丁酸钠对IPEC-J2细胞β-防御素表达的调节作用

选用不同浓度的丁酸钠对体外培养的IPEC-J2进行刺激试验,利用实时荧光定量PCR从m RNA水平分别研究不同浓度丁酸钠刺激猪小肠上皮细胞后pBD1、pBD2、pBD3基因表达水平的差异,以期研究丁酸钠对猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)β-防御素(p BD)表达的调节作用。试验结果表明,丁酸钠对pBD1、pBD2、pBD3基因调控作用存在差异,丁酸钠对pBD3基因调控最为显著,不同浓度丁酸钠均能上调pBD3 mRNA的表达,并呈现一定的剂量依赖性。     

不同培养条件对乳酸菌黏附猪小肠黏膜上皮细胞的影响

为了研究不同培养条件对乳酸菌黏附猪小肠黏膜上皮细胞的影响,试验采用体外细胞培养方法,观察乳酸杆菌在不同条件下(如p H值、温度、离子浓度)黏附猪小肠黏膜上皮细胞的能力。结果表明:p H值为6时,小肠黏膜上皮细胞黏附乳酸杆菌数为(15.60±0.58)个,较其他p H值时多;与其他温度(30℃和42℃)相比,37℃时猪小肠黏膜上皮细胞黏附乳酸杆菌数最多,为(22.44±1.05)个/细胞;与其他浓度相比较,猪小肠黏膜上皮细胞黏附乳酸杆菌数最多的是,2 mmol/L Ca2+时为(11.36±2.36)个/细胞,2 mmol/L Mg2+时为(18.75±1.37)个/细胞,0.005 mmol/L Fe2+时为(22.48±2.78)个/细胞,0.000 5 mmol/L Cu2+时为(20.24±2.35)个/细胞,0.002 5 mmol/L Zn2+时为(17.48±1.59)个/细胞;不同浓度的S2-对乳酸杆菌黏附小肠黏膜上皮细胞黏附性影响不显著;0.005 mmol/L I-时小肠黏膜上皮细胞黏附细菌数为(19.68±1.25)个/细胞,其他浓度I-对乳酸杆菌的细胞黏附性影响不显著。说明乳酸杆菌与猪小肠黏膜上皮细胞黏附的最佳酸碱度、温度分别为p H值为6~7、37~42℃;Ca2+、Mg2+、Fe2+、Cu2+、Zn2+、I-等6种离子的最适浓度分别为2,2,0.005,0.000 5,0.002 5,0.005 mmol/L。     

亮氨酸对猪乳腺上皮细胞营养转运的影响及调控机制

本试验采用猪乳腺上皮细胞作为体外模型探讨亮氨酸对乳成分合成的影响及其分子机制。分别用0（对照组）、1、5和10 mmol/L的亮氨酸处理猪乳腺上皮细胞24和48 h后,检测细胞活力,分析乳蛋白、氨基酸转运载体、葡萄糖转运载体及脂肪酸转运载体的基因表达情况,并进一步检测哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）信号通路中关键蛋白mTOR和核糖体蛋白S6激酶1(S6K1)的表达和磷酸化情况以期探索体外亮氨酸调控乳成分合成的机制。结果显示：不同浓度亮氨酸处理48 h后细胞活力均较对照组显著提高（P <0.05）,且以亮氨酸浓度为1 mmol/L时细胞活力最高。与对照组相比,1 mmol/L组的αs2-酪蛋白（CSN1S2）和κ-酪蛋白（CSN3）mRNA相对表达量显著提高（P<0.05）,5 mmol/L组的CSN1S2 mRNA相对表达量显著提高（P<0.05）。与对照组相比,氨基酸转运体溶质载体家族1成员4(SLC1A4)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)、溶质载体家族7成员5(LAT1)、溶质载体家族7成员7(SLC7A7)和脂肪酸转运蛋白1(FATP1)的mRNA相...     

