猪瘟病毒感染西藏小型猪致免疫器官损伤的组织病理学研究

为了研究CSFV感染对西藏小型猪的致病性及组织病理学方面的影响,将6头4月龄健康西藏小型猪随机分成2组,其中感染组4头,对照组2头。感染猪颈部肌肉注射CSFV石门株血毒(1×10~5TCID_(50)/头),对照组猪注射等体积生理盐水。CSFV接种后每天监测动物体温并观察临床症状,于CSFV感染后第9天剖杀全部试验动物,测定血液CSFV核酸载量,观察各组织器官病理变化并采集扁桃体、颌下淋巴结、脾脏、胸腺等免疫器官进行组织病理学研究。结果显示,CSFV感染后第2天猪只体温超过40.2℃,开始出现精神沉郁、食欲减退、便秘等临床症状;CSFV感染后濒临死亡时猪血液中病毒含量最高达1×10~(8.9)Copies/mL,最低含量为1×10~(5.2)Copies/mL。组织病理学结果显示,CSFV感染猪扁桃体间质、颌下淋巴结被膜和脾脏的淋巴滤泡周围可见大量出血及片状坏死,颌下淋巴结生发中心可见局部增生性变化,胸腺间质可见炎性细胞浸润。对照组猪血液CSFV核酸为阴性、病理和组织学切片未见异常。结果表明,本研究成功建立CSFV感染西藏小型猪的动物模型,CSFV感染西藏小型猪后对扁桃体、脾脏、淋巴结和胸腺等免疫器官造成损伤,使机体免疫功能降低。     

PRRSV感染致断奶仔猪肺脏和外周免疫器官的病理损伤

用PRRSV ATCC VR-2332株感染8头28日龄仔猪,同时设立2头健康对照猪.PRRSV单独感染猪分别于感染后7,17,25 d各剖杀2,3,3头,对照组于17,25 d各剖杀1头.剖杀后采集脾脏、肺脏和全身主要淋巴结(颌下淋巴结、肺门淋巴结、腹股沟淋巴结和肠系膜淋巴结)等免疫器官,用甲醛溶液固定,组织石蜡切片以观察显微病理变化.试验组猪的抗体和抗原检测结果均表明,感染后7 d血清PRRSV抗体和免疫器官组织PRRSV抗原部分呈阳性;剖检和石蜡切片结果均显示,试验猪于攻毒后,随着病程的发展,发生了不同程度的间质性肺炎及相应的显微病变,PRRSV单独感染能引起免疫器官以淋巴细胞及巨噬细胞变性坏死为特征的急性炎症变化,造成免疫损伤,进而引起免疫抑制.     

猪繁殖与呼吸综合征病毒SJ株(天津分离株)感染仔猪的病理学

选用10～15日龄健康仔猪20头，随机分为攻毒组（15头）与对照组（5头），攻毒组滴鼻接种猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）SJ株，3mL／头；对照组滴鼻接种无PRRSV的细胞培养物，3mL／头。攻毒组的主要临床表现为眼睑水肿、打喷嚏、呼吸急促、嗜睡、体温略升高。攻毒组与对照组在试验开始后24h、7d、14d、21d、28d分别剖杀3头和1头仔猪，采集肺、脾、肾、扁桃体及各部位淋巴结作免疫组化及病理组织学观察；迅速采集肺组织，制作超薄切片，透射电镜观察。试验结果表明，PRRSV SJ株主要感染仔猪的肺脏与脾脏。免疫组化观察，攻毒后24h～7d，肺门淋巴结和扁桃体PRRSV抗原阳性反应最强；攻毒后14～28d，牌睦PRRSV抗原阳性反应最强。攻毒后14～28d，显微病变可见肺组织发生弥漫性、局灶性或间质性肺炎，肺泡隔因巨噬细胞、淋巴细胞及Ⅱ型上皮细胞增生而明显增厚。超微病变主要表现为，肺泡间隔中单核细胞增生，核孔消失，核内有异染色质聚集，Ⅱ型肺泡细胞高度变性等。     

