巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)地理株研究Ⅰ.11株巨型艾美耳球虫的分离与基本特征

采用单卵囊分离技术，从江苏、安徽、山东、广东、福建和上海等省(市)10个地区的鸡场及美国的球虫病疫苗中获得了11株纯种球虫。根据下列特征：(1)卵囊的大小、形态和颜色；(2)孢子囊的大小和形态；(3)形状指数(卵囊长宽之比)；(4)虫体肠道中的寄生区；(5)肉眼病变的性质；(6)最早孢子发育时间；(7)最短的潜在期，对这11株纯种球虫作了鉴定。结果表明，11株纯种球虫均为巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima Tyzzer，1929)地理株。应用SPSS软件系统，对各株进行描述性统计和方差分析，结果显示，11株间存在不同程度的差异，而美国株与国内各株均有显著差异。     

巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)地理株研究Ⅱ.11株巨型艾美耳球虫的致病性分析

分别用0.1×104、1×104、10×104个/只孢子化卵囊的剂量感染黄羽肉公雏,以临床症状、肉眼病变、平均增重、病变记分和死亡率为判定指标,对11株E.maxima的致病性进行了分析.结果表明各虫株引起的临床症状和各病死鸡的肉眼病变基本相似.各感染组的增重(0.1×104组例外)与对照组相比均有显著差异(P＜0.05).在感染10×104个/只的剂量时,上海株增重最少,苏州株和龙岩株增重最多;扬州株的病变记分最大,苏州株和龙岩株的最小,相比有显著差异(P＜0.05);扬州株、连云港株、福州株、广州株和美国株引起鸡死亡,死亡率分别为20%、10%、10%、10%和10%.结论11个虫株均有致病性,扬州株和上海株的致病力较强,而苏州株和龙岩株的致病力较弱.     

巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)地理株研究Ⅲ.11株巨型艾美耳球虫的同工酶分析

采用聚丙烯酰胺凝胶垂直板电泳(PAGE)技术,对11株Ei meria maxima和1株E.tenella的孢子化卵囊,进行了乳酸脱氢酶(LDH)、葡萄糖磷酸异构酶(GPI)、葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(G6PD)、葡萄糖磷酸变位酶(PGM)和苹果酸脱氢酶(MDH)的同工酶分析。试验结果显示,E.maxima和E.tenella在LDH、GPI、G6PD、PGM和MDH的酶谱上有明显差异,而在11株E.maxima之间无差异,表明E.maxima的酶变异相当保守。     

巨型艾美耳球虫不同地理株交叉免疫保护性研究

筛选出与巨型艾美耳球虫(E.maxima)山东分离株(Msd)免疫原性差异大的早熟弱毒株,为研制具有良好免疫原性的高效多价鸡球虫疫苗提供理论依据。4日龄雏鸡免疫E.maxima山东分离早熟株(PMsd),免疫后7 d分别攻击E.maxima Msd、上海分离株(Msh)、北京分离株(Mbj)、山西分离株(Msx);14日龄雏鸡分别免疫E.maxima Mbj和Msx,免疫后7 d,Mbj免疫组分别攻击Msh和Msx,Msx免疫组分别攻击Msh和Mbj。免疫PMsd攻击Msd组鸡只达到良好的免疫保护,而免疫PMsd攻击Msx组鸡只除病变记分减少率(28.6%)高于Mbj组(23.8%)外,相对增重率(74.3%)、卵囊减少率(9.7%)、抗球虫指数(159.3)均低于其他各组;免疫Msx攻击Mbj和Msh组鸡只卵囊减少率、抗球虫指数、相对增重率均大于免疫Mbj攻击Msx和Msh组。4种不同地理株的巨型艾美耳球虫中,Msx与Msd的免疫原性差异最大,且较Mbj更为广谱。     

3株鸡巨型艾美耳球虫抗原性分析

本研究对3株鸡巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)福建株、上海株和广东株进行免疫原性分析,其中广东株属于早熟株。将7日龄雏鸡分别免疫3株E.maxima孢子化卵囊,12 d后分别攻击相同剂量的同源及异源虫株孢子化卵囊,设不免疫攻虫对照组和不免疫不攻虫对照组,17d开始收集粪便直至无卵囊排出为止,每日计数卵囊,计算卵囊相对减少率。结果:雏鸡免疫后以同源虫株攻击,保护率均在98%以上,而雏鸡免疫后以异源虫株攻击,其交叉保护率在40.78%⁷2.37%之间。提示:E.maxima对同源虫株的保护率明显高于对异源虫株的保护率,说明各分离株间抗原性存在差异。     