肉桂醛对炎性IPEC-J2细胞AQP4和NHE3基因表达的影响

本试验旨在探讨肉桂醛（CA）对炎性猪小肠上皮细胞（IPEC-J2）水通道蛋白4(Aquaporin 4,AQP4)和钠-氢交换蛋白3(Na+-H+Exchanger3,NHE3)表达的影响,以揭示肉桂醛抗炎止泻的分子作用机制。将IPEC-J2细胞随机分为对照组、脂多糖组（5.00μg/mL LPS）和LPS+CA组（5.00μg/mL LPS+0.05μL/mLCA）组,各组按剂量孵育12h后,每组3个重复。采用CCK-8法检测细胞活力,RT-qPCR检测IL-1α、TNF-α、AQP4及NHE3 mRNA的相对表达水平,ELISA检测细胞中IL-6、TNF-α、IL-1α含量,Western blotting检测AQP4及NHE3蛋白表达。结果显示：与对照组相比,5μg/mL LPS能显著提高IPEC-J2细胞中IL-1α和TNF-α mRNA丰度及IL-6、TNF-α、IL-1α含量,说明5μg/mL LPS能诱导IPEC-J2细胞的炎症反应;与LPS组相比,0.05μL/mL CA与LPS共处理后,IPEC-J2细胞中IL-1α和TNF-α mRNA的表达水平显著下降,IL-6、...     

家兔Ⅰ型肽载体(PepTⅠ)基因的克隆与原核表达

用real-time PCR方法扩增家兔PepTⅠmRNA序列,通过原核表达体外获得家兔PepTⅠ蛋白,旨在制备多克隆抗体。试验通过RT-PCR方法成功扩增出2 001bp的家兔PepTI基因片段,设计特异性引物成功扩增出抗原表位相对集中的1 071bp大小的片段,构建重组表达质粒,获得融合蛋白。结果显示:家兔PepTⅠ基因片段成功的连接到pMD18-T载体上,重组克隆载体双酶切后回收目的片段分别连接到原核表达载体pET-32a、pET-28a,经转化提取质粒测序验证后表明,成功构建原核表达载体pET-32a-P、pET-28a-P,将重组质粒转化至感受态细胞BL21(DE3)后IPTG诱导,成功表达出PepTⅠ融合蛋白,目的蛋白相对分子质量大小约为44 000,与预期试验结果相符。结果表明:本试验成功扩增出家兔PepTⅠmRNA序列,并且通过原核表达获得家兔PepTI融合蛋白。     

热休克蛋白70上调表达对热应激猪小肠上皮细胞凋亡的影响

本试验以谷氨酰胺作为热休克蛋白70(HSP70)诱导剂,从细胞凋亡线粒体信号转导途径探讨HSP70对热应激猪小肠上皮细胞(IPEC-J2)凋亡相关因子的影响。试验以体外培养的猪小肠上皮细胞为模型,分别加入不同浓度(1、2、4、6、8、10 mmol/L)谷氨酰胺的培养基中培养24 h,提取总RNA和总蛋白,用实时荧光定量PCR和Western blot检测HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量,筛选出谷氨酰胺诱导HSP70表达的最佳浓度。取对数生长期的细胞分为3组,分别为对照组(Con组,37℃培养12 h)、热应激组(Hs组,42℃培养12 h)、谷氨酰胺组(Gln组,6 mmol/L谷氨酰胺、42℃培养12 h)。采用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡水平,实时荧光定量PCR和Western blot分别检测HSP70、凋亡酶激活因子-1(Apaf-1)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-9(Caspase-9)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(Caspase-3)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)的mRNA和蛋白的相对表达量。结果表明:谷氨酰胺对HSP70上调表达呈先上升后下降的趋势,6 mmol/L的谷氨酰胺诱导时HSP70 mRNA和蛋白相对表达量最高,显著高于其他浓度(P<0.05),作为后续试验中Gln组的诱导条件。与Con组相比,Hs组细胞凋亡率极显著增加(P<0.01),HSP70、Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),而Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01)。与Hs组相比,Gln组细胞凋亡率极显著降低(P<0.01),但仍极显著高于Con组(P<0.01);Gln组HSP70 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01);Gln组Apaf-1、Caspase-3、Caspase-9 mRNA和蛋白的相对表达量极显著降低(P<0.01),但极显著高于Con组(P<0.01);Gln组Bcl-2 mRNA和蛋白的相对表达量极显著升高(P<0.01),但极显著低于Con组(P<0.01)。由此可见,上调HSP70的表达可有效缓解热应激导致的猪小肠上皮细胞凋亡。     