实验性猪口蹄疫免疫病理形态学研究

选用健康仔猪13头,分成4组:健康对照组2头,健康攻毒组5头,免疫组和免疫攻毒级各3头。健康攻毒组经皮下注射猪口蹄疫病毒(FMDV);免疫组和免疫攻毒组均经皮下接种猪口蹄疫牛皮肤细胞弱毒苗(FMD-BC),观察1个月后,前者扑杀,后者再攻FMDV,1个月后扑杀。结果:健康攻毒组5头仔猪均出现口蹄疫(FMD)典型的临床症状和病现学变化,其淋巴结、脾脏不同程度的变性、坏死和出血,淋巴小结减少和缩小,淋巴细胞稀少,浆细胞呈坏死性变化,酯酶阳性(ANAE~ )细胞和次级淋巴小结均减少;免疫组未见任何FMD病理学变化,主要见全身各部位淋巴结及脾脏不同程度地增大,尤以肩前、髂下和脾门淋巴结更为显著,其淋巴小结显著增多、增大,淋巴细胞活化,大、中淋巴细胞增多,以过渡型和未成熟型浆细胞为主,ANAE~ 细胞和次级淋巴小结均增多;免疫攻毒组的变化与免疫组相似。     

猪增生性肠炎模型的建立及其病理学研究

为了复制猪增生性肠炎病的模型并进行病理学观察,试验将临床检测胞内劳森菌为阴性的6～7周龄非免疫健康仔猪6头随机分为攻毒组(4头)与对照组(2头),攻毒组口服接种猪源胞内劳森菌GXNN株30 mL/头·次,对照组口服接种无菌稀释液30 mL/头·次.感染后分别于21天和56天剖杀感染组仔猪2头和对照组仔猪1头,观察病理变化并采集病变组织器官.结果表明:感染猪临床上出现短暂的体温升高、轻度腹泻等症状,粪便中检出胞内劳森菌.剖检可见腹股沟淋巴结及肠系膜淋巴结呈灰白色肿胀,肠系膜小血管扩张、充血;回肠黏膜褶皱呈脑回状;肝脏出现局部轻度淤血.组织病理学主要表现为猪回肠、结肠集合淋巴小结增多、增大,腺窝内杯状细胞消失,部分腺窝不成熟的上皮细胞增生,腺窝之间的周围组织有嗜酸性粒细胞和淋巴细胞浸润;肝脏的窦状隙有局灶性出血,其他组织器官病变不明显.经过免疫组化和原位杂交试验可见回肠、结肠的腺窝内和腺上皮细胞的胞浆内有染成棕黄色或蓝紫色的菌体.     

猪圆环病毒2型SD/2008株对仔猪的致病性

为了明确PCV2-SD/2008株对猪的致病性,将12头5周龄健康断奶仔猪随机分为PCV2组和对照组,每组6头.PCV2组经口鼻途径接种PCV2 SD/2008株第3代细胞毒(105.61 TCID50/0.1 mL),3 mL/头,对照组经相同途径接种3 mL细胞维持液.PCV2组中的1头猪从感染后14 d开始出现间断腹泻,一直到持续到试验结束.感染后第4、5周,感染组的周平均增重显著低于对照组(P＜0.05).病理组织学检查可见PCV2感染猪的淋巴结和脾脏内淋巴细胞缺失、单核/巨噬细胞和嗜酸性粒细胞浸润;间质性肺炎、坏死性肝炎和肾炎、小血管炎症等变化,并且感染后35 d比感染后14 d的病理变化更加严重.应用免疫组化方法在感染猪的肺、肝、脾、肾、淋巴结、小肠等多种组织中检测到了PCV2抗原,其中颌下淋巴结、肺、小肠中的阳性信号数与检出率最高.结果表明,PCV2 SD/2008株对仔猪具有明显的致病性.     

PRRSV在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤,试验将3头60日龄的健康仔猪随机分为2组,A组2头,B组l头.A组滴鼻接种PRRSV LC毒株(TC:ID50为1×10-5.25/0.1 mL)3 mL/头,B组为对照组,观察临床症状.攻毒25 d后剖杀,采集淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏各2份,其中一份进行中性福尔马林固定,制作石蜡切片,观察组织病理学变化;另一份在-70℃保存,利用RT-PCR检测PRRSV.病理学检查结果表明:肺脏出现明显的间质性肺炎,肺泡渗出物增多,可见局灶性出血;脾脏和淋巴结可见出血、增生;肝脏中央静脉及门管区静脉可见明显的淤血.利用RT-PCR方法在淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏中都检测到了PRRSV.     

PRRSV在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤

为了研究猪繁殖与呼吸综合征病毒在仔猪体内的分布规律及其对组织的病理性损伤,试验将3头60日龄的健康仔猪随机分为2组,A组2头,B组1头.A组滴鼻接种PRRSV LC毒株(TCID50为1×10-5.25/0.1 mL)3 mL/头,B组为对照组,观察临床症状.攻毒25 d后剖杀,采集淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏各2份,其中一份进行中性福尔马林固定,制作石蜡切片,观察组织病理学变化;另一份在-70℃保存,利用RT-PcR检测PRRSV.病理学检查结果表明:肺脏出现明显的间质性肺炎,肺泡渗出物增多,可见局灶性出血;脾脏和淋巴结可见出血、增生;肝脏中央静脉及门管区静脉可见明显的淤血.利用RT-PCR方法在淋巴结、脾脏、肺脏和肝脏中都检测到了PRRSV.     