巨型艾美耳球虫地方株的分离与鉴定

本文报道对巨型艾美耳球虫长春株的分离鉴定。主要鉴定指标如下:虫体寄生于小肠中段的空肠与回肠,配子体寄生于上皮下。病理变化主要表现为肠管充血、黄染、臌气,粘液性稀便以及肠粘膜针尖大小出血点。卵囊大小为31.5±0.26×23.1±0.15微米。最大裂殖体为9.2微米,潜隐期126±0.15小时,卵囊最短孢子发育时间为28小时。     

11株巨型艾美耳球虫繁殖力的比较研究

用巨型艾美耳球虫扬州株、南通株、连云港株、苏州株、凤阳株、青岛株、福州株、龙岩株、广州株、上海株和美国株孢子化卵囊100个/只或10 000 个/只,经嗉囔接种7 日龄或21 日龄无球虫黄羽肉公雏,以麦克马斯特法对感染后第6 天至第14 天间每天24 h排出的卵囊计数并进行统计分析。结果表明,各虫株的排卵囊量有差异,100个/只卵囊感染7日龄雏鸡时,广州株和凤阳株排卵囊量最多,上海株和苏州株排卵囊量最少;100个/只卵囊感染21 日龄雏鸡时,扬州株排卵囊量最多,上海株排卵囊量最少;10 000 个/只卵囊感染21 日龄雏鸡时,苏州株排卵囊量最多,连云港株和扬州株的排卵囊量最少;排卵囊量随着感染剂量的增加或鸡日龄的增大而增多;在同一感染剂量时,福州株和连云港株增加最多,上海株和苏州株增加最少;在同一感染鸡日龄时,苏州株和上海株增加最多,南通株和扬州株增加最少;各虫株的排卵囊规律极相似,在感染后第7 天排卵囊量达峰值,第8 天、第9 天排出的卵囊量显著减少,第10天排出的卵囊量仅占总量的2%,第14天接近于0%;第6天至第8天排出的卵囊量占总量的87%~99%。     

巨型艾美耳球虫早熟株免疫剂量研究

为了确定巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)早熟株合适的免疫剂量,本文设立7个早熟株免疫攻虫组、7个母株免疫攻虫组、1个不免疫攻虫组和1个不免疫不攻虫组,7个早熟株/母株免疫组的免疫剂量为孢子化卵囊100、200、400、600、800、1000和2000个/羽,经嗉囊感染,7日龄首次免疫,14日龄以同等剂量进行第二次免疫,21日龄以8×104个/羽的同源母株进行攻虫,28日龄结束试验,以增重、肠道病变记分和卵囊减少率为试验指标。对早熟株中免疫保护效果较好的2个免疫剂量进行重复试验,免疫方法、试验周期、试验指标和攻虫剂量同第一批试验。结果显示:早熟株和母株200、400、600、800、1000、2000个/羽免疫组攻虫后的增重与健康对照组差异不显著(P>0.05),100个/羽免疫组明显低于健康对照组(P<0.05);各免疫组的卵囊减少率均达90%以上,肠道病变记分均与不免疫攻虫组差异不显著(P>0.05)。用早熟株200、400个/羽进行免疫重复试验,两个免疫组攻虫期间的增重和肠道病变记分均与健康对照组差异不显著(P>0.05),而与不免疫攻虫组差异显著(P<0.05),其卵囊减少率均在86%以上。研究结果表明,该巨型艾美耳球虫早熟株保持了良好的免疫原性,每只鸡免疫200或400个孢子化卵囊均可诱发鸡产生良好的免疫保护力,可考虑以200个孢子化卵囊作为该早熟株在疫苗制备中的推荐免疫剂量。     