猪肠道钠氢交换载体(NHE3)mRNA表达的肠段特异性和发育性变化

旨在探讨猪肠道钠氢交换载体（NHE3）mRNA表达的肠段特异性和发育模式,为NHE在养猪生产中的应用提供理论依据。选取遗传背景相同的1、7、26、30、60、90和150 d蓝塘和长白公猪各5头,测体质量后屠宰,取十二指肠、空肠、回肠和结肠组织样品;以18S rRNA为内标基因,用实时荧光定量PCR法检测NHE3 mRNA在60 d长白猪表达的肠段特异性及其在蓝塘和长白猪肠道表达的发育模式。结果显示：长白猪肠道NHE3 mRNA的表达丰度为结肠、十二指肠、空肠和回肠依次降低,且结肠显著高于空肠和回肠（P〈0.05）。不同猪种NHE3mRNA在十二指肠和空肠的表达模式相似;蓝塘和长白猪NHE3 mRNA的表达丰度分别在7和30 d（十二指肠）、7和26 d（空肠）达最高水平（P〈0.05）。不同猪种结肠NHE3 mRNA的表达模式不同,分别与其在十二指肠和空肠的发育呈现不同的模式;蓝塘猪结肠NHE3 mRNA的表达丰度在26、90和150 d时显著低于长白猪（P〈0.05）。以上结果说明,猪肠道NHE3 mRNA的表达受到发育阶段、品种和肠段的调控,且在十二指肠和空肠间具有品种稳定性。     

亮氨酸对猪胎盘滋养层细胞增殖及氨基酸转运的影响

为研究亮氨酸(Leu)对猪胎盘滋养层细胞(pTr)增殖、凋亡以及氨基酸转运载体表达的影响及其机制,本试验用不同浓度Leu(0、1、10 mmol/L)分别处理pTr细胞24 h和48 h后,使用荧光定量PCR技术检测pTr细胞增殖和凋亡相关基因、氨基酸转运载体以及mTOR信号通路关键蛋白等的mRNA表达水平。结果表明:Leu处理pTr细胞24 h后,1 mmol/L试验组的SNAT1(P<0.01)、4E-BP1 (P<0.05)和eIF4G(P<0.05)的mRNA相对表达量低于对照组;Leu处理pTr细胞48 h后,1 mmol/L试验组LAT1(P<0.05)、4E-BP1(P<0.01)的mRNA相对表达量低于对照组,10 mmol/L试验组CDK4(P<0.05)、4E-BP1 (P <0.01)、SNAT1 (P <0.01)、SNAT2 (P <0.01)、LAT1 (P <0.01)以及rBAT (P <0.05)的mRNA相对表达量也低于对照组;Leu处理pTr细胞24 h和48 h后,10 mmol/L组mTORC1的mRNA相对表达量较对照组和1 mmol/L组均极显著提高(P<0.01)。可见,10 mmol/L Leu会抑制pTr细胞的增殖活力,并可能通过mTOR信号通路的介导,降低了pTr细胞氨基酸转运载体的表达。     

蛋鸡小肠肽转运载体PepT1表达差异性的评定

本试验旨在研究蛋鸡十二指肠、空肠、回肠小肽转运载体mRNA表达的差异性.选用相同背景的健康成年蛋鸡10只,从十二指肠、空肠、回肠组织提取RNA样品,采用相对定量RT-PCR,对蛋鸡小肠各段肽转运载体mRNA表达的差异性进行评定.结果表明,蛋鸡空肠PepT1 mRNA的表达水平显著高于十二指肠(P＜0.05),与回肠比差异不显著(P＞0.05),十二指肠PepT1 mRNA的表达水平与回肠之间无显著差异(P＞0.05).     

鸡不同肠段碱性氨基酸转运载体mRNA表达的差异性研究

为研究肉鸡肠道不同肠段碱性氨基酸转运载体rBAT(系统b0, )、y LAT2(系统y L)、CAT1(系统y )、CAT4(系统y )mRNA表达的差异性,以快大型黄羽肉鸡为动物模型,采集30日龄接近平均体重黄羽肉鸡的十二指肠、空肠、回肠和结直肠样品,采用相对定量RT-PCR方法研究不同肠段rBAT、y LAT2、CAT1、CAT4mRNA表达丰度。结果显示:结直肠rBAT、y LAT2的mRNA表达丰度极显著低于十二指肠、空肠和回肠(P<0.01),其在回肠表达丰度高于空肠、十二指肠,差异不显著(P>0.05)。结直肠CAT1 mRNA表达丰度极显著高于十二指肠、空肠和回肠(P<0.01),回肠极显著高于空肠(P<0.01),高出十二指肠27.9%(P=0.111)。结直肠CAT4 mRNA的表达丰度极显著高于其他各个肠段(P<0.01),十二指肠、空肠、回肠CAT4 mRNA的表达丰度依次降低,但相互之间无显著差异。结果表明,位于肠上皮黏膜细胞顶端的碱性氨基酸转运系统b0, 和基底部位的系统y L转运载体mRNA的表达在肠道中的分布类似,显著区别于系统y 。     