猪圆环病毒的分离与鉴定

无菌条件下采集患有多系统衰竭综合征的断奶仔猪的淋巴结、肺脏和脾脏组织病料,对病毒进行电镜观察、间接免疫荧光试验、荧光定量PCR测定、动物人工感染试验。动物人工感染试验结果表明,将第18代PCV2病毒接种于4头未免疫过的健康猪只体内,其中2头有较严重的临床症状,另外2头有较轻微的临床症状,对剖杀时采集的血液进行间接免疫荧光试验,结果呈阳性,说明即使经过多次传代,PCV2病毒仍然能够使猪只感染。     

复方中药“猪康散”对人工感染PRRSV猪脾脏淋巴细胞周期及凋亡率的影响

选取28日龄、体质量(8.28±0.23)kg、PRRSV阴性的健康杜长大三元杂交仔猪40头,分为4组(Ⅰ组为健康对照组,Ⅱ组为感染对照组,Ⅲ、Ⅳ组为中药保健组),适应饲养至35日龄开始正式试验。36~39日龄,Ⅰ、Ⅱ组均饲喂基础日粮,Ⅲ、Ⅳ组在基础日粮中分别添加0.5%和1.0%的复方中药"猪康散";40日龄时除Ⅰ组外,其余各组猪均滴鼻接种PRRSV SCM株1.0mL/只。分别于50和60日龄时每组随机选取4头仔猪无菌取脾脏,进行脾脏淋巴细胞周期及凋亡率检验,观察复方中药"猪康散"对人工感染PRRSV猪脾脏淋巴细胞周期及凋亡率影响的动态变化。结果显示复方中药"猪康散"具有降低人工感染PRRSV猪G0/G1期脾脏淋巴细胞数量,提高S期、G2+M淋巴细胞数量及淋巴细胞PI值的作用(P0.05或0.01),以0.5%剂量组最佳;复方中药"猪康散"降低人工感染PRRSV猪脾脏淋巴细胞凋亡百分率的作用以1.0%剂量组最佳。由此表明复方中药"猪康散"保健用药具有提高人工感染PRRSV猪脾脏淋巴细胞增殖并降低脾脏淋巴细胞凋亡率的作用。     

PRRSV和PCV-2共感染小鼠疾病模型的建立

45只6周龄昆明小鼠,随机分为3组:单次攻毒组(A组)、连续攻毒组(B组)和正常对照组(C组)各15只。A组于试验1 d先后接种PRRSV和PCV-2,B组于1,3,5 d接种PRRSV和PCV-2,C组于1 d接种MEM细胞培养液,各组于试验后7,14,21,28,35 d随机选3只采血后处死,采用体质量测定、抗体ELISA、荧光定量PCR、肉眼和显微病理观察等4项检测指标进行模型鉴定。结果显示,与C组相比,A组和B组小鼠体质量增率减慢;肺脏出现典型的间质性肺炎病变;腹股沟淋巴结肿大,淋巴细胞坏死;脾脏淋巴细胞缺失,被膜散在出血;肝静脉淤血;抗体检测均呈阳性;荧光定量PCR检测证实,C组不存在病毒复制,A、B组小鼠被检组织均存在病毒复制,相对病毒含量在淋巴结中较其他组织差异显著(P0.01)。结果表明,试验已成功建立PRRSV和PCV-2共感染昆明小鼠疾病模型。     

不同毒力猪繁殖与呼吸综合征病毒对仔猪肺和外周免疫器官损伤的研究

为研究不同毒力的PRRSV对仔猪肺脏和外周免疫器官损伤的差异,本实验分别采用PRRSV变异株(HuN4株)和PRRSV经典株(CH-1a株)感染35日龄健康的断奶仔猪,并在感染后0 d、3 d、7 d、10 d和14 d各迫杀3头,检测肺、颌下淋巴结、肠系淋巴结、腹股沟淋巴结、扁桃体和脾脏的病毒载量及病理变化情况,同时检测血清中抗PRRSV的抗体水平。结果表明:感染后3 d肺脏及各免疫器官可检测到病毒,HuN4感染组病毒载量比CH-1a感染组病毒载量高1 000倍;HuN4感染组病毒载量峰值出现在感染后10 d,而CH-1a感染组维持着较低水平的病毒载量。组织病理学检测显示HuN4感染组淋巴结内淋巴细胞显著减少,呈空泡状;CH-1a感染组淋巴结内淋巴细胞轻度减少,呈星隙状。本实验表明HuN4株比CH-1a株对肺和外周免疫器官造成更严重的损伤。     