巨型艾美耳球虫（Eimeria maxima）早熟弱毒株的选育

近 30年来 ,鸡球虫的免疫预防研究取得了令人鼓舞的进展。国外已有 4种球虫苗进入商品市场 ,国内也在积极开展免疫预防的研究。本教研组已研制出鸡球虫活苗 ,现正进行早熟苗的研制工作 ,已成功选育出 E.tenella,E.acervulina和 E.Brunetti的早熟弱毒株。本研究对致病性较强的 E.maxima进行早熟弱毒株选育 ,并对所选早熟株的生物学特性进行研究。1　材料与方法1 .1　实验动物　刚出壳蛋鸡公雏 ,购自中国农科院畜牧所 ,饲养于无球虫笼舍中 ,饲喂无抗球虫添加剂的无球虫污染的全价饲料 (由中国农科院畜牧所配制 ) ,饮水用自来水 ,试验前 ,检…     

鸡巨型艾美耳球虫早熟株免疫效果试验

为确定使雏鸡获得良好免疫效果的最小巨型艾美耳球虫(E.maxima)早熟株接种量,分别于4日龄对免疫攻毒组以不同剂量进行首免,11日龄以首免2倍剂量对二次免疫攻毒组鸡进行二免。一次或二次免疫后7 d或10 d用同源亲本株进行攻毒,检测免疫攻毒鸡相对增重率、卵囊减少率、病变记分减少率(RLS)和抗球虫指数(ACI)。结果显示,一次免疫剂量≥400个孢子化卵囊/只或两次免疫的一免剂量和二免剂量≥100个孢子化卵囊/只和200个孢子化卵囊/只时,各免疫攻毒鸡的相对增重率≥85%,RLS≥70%,卵囊减少率≥75%,相对保护率≥90%,ACI≥170,均达到良好免疫效果。故将E.maxima早熟株的一次免疫最小免疫剂量定为400个孢子化卵囊/只,两次免疫最小免疫剂量定为一免100个孢子化卵囊/只和二免200个孢子化卵囊/只。     

巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对8种抗球虫药的敏感试验

为检测巨型艾美耳球虫和柔嫩艾美耳球虫早熟株对常用抗球虫药的敏感性,选用地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星、盐霉素和拉沙洛西等8种抗球虫药进行鸡体试验,通过抗球虫活性百分比（percent of optimum anticoccidial aetivity,POAA）、病变记分减少率（reduction of lesion scores,RLS）、相对卵囊产量（relative oocyst production,ROP）和抗球虫指数（anticoccidial index,ACI）4项指标进行综合评价。结果表明,巨型艾美耳球虫早熟株对8种药物敏感;柔嫩艾美耳球虫早熟株对盐霉素轻度敏感,对地克珠利、氯苯胍、二硝托胺、癸氧喹酯、尼卡巴嗪、马杜米星和拉沙洛西敏感。本研究结果可为对球虫早熟株疫苗的开发与应用提供实验依据。     

巨型艾美耳球虫早熟株选育及其相关生物学特性研究

为了选育巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)早熟株并观测其生物学特性,运用Jeffers创立的球虫早熟株选育方法,对实验室保存的E.maxima进行了早熟株选育,并比较了所获得的早熟株与母株在卵囊大小、繁殖能力、致病性、免疫保护力等生物学特性上的差异。经过17代早熟株选育,E.maxima的潜在期由母株的142 h缩短至107 h,缩短了35 h。早熟株卵囊的长、宽及大小均比母株小,且差异显著(P0.05);卵囊形状指数比母株的稍大,但差异不显著(P0.05)。早熟株的卵囊繁殖能力较母株的低,排卵囊高峰出现在接种后d6,较母株提前1 d。在同等剂量之下,早熟株的致病性低于母株,但免疫保护力和免疫原性与母株相当。早熟株的选育成功,为球虫早熟株弱毒疫苗的研制以及早熟株相关基因的筛选提供了重要材料。     

巨型艾美耳球虫研究进展

巨型艾美耳球虫（Eimeria maxima Tyzzer，1929）是鸡的9种球虫之一，其显著特点是卵囊最大，且免疫原性最强。自1929年Tyzzer发现以来，国内外学者对其进行了大量研究，取得显著进展。本文回顾了自发现巨型艾美耳球虫以来，人们对其所进行的形态学、致病性、免疫原性、分子生物学等方面的相关研究进展，以期对该种球虫有较全面的认识。     

巨型艾美耳球虫早熟减毒株的选育

对巨型艾美耳球虫(长春株)经20代的早熟选育,其潜隐期由132h缩短到116h,成为早熟株.该早熟株不经选择传递2代,仍保持了早熟的特性.该早熟株比其亲代株繁殖力下降74%,致病力降低,但仍然保持了其免疫原性.     