肉鸡肠道NHE2 mRNA表达的组织特异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre（AA）肉雏鸡120羽,随机分为4个重复,采用相对定量RT-PCR方法,以30日龄AA肉鸡肠道RNA为模板,研究肉鸡肠道钠/氢交换载体2（Sodium hydrogen exchanger 2,NHE2）mRNA表达的组织特异性;以AA肉鸡十二指肠和空肠RNA为模板,研究肉鸡肠道NHE2mRNA表达的发育性变化。结果显示：①AA肉鸡十二指肠和空肠NHE2 mRNA的表达丰度显著高于回肠和结直肠（P〈0.05）,而十二指肠和空肠之间、回肠和结直肠之间无显著差异（P〉0.05）;②AA肉鸡NHE2 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,2～16日龄升高,30～44日龄下降,55日龄略微回升;在16和30日龄时的表达丰度显著高于2、44和58日龄（P〈0.05）。以上结果说明：AA肉鸡肠道近端NHE2 mRNA的表达丰度显著高于远端（P〈0.05）。AA肉鸡十二指肠及空肠NHE2 mRNA的表达具有相同的发育模式,表明NHE2mRNA表达受到发育阶段的调控,且在十二指肠和空肠间具有稳定性。     

犊牛组织中小肽转运体(POTs)的表达研究

为研究犊牛部分组织中小肽转运体(proton-dependent oligopeptide transporters,POTs) (PepT1、PepT2、PHT1、PHT2) mRNA的表达,试验选用4头3月龄的中国荷斯坦犊牛进行屠宰,采用实时荧光定量PCR方法来定量组织中小肽转运蛋白表达水平。结果表明,犊牛PepT1 mRNA在瘤胃中表达丰度极显著高于心脏和肌肉(P<0.01);犊牛PepT2 mRNA在肝脏和肾脏中表达丰度极显著高于心脏、脾脏、胸腺、肌肉、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃(P<0.01);犊牛PHT1 mRNA在肺脏和脾脏中表达丰度极显著高于心脏和肌肉(P<0.01);犊牛PHT2 mRNA在肺脏和胸腺中表达丰度显著高于心脏、肝脏、肾脏、脾脏、肌肉、瘤胃、网胃、瓣胃、皱胃(P<0.05)。综上所述,PepT1、PepT2、PHT1、PHT2 mRNA分别在犊牛瘤胃、肾脏和肝脏、脾脏和肺脏、肺脏和胸腺中表达量最高。     

丁酸钠对脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞系炎性损伤的修复作用

本研究拟通过分析丁酸钠对脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T细胞)炎性损伤的修复作用,进一步从体外角度阐述丁酸钠对奶牛乳腺健康的调控机制。在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000 ng/mL)的LPS,检测细胞活力,以确定LPS的适宜浓度,建立细胞氧化损伤模型;并进一步在MAC-T细胞中添加不同浓度(0、2、4、8、16、32μmol/L)的丁酸钠,检测细胞凋亡率,以确定丁酸钠的适宜浓度。最终选用1 000 ng/mL LPS和16μmol/L丁酸钠用于本试验。试验分为3组,分别为对照组、LPS处理组和LPS+丁酸钠处理组,分别对其细胞形态、氧化应激指标及凋亡蛋白mRNA表达水平进行检测。结果表明：1)对照组MAC-T细胞呈扁平的无规则形态,贴壁状态良好;而LPS处理组MAC-T细胞核固缩、破裂,并出现大面积死亡脱落现象;LPS+丁酸钠处理组MAC-T细胞边缘清楚,胞内颗粒较少,死亡脱落现象明显减少。2)与对照组相比,LPS处理组MAC-T细胞中超氧化物歧化酶(SOD)活性和总抗氧化力(T-AOC)显著降低(P<0.05),丙...     