猪瘟病毒感染后对机体免疫系统的影响

为初步探讨猪瘟病毒的致病机理及机体的免疫应答机制,进行了猪瘟病毒感染试验,利用流式细胞术、阻断ELISA、白细胞计数和剖检观察对猪的体液免疫、细胞免疫、白细胞数量及病理损伤进行了研究。结果表明,感染猪的CD3^＋和CD4^＋T细胞亚群的数量在感染过程中均出现了明显的降低;CD8^＋T细胞亚群在感染初期变化幅度不大,后期明显升高;猪瘟抗体于第7天开始产生,呈上升趋势。白细胞数量在感染期间呈下降趋势。病理学观察可知感染猪的肺脏、肾脏、扁桃体等出现了不同程度的损伤。猪瘟病毒感染对机体的免疫系统造成了较大的损伤,抑制了机体的免疫应答。     

Phenotypic analysis of peripheral leukocytes in piglets infected with classical swine fever virus.

The phenotypic changes in circulating leukocytes in swine fever influenced by classical swine fever virus (CSFV) infection with different strain virulence was studied in piglets. The phenotypic differences were measured by monoclonal antibodies specific for porcine differentiation antigens. The pattern of phenotypic change varied with the virulence of CSFV. Infection with virulent, but not the attenuated strain of CSFV resulted in the dramatic early loss of CD8-bearing T lymphocytes from the circulation. A similar trend was also seen in the gammadelta T-cell compartment following infection with the highly virulent strain, Washington. The loss of circulating B-lymphocytes was consistent with the failure to generate neutralising antibody. These observations contrasted the finding that the number of leukocytes expressing the CD4 surface antigen increased in piglets infected with CSFV. These data provide preliminary information on the potential range of leukocyte changes produced in piglets following infection with CSFV.     

Theileria parva infection in calves causes massive lymphocyte death in the thymus, spleen and lymph nodes without initial proliferation

In a study of trends and magnitudes of lymphocytes proliferation, destruction or apoptosis eleven 3-month-old healthy calves were experimentally infected with the protozoan parasite Theileria parva, which is reported to cause lymphocyte proliferation. Four control calves were not infected. Infected and non-infected calves were sacrificed on days 9, 12, 16, 19, 23, 24 and 25 to examine lymphoid tissue changes and lymphocyte proliferation, apoptosis or necrosis in the thymus, spleen and lymph nodes. All infected calves developed severe East Coast fever, with enlargement of lymph nodes, dyspnoea, high fever and pulmonary oedema. Lymphocyte proliferation was not observed in lymph nodes, thymus and spleen; instead there were massive deaths of lymphocytes and other cells. The terminal severe disease caused massive lymphoid parenchyma coagulation terminating with caseation, organs and cells being undeterminable histologically. Tissues surrounding the lymph nodes were oedematous. Lymph node and thymus parenchyma were caseated and cortices and medulla indistinguishable because of severe lymphocyte and accessory cell deaths. The lymph node fibrous reticular stroma was necrotic and caseated. Lymphoid follicles in lymph nodes degenerated and lacked germinal centres. Lymph nodes, spleen and thymus were grossly enlarged, hardened, potato or cheese like, but microscopically very hypocellular and in the terminal disease acellular because of massive lymphocytes destruction. In the thymus there was extensive thymocyte and epithelioid cell necrosis and loss of distinction between cortex and medulla. The spleen white and red pulps were indistinguishable because of extensive lymphoid cell necrosis. The white pulp degenerated more than the red pulp. The massive lymphocyte deaths in the lymph nodes, thymus and spleen, without lymphocyte proliferation in this T. parva infection in calves leads to a conclusion that this parasite is lympho-destructive and lympho-degenerative in vivo rather than lympho-proliferative.     

