA的A260/A280值为1．94,可以用于RT-PCR、DDRT-PCR和Northern杂交等实验。通过RT-PCR,得到绿豆钙调蛋白基因约450bp,从而进一步检验了提取的总RNA的质量。改良的GT法可以认为是一种简便、快速的提取绿豆RNA的方法。     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

栀子高质量总RNA的提取

利用改进的高盐高pH值法和EASYspin植物RNA快速提取试剂盒,从富含次生代谢产物的栀子叶片和果实中提取总RNA。用紫外分光光度法和1%非变性琼脂糖凝胶电泳检测总RNA质量,0.7%非变性琼脂糖凝胶电泳检测反转录产物质量,利用RT-PCR反应检测反转录产物用于基因扩增的有效性。结果表明,高盐高pH值法提取的栀子果实总RNA,试剂盒法提取的栀子叶片总RNA产量均较高,28S和18S条带清晰,28S条带亮度是18S条带的2倍,且A260/A280在1.9~2.0;以提取的RNA为模板反转录的cDNA长度范围较广(250~5000 bp);上述反转录获得的cDNA均能够成功用于60S核糖体蛋白L18A基因片段的扩增。综上所述,利用高盐高pH值法提取栀子果实总RNA、利用EASYspin植物RNA快速提取试剂盒提取栀子叶片总RNA,效果最好。本研究成功建立了从栀子果实和叶片中提取高质量总RNA的方法。     

紫叶李叶片总RNA提取方法的改进与比较

从紫叶李叶片中提取高质量RNA是研究叶色相关基因表达调控的必要前提。实验室常用的RNA提取方法和RNA提取试剂盒有很多种,每种方法只适合某些组织材料。对彩叶植物来说,组织中的次生代谢物含量很高,叶片中的花色素苷、多糖更是高质量核酸提取过程中难以去除的干扰成分。本文利用CTAB法、SDS法以及Trizol法从富含花青素类物质的彩叶植物紫叶李叶片中提取总RNA。电泳检测显示:CTAB法提取的总RNA其28S、18S条带清晰,紫外光谱分析A260/A280比值为1.93,A260/A230比值为2.04,RNA产量可达141μg·g-1·FW-1;而且通过RT-PCR扩增出了目的基因的cDNA片段,说明利用此法分离的RNA纯度和浓度符合反转录PCR的要求,而且能去除色素分子的干扰。SDS法提取的总RNA产量较低,且纯度不高。而Trizol法很难从紫叶李中提出完整的RNA。因此CTAB法是一种从富含花青苷的紫叶李叶片中有效提取高质量总RNA的方法。     

火炬松总RNA提取方法的比较

植物总RNA提取的传统方法有很多种,如CTAB法,TRIzol法和SDS法。为了方便快捷的提取出高质量的植物总RNA,目前越来越多的植物总RNA提取的试剂盒被开发了出来,但不同的提取方法对不同植物组织的RNA提取效果不一。为了筛选出适合火炬松总RNA的提取方法,本研究以火炬松的韧皮部和较老的针叶为材料,比较了改良的CTAB法、Column Plant RNAout 2.0提取试剂盒、E.Z.N.A.TMPlant RNA Kit、Hi Pure Plant RNA Mini Kit、EASYspin Plus Plant RNA Kit和Mag Zol TM Reagent法提取总RNA的效果,结果表明:改良CTAB法对韧皮部和针叶均有最好的提取效果。Mag Zol TM Reagent法和EASYspin Plus Plant RNA Kit没能提取到完整的RNA,其他试剂盒的提取效果均不十分理想。     