Butyrate differentially regulates cytokines and proliferation in porcine peripheral blood mononuclear cells

Although butyrate modulates proliferation and cytokine production by PBMC in some species, the role of butyrate as a regulator of immunocyte function in the pig has not been studied. Therefore, the primary objective of this study was to determine whether butyrate influences peripheral blood mononuclear cell (PBMC) proliferation, cytokine secretion and mRNA expression in the pig in vitro. We also sought to determine whether alterations in cytokine production attributable to butyrate were associated with changes in the expression of suppressor of cytokine signaling-3 (SOCS3). Porcine PBMC were isolated from venous blood and stimulated with concanavalin A (ConA) in the presence or absence of sodium butyrate at 0.2 or 2.0 mM. Butyrate at 2.0 mM suppressed (P<0.05) ConA-induced PBMC proliferation and led to a paradoxical increase (P<0.05) in IL-2 mRNA expression. The secretion and mRNA expression of interferon-gamma (IFN-gamma) by ConA-activated PBMC was increased (P<0.05) by butyrate at 2.0 mM. Exposing activated PBMC to butyrate at 2.0 mM decreased (P<0.05) the secretion of interleukin-10 (IL-10). In contrast, butyrate at 0.2 mM increased (P<0.05) both IL-10 secretion and mRNA expression. Activation of porcine PBMC with ConA increased (P<0.05) the expression of SOCS3 mRNA, and butyrate treatment further augmented (P<0.05) SOCS3 mRNA expression in a dose-dependent manner. Mechanistically, pretreatment with the adenyl cyclase inhibitor 2,5-dideoxyadenosine abolished (P<0.05) the inhibitory effect of 2.0 mM butyrate on IL-10 secretion, and partially reversed (P<0.05) the increase in IFN-gamma secretion induced by 2.0mM butyrate. These data indicate that the effect of butyrate on cytokine production by porcine PBMC is dose-dependent, and that butyrate increases the expression of SOCS3 in activated PBMC. In addition, we provide evidence that the effects of butyrate on IFN-gamma and IL-10 production are mediated in part via a cAMP-dependent mechanism.     

Expression of Proton-dependent Oligopeptide Transporters (POTs) in Calves' Tissues

This test was designed to study the expression of POTs (PepT1, PepT2, PHT1 and PHT2) mRNA in calves'tissues.Tissue-specific expression of the mRNA corresponding to peptide transporter protein in four 3-month-old Chinese Holstein calves was examined by relative quantitative RT-PCR analysis.The results showed that the expression of PepT1 mRNA in the rumen was extremely significantly higher than that in the heart and muscle (P<0.01);The expression of PepT2 mRNA in the liver and kidney was extremely significantly higher than that in the heart, spleen, thymus, muscle, rumen, reticulum, omasum and abomasum (P<0.01);The expression of PHT1 mRNA in the lung and spleen was extremely significantly higher than that in the heart and muscle (P<0.01);The expression of PHT2 mRNA in the lung and thymus was significantly higher than that in the heart, liver, kidney, spleen, muscle, rumen, reticulum, omasum and abomasum (P<0.05).The results indicated that PepT1, PepT2, PHT1 and PHT2 mRNA were respectively abundantly expressed in rumen, kidney and liver, spleen and lung, lung and thymus.     

丁酸钠通过AMPK通路调控LPS造成牛乳腺上皮细胞脂代谢紊乱的作用机制

通过向脂多糖（LPS）诱导牛乳腺上皮细胞系（MAC-T）脂代谢紊乱模型中添加不同浓度（2、8、16 μmol·L^-1）的丁酸钠,探讨其对细胞脂代谢的调控机理及炎症损伤的修复作用。分别用1 000 ng·mL^-1 LPS刺激MAC-T细胞9 h后,检测细胞脂滴面积及三酰甘油（TG）含量;用不同浓度的丁酸钠刺激MAC-T细胞12 h后,流式细胞术检测细胞凋亡率;试验共分为5组：对照组、LPS处理组、2 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组、8 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组和16 μmol·L^-1丁酸钠+LPS处理组,分别对细胞TG含量、AMPK信号通路蛋白、脂代谢关键基因以及相关炎症因子进行检测。结果显示：LPS会造成MAC-T细胞总脂滴面积显著下降（P<0.05）,TG含量极显著下降（P<0.01）;不同浓度的丁酸钠对MAC-T细胞凋亡率没有影响;与对照组相比,LPS处理组TG含量极显著下降（P<0.01）、P-AMPK表达水平显著上升（P<0.05）、脂合成代谢相关基因ACC、SCD-1以及FAS mRNA表达水平均显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）下降、脂分解代谢相关基因CPT-1、CPT-2以及ACO mRNA表达水平均显著上升（P<0.05）、炎症因子TNF-α和IL-6含量显著上升（P<0.05）;与LPS处理组相比,（2、8、16 μmol·L^-1）丁酸钠+LPS处理组TG含量有一定程度上升,P-AMPK表达水平下降,脂合成代谢相关基因表达水平上升,脂分解代谢相关基因表达水平有一定程度下降,炎症因子TNF-α和IL-6含量下降。本研究表明丁酸钠会通过AMPK通路激活脂合成代谢,调控TG的合成,并且对MAC-T细胞的炎症损伤具有一定的缓解作用。     