SYBR荧光定量PCR方法分析猪瘟石门强毒的组织分布

为研究急性感染期猪瘟病毒在组织中的分布,本试验建立了猪瘟病毒实时定量PCR检测方法,通过与普通PCR及套式PCR方法比较,发现实时定量PCR具有较高的灵敏度和特异性,能够用于猪瘟病毒的检测;以此方法为基础,对人工接种猪瘟石门强毒急性死亡猪体内病毒分布进行了检测,结果发现急性感染期猪瘟病毒主要集中在扁桃体、脾脏、淋巴结及回肠。本研究初步揭示了猪瘟强毒在急性感染期死亡猪体内的分布情况,为猪瘟致病机理及感染控制的研究奠定了基础。     

IL1RN基因在晋汾白猪仔猪和新山西黑猪仔猪不同组织和细胞中的表达特征分析

白细胞介素1受体拮抗剂（interleukin 1 receptor antagonist,IL1RN）是一种重要的宿主免疫调节因子,是天然存在的IL-1拮抗剂。为了解IL1RN基因在断奶仔猪不同组织和细胞中表达的特征,利用Trizol法提取晋汾白猪仔猪和新山西黑猪仔猪的心脏、肝脏、脾脏、淋巴细胞、巨噬细胞等18种组织和细胞的总RNA,采用RT-PCR方法检测IL1RN基因在不同组织和细胞中的表达情况,应用SPSS 19.0软件分析IL1RN基因在晋汾白猪仔猪和新山西黑猪仔猪4种免疫组织和细胞（脾脏、淋巴结、巨噬细胞、白细胞）中的表达差异情况。结果显示：IL1RN基因在晋汾白猪仔猪和新山西黑猪仔猪的脂肪组织中均不表达,在其余各组织和细胞中均表达;IL1RN基因在晋汾白猪仔猪的巨噬细胞与淋巴结、脾脏、白细胞之间的表达差异极显著（P<0.01）,且在淋巴结与脾脏、白细胞之间的表达差异极显著（P<0.01）;IL1RN基因在新山西黑猪仔猪的脾脏、淋巴结、巨噬细胞、白细胞的表达两两之间均呈极显著差异（P<0.01）;IL1RN基因在2个猪种的脾脏、巨噬细胞、白细胞之间的表达呈极显著差异（P<0.01）,在淋巴结中的表达呈显著差异（P<0.05）。该研究结果为进一步揭示2个猪种的IL1RN基因在疾病抵抗方面的作用及相关机制提供了依据。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒混合感染的检测

2005年3月,江苏某猪场仔猪发生体温升高,呼吸困难,四肢末端、耳尖发绀,站立不稳和淋巴结出血为主要症状的疾病。4头发病仔猪的淋巴结、脾、肺脏组织用RT-PCR方法分别检测猪繁殖与呼吸综合征病毒和猪瘟病毒为阳性,用猪瘟ELISA试剂盒检测猪瘟病毒野毒为阳性。结合本病的临床症状和病理剖检,病例确诊为猪繁殖与呼吸综合征和猪瘟野毒的混合感染。     

Pathological Changes in Virus Enteritis of Mink

The lesions which characterize viral enteritis of mink (VEM) were studied in twenty-six, ten-week-old mink which had been infected by force feeding a tissue suspension containing a Wisconsin strain of mink enteritis virus. The pathogenesis of the lesions was reconstructed from gross and histopathological changes observed in animals which were selected randomly from the group each day for necropsy during the course of the disease.

Alterations were observed in the tissues of all mink examined from post-inoculation day (PID) 4 through 13. The principal macroscopic lesions which consisted of fibrinous enteritis, enlargement and hemorrhage of the spleen and edema of mesenteric and hepatic lymph nodes were most conspicuous on PID 7 and 8. Histopathological changes including necrosis and desquamation of intestinal epithelium, depletion of mature lymphocytes in lymph nodes, thymus and spleen and loss of partly differentiated myeloid and erythroid cells from spleen and bone marrow also reached full development on PID 7 and 8. However, nuclear inclusion bodies which were presumed to be a product of the causative agent and, therefore, of diagnostic significance were most prevalent on PID 3, 4 and 5. The inclusions were observed in mucosal epithelial cells of the intestine, parenchymal cells of the liver and in lymphocyte precursor cells of the spleen, intestinal lymph nodules and masenteric and hepatic lymph nodes.

     

伪狂犬病毒变异株（JS-2012）对仔猪的致病性研究

本实验室2012年从江苏省太仓市某发病猪场分离到1株变异的伪狂犬病毒,命名为JS-2012。为了研究该分离株对仔猪的致病性,将12头15日龄的伪狂犬病毒阴性仔猪随机分为3组,其中2组（每组5头猪）分别通过肌肉注射和滴鼻接种JS-2012毒,第3组2头猪做空白对照。接种病毒的仔猪在攻毒后24 h体温均开始升高,4 d后开始死亡,死亡率为100%。临床观察发现,滴鼻组仔猪发病死亡明显快于肌肉注射组。对病死猪进行剖解,均可见大脑血管扩张并出血等典型的伪狂犬病病理变化。病理切片显示猪的脑蛛网膜下腔严重出血,其他各脏器也均有严重病理变化。结果表明该变异株JS-2012为伪狂犬强毒毒株。