适用于转录组测序的毛葡萄叶片总RNA提取方法筛选

毛葡萄叶片中含有大量多糖、多酚等多种次生代谢物,严重影响RNA提取质量,筛选从毛葡萄叶片中提取高质量RNA的方法是开展相关分子研究的基础。本研究采用改良CTAB法、改良SDS/酚法和三种试剂盒法,筛选适合转录组测序的提取毛葡萄叶片总RNA的方法。结果显示,五种方法均可以获得毛葡萄叶片总RNA,但在纯度和完整性上差别较大。改良CTAB和改良SDS/酚法提取的总RNA OD_(260)/OD_(230)比值小于1.8,试剂盒A法提取的总RNA在纯度和完整性上均可以满足转录组测序要求,试剂盒B法和试剂盒C法提取的总RNA降解严重。相比其他四种方法,试剂盒A法提取的毛葡萄叶总RNA质量更好,在纯度和完整性上均能满足转录组测序及其他分子生物学实验的要求。     

羊蹄甲果荚中总RNA提取的新方法

高质量RNA的获得是开展羊蹄甲分子生物学研究的基础,但要获得高质量的植物总RNA比较困难,RNA的提取方法会因植物材料的不同而有较大差异。目前已有多种从植物组织中提取RNA的方法。但是由于羊蹄甲中的次生物质含量较高,这些常用方法并不适用于羊蹄甲RNA的提取。本文介绍一种羊蹄甲果荚中总RNA的提取方法,它可以有效的排除羊蹄甲组织中大量存在的多酚类和多糖类物质的干扰。所得RNA样品经紫外分光光度计检测和1%琼脂糖凝胶电泳分析证明无明显降解,且具有较高的纯度。获得的RNA样品在纯度和浓度上都可以满足RT-PCR,Northernblot和cDNA文库构建等分子生物学实验的要求。本方法尤其适用于多酚和多糖含量较高的植物组织的RNA提取,且试剂简单经济,试验结果稳定,重现性强。     

血红鸡爪槭叶片总RNA提取方法的比较研究

血红鸡爪槭叶片中富含多糖、多酚物质,严重影响了RNA提取纯度和质量。为了获得适宜血红鸡爪槭叶片总RNA提取的方法,采用柱式植物RNAout法、TRIZOL法和改良CTAB法3种提取方法对其叶片总RNA提取效果进行比较分析。结果显示,采用柱子法提取获得的总RNA产率最高,但是有DNA污染;TRIZOL法提取的总RNA OD260∕OD280为1.65,可能有多糖和酚类物质的污染,并且产率最低;改良CTAB法提取的总RNA纯度很高,OD260/OD280平均值在2.0左右,产率在上述两种方法之间,电泳图清晰,而且改良CTAB法提取的总RNA,经RT-PCR获得了清晰的特异性条带。表明改良CTAB法提取的总RNA纯度和产率高,完全可以满足进一步分子生物学研究的需要,是血红鸡爪槭叶片总RNA提取的适宜方法。     

甘蔗种质总RNA提取方法的研究

甘蔗是重要的糖料及能源作物之一。甘蔗种质RNA的提取是甘蔗分子生物学研究的前提。本实验是以成熟甘蔗的叶片为材料,通过对前人的植物RNA提取方法进行改良,寻求最佳的甘蔗总RNA提取方法。通过改良最后得到的异硫氰酸胍法Ⅲ具有成本低、操作简单、省时等特点。用该法提取得到的甘蔗总RNA经琼脂糖凝胶电泳可获得28S、18S和5S rRNA3条带,并且28S rRNA的亮度大于18S rRNA的亮度。表明该方法提取的RNA完整性好,纯度高。另外对所得部分甘蔗种质的总RNA进行RT-PCR检测,可特异扩增出目标片段,说明用异硫氰酸胍法Ⅲ提取的甘蔗种质总RNA,可以直接用于后续的分子生物学试验。     

可口革囊星虫体壁总RNA提取的有效方法

为了从可口革囊星虫体壁中提取高质量的RNA,以便深入开展分子生物学研究。采用改良Trizol法、Trizol法和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法3种方法提取可口革囊星虫体壁中总RNA,并通过琼脂糖凝胶电泳比较不同方法提取总RNA的效果。结果表明：改良Trizol法提取的总RNA经电泳后能看到清晰完整的28S rRNA、18S rRNA和5S rRNA条带,无拖尾现象;而Trizol法和CTAB法提取的总RNA电泳条带完整性较差,缺少28S rRNA。传统的Trizol法和CTAB法不适用于可口革囊星虫体壁总RNA的提取;改良Trizol法提取的总RNA电泳条带清晰、完整性好,质量符合cDNA合成、RT-PCR扩增等后续实验要求,适用于提取可口革囊星虫体壁总RNA。     