肉鸡肠道PepT1 mRNA表达的肠段差异性与发育性变化

选用遗传背景相同的1日龄父母代雄性Arbor Acre(AA)鸡和父母代雄性岭南黄肉雏鸡各120羽,采用相对定量RT-PCR方法,以30 d时岭南黄鸡肠道样品为模板,研究肉鸡肠道寡肽转运载体1(Peptide transporter 1,PepT1)mRNA表达的肠段差异性;以AA肉鸡和岭南黄鸡十二指肠和空肠样品为模板,研究不同品种肉鸡肠道PepT1 mRNA表达的发育性变化。结果显示:(1)岭南黄肉鸡肠道PepT1 mRNA的表达丰度从十二指肠、空肠、回肠到结直肠依次降低,其中十二指肠显著高于结直肠(P<0.05);(2)AA鸡和岭南黄肉鸡PepT1 mRNA在十二指肠及空肠中的表达具有相同的发育模式,16 d表达丰度最高,16~44 d逐渐下降,58 d略微回升;不同基因型之间PepT1 mRNA丰度比较,AA鸡和岭南黄肉鸡两品种间PepT1 mRNA的表达没有显著差异(P>0.05)。以上结果说明:(1)随着肠道空间位置的后移,岭南黄肉鸡肠道PepT1 mRNA的表达丰度逐渐降低,其中十二指肠的表达丰度显著高于结直肠(P<0.05);(2)不同品种肉鸡十二指肠及空肠PepT1 mRNA的表达具有相同的发育模式,且同日龄两品种间的表达丰度未见明显差异,表明PepT1 mRNA表达受到发育阶段的调控,但品种间具有稳定性。     

4种中药单体与丁酸钠诱导猪宿主防御肽表达的协同效果研究

【目的】研究中药单体黄腐酚、异丹叶大黄素、去氧紫草素和毛蕊异黄酮与丁酸钠诱导猪宿主防御肽(host defense peptides, HDPs)表达的协同效果。【方法】中药单体黄腐酚、异丹叶大黄素、去氧紫草素和毛蕊异黄酮与丁酸钠单独或共同处理猪肠上皮细胞IPEC-J2和猪肺泡巨噬细胞3D4/31,通过测定HDPs的基因表达、细胞因子基因表达,以及细胞对产肠毒素性大肠杆菌(ETEC)的抑菌作用,评估中药单体与丁酸钠协同诱导HDPs表达的效果。【结果】黄腐酚与丁酸钠共同处理对HDPs的表达不表现协同作用;异丹叶大黄素与丁酸钠共同处理可协同诱导IPEC-J2细胞pEP2C和pBD3基因的表达(P<0.01);去氧紫草素与丁酸钠共同处理可协同提高IPEC-J2细胞内pBD3和PG1-5基因的表达(P<0.05;P<0.01);毛蕊异黄酮与丁酸钠共同处理可协同促进IPEC-J2细胞内PG1-5、pEP2C、pBD2和pBD3基因(P<0.05;P<0.01)和3D4/31细胞内pBD3基因的表达(P<0.05)。中药单体与丁酸钠共同处理对细胞因子表达无显著协...     

An energy-rich diet enhances expression of Na(+)/H(+) exchanger isoform 1 and 3 messenger RNA in rumen epithelium of goat

Rumen epithelial Na(+)/H(+) exchanger (NHE) catalyzes the exchange of extracellular Na(+) for intracellular H(+). Thus, it is of importance in the maintenance of Na and pH homeostasis of rumen epithelial cells. We have tested the hypothesis that an increase in energy and protein intake induces alterations of NHE isoform 1, 2, and 3 (NHE1, NHE1, and NHE3, respectively) mRNA abundance in the rumen epithelium of goats. Goats (n = 26) were randomly allocated to 2 experiments (n = 16 in Exp. 1, and n = 10 in Exp. 2) and fed either peanut straw ad libitum [PNS, n = 8 in Exp. 1, and n = 5 in Exp. 2; 600 kJ of ME/(kg(0.75)·d)] or PNS + concentrate [CF, n = 8 in Exp. 1, and n = 5 in Exp. 2; 1,000 kJ of ME/(kg(0.75)·d)] for 42 d. Concentrate (400 g/d) was given daily (0800 to 1700 h) in 4 equal portions at 3-h intervals. In Exp. 1, the goats were euthanized 2 h after the last portion of concentrate was fed, and in Exp. 2, the goats were euthanized after a fasting period of 16 h. In Exp. 1, goats in the CF treatment exhibited a greater ruminal short-chain fatty acid (SCFA) concentration (140.6 ± 1.30 mM) compared with those in the PNS treatment (114.3 ± 3.11 mM; P < 0.001), and pH decreased from 6.9 ± 0.09 to 5.9 ± 0.04 (P < 0.001). Correspondingly, the mRNA expression of NHE1 and NHE3 in the rumen epithelium was greater by 20% (P = 0.041) and 25% (P = 0.043) for goats in the CF treatment than for those in the PNS treatment. However, in Exp. 2, 16 h of fasting abolished differences in ruminal SCFA concentration, pH, and NHE mRNA expression between goats in the CF and PNS treatments. In both Exp. 1 and 2, a positive correlation was observed between ruminal SCFA concentration and expression of mRNA in NHE1 and NHE3, whereas expression was negatively correlated with ruminal pH. In in vitro studies with isolated rumen epithelial cells from goats fed dried grass, exposure to pH of 6.8 or to 20 mM SCFA increased (P < 0.01) NHE1 and NHE3 mRNA expression, as compared with exposure to pH of 7.4 or the absence of SCFA. A combination of reduced pH (6.8) and SCFA (20 mM) further enhanced (P < 0.05) NHE1 and NHE3 mRNA expression, indicating synergism between an increased concentration of SCFA and low pH (P < 0.05). Messenger RNA expression of NHE2 did not vary in vitro with pH (6.8) or SCFA (20 mM) or in vivo in Exp. 1 and 2. Thus, diet-dependent rumen epithelial NHE1 and NHE3 expression is probably related to ruminal SCFA concentration and pH, but that is not the case with NHE2.     

烟酰胺与丁酸钠对高密度笼养肉鸡肝脏和肠道氧化应激与炎症反应的影响

为探究烟酰胺和丁酸钠对高密度笼养肉鸡抗氧化和缓解炎症的作用效果,试验采用342只26日龄AA+雄性肉鸡,随机分为5组,每组6个重复。对照组为正常密度组(12.9只/m²)和高密度组(17.1只/m²),试验组为高密度分别饲喂烟酰胺组(50 mg/kg)、丁酸钠(500 mg/kg)、复合添加组(50 mg/kg烟酰胺+500 mg/kg丁酸钠),饲养至46日龄,测定生产性能、血清抗氧化指标、肝脏抗氧化基因mRNA表达和盲肠炎性因子mRNA表达。结果表明:高饲养密度较正常密度组显著降低了肉鸡采食量和体增重,烟酰胺组和复合添加组可缓解高饲养密度造成的生产性能下降的趋势;与正常密度组相比,高密度组显著上调了肝脏中血红素加氧酶(HO-1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、盲肠扁桃体白介素6(IL6)、白介素10(IL10)mRNA的表达;与高密度组相比,复合添加烟酰胺和丁酸钠显著上调了肝脏谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、HO-1、肿瘤坏死因子α(TNF-α)和Nrf2的mRNA表达量,显著下调盲肠扁桃体IL6、IL10基因mRNA的表达量。综上可知,在高密度笼养条件下,家禽饲粮中复合添加烟酰胺和丁酸钠可以提高肉鸡的生产性能,缓解高密度氧化应激导致的肉鸡炎症基因表达,Keap1-Nrf2-ARE信号通路可能参与了烟酰胺和丁酸钠对肉鸡抗氧化能力的调控。