几种植物材料中总RNA的提取

用改良前后的异硫氰酸胍一步法、Trizol法和CTAB-异硫氰酸胍法,从多糖和色素较少的豌豆、水稻、构树和华南蕨绿叶,色素较多的红绒球、蟛蜞菊和红背桂花叶,以及富含多糖的香蕉果肉等几种植物材料中提取RNA。发现一步法对豌豆、水稻和蟛蜞菊叶片总RNA的提取均有很好的效果。Trizol法也有好的效果,但如果提取缓冲液的pH达6．0,提取的RNA便有DNA的污染,且该污染随pH增加而增加。对于富含多糖的香蕉果肉,一步法和CTAB异硫氰酸胍法的效果均不理想;改良后的一步法中增加了乙醚去除多糖并获得了较好的效果。本文还提出了判断RNA的质量的标准。     

三种改良提取长雄野生稻根叶总RNA方法的比较研究

为探讨野生稻总RNA的提取,笔者尝试了改良SDS、CTAB和TRIzol三种提取方法分别提取长雄野生稻根和叶总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和分光光度计检测,比较这三种方法的提取效果.结果表明,改良SDS、CTAB法提取的根总RNA的电泳条带清晰,几乎没有污染,无明显降解,OD260/OD280在1.75～2.0之间,能满足一般的分子操作要求,但所提取的叶片总RNA则有明显的DNA污染和少量的蛋白质污染.用TRJzol法提取的总RNA,无论是根还是叶片,均有不同程度蛋白质污染.若要进行下一步的分子操作,需先进行RNA的纯化,以去除蛋白质.可见改良SDS、CTAB法提取根的总RNA是首选.     

板栗子叶总RNA提取方法研究?

为了获得板栗子叶总RNA提取的理想方法,为后续的分子生物学研究打下基础,以板栗幼果子叶为材料,采用改良CTAB法、硼砂-CTAB法、酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒共6种方法提取板栗子叶总RNA。结果表明,除硼砂-CTAB法外,其他5种方法均能获得板栗子叶总RNA。但是,与酚-SDS法、皂土法和2种植物总RNA提取试剂盒相比较,改良CTAB法提取的板栗子叶总RNA完整性好,纯度高,且无DNA污染,能够满足cDNA-AFLP等分子生物学研究的要求。     

番茄果实总RNA提取与cDNA-AFLP

从番茄果实中提取高质量的RNA是对调控番茄果实品质、生长发育和代谢等相关基因进行分子生物学研究的基础。实验表明,已报道的相关RNA的提取方法,即使利用已经报道的从其它果实中成功提取出高质量RNA的方法,也不能从番茄果实中分离出高质量的RNA。 这主要是由于番茄果实中多糖、多酚类物质及其他次生代谢,在RNA提取过程中与RNA共同沉淀,从而影响RNA的产量和质量。目前,商业化的RNA抽提试剂盒无法直接用于番茄果实RNA的提取。笔者采用4种方法对番茄果实总RNA进行提取,筛选出一种最佳的改进方法。可以从不同时期番茄果实中成功提取高质量的RNA,产量可达401.6--840.2μg/g,通过测定A260/A230和A260/A280 的比值表明,该方法排除了番茄果实中蛋白、多糖、以及多酚等次生物质的干扰,提取到了高质量番茄果实总RNA;1.2%琼脂糖电泳结果表明RNA在整个提取过程中结构完整,未发生明显降解;所提取的RNA用于cDNA-AFLP等到了清晰的表达图谱,这表明其质量完全可满足下一步分子生物学研究。