鸡柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法的建立

为了建立一种能够快速实现对鸡柔嫩艾美耳球虫(Eimeria tenella)和巨型艾美耳球虫(E.maxima)同时进行检测的双重PCR方法,基于2种艾美耳球虫各自的ITS-1基因筛选2对特异性引物,对制备的阳性DNA样品进行PCR扩增,凝胶电泳检测结果显示,分别在约450bp和150bp处出现目的条带。对PCR反应中的退火温度、MgCl2浓度、DNA模板量等进行优化。结果表明,当退火温度为59℃、MgCl2浓度为2.5mmol/L、DNA模板量为2μL时,双重PCR扩增结果最佳。特异性检测结果显示,所建立的双重PCR对环形泰勒虫、羊巴贝斯虫、隐孢子虫和蓝氏贾第虫的扩增结果均呈阴性,表明建立的方法具有较高的特异性。成功建立了柔嫩艾美耳球虫和巨型艾美耳球虫双重PCR检测方法,为临床中鸡球虫病的快速诊断提供了一种可靠的检测方法。     

巨型艾美耳球虫感染鸡免疫反应与卵囊排出量的关系

鸡球虫病，由几种艾美耳球虫引起，是一种经济上非常重要的家禽寄生虫病，每年可导致全球养鸡业约两亿美元的损失。兔疫预防是防止球虫感染的一种手段，它依赖于对自然感染期间保护性免疫力发展机制。巨型艾美耳球虫是鸡体内致病性球虫中免疫原性最强的球虫之一，该种球虫无性生殖阶段的抗原比有性阶段抗原具有更强的免疫原性。虽然含种特异性兔疫诱导物的巨型艾美耳球虫抗原已得到鉴定，但球虫种内仍存在抗原差异，因此由巨型艾美耳球虫一个株诱发产生的免疫力对于同种球虫另一不同株系的攻击不能提供完全的保护。抗球虫免疫包括体液兔疫和…     

影响巨型艾美耳球虫单卵囊纯化试验成功的因素分析

鸡球虫病是重要的寄生性原虫病,由顶复器门的艾美耳属(Eimeria)球虫感染引起,全世界每年因球虫病造成的损失约80亿美元。巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)是鸡的9种球虫之一,也是集约化养鸡场最常见的三种球虫之一,危害严重,呈世界性分布,我国已有25个省(市、区)报道存在。1929年     

柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)马杜拉霉素抗药株和敏感株孢子化卵囊的蛋白质差异分析

利用双向电泳技术,对本实验室诱导保存的柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株与敏感株的蛋白质表达图谱进行差异比较和分析,发现两者之间差异有4个蛋白质斑点,利用MALDI-TOF-TOF质谱技术对3个差异明显的蛋白质斑点进行分析鉴定,获得3个明确的肽质量指纹图谱,通过在NCBInr数据库中检索分析,确定了其中1种蛋白质为球虫子孢子表面抗原TA4.另外2种蛋白质与疟原虫的Pfj1和线粒体转运蛋白受体Tom40具有很高的同源性,上述蛋白的鉴定将对球虫的抗药性产生机理和柔嫩艾美耳球虫马杜拉霉素抗药株的分之标志物提供了研究方向.     

巨型艾美耳球虫纯种鉴定和致病性研究

采用单卵囊感染技术，从鸡球虫混合种中分离出一个纯种球虫，经鉴定为巨型艾美耳球虫（ＥｉｍｅｒｉａＭａｘｉｍａＴｙｚｚｅｒ，１９２９）。该种球虫卵囊为卵圆形，测２４０个的大小范围为２１．２５～３６．２５×１７．５～３０．０μｍ，平均为２８．８１±３．０７×２２．９８±２．７７μｍ，形状指数１．２５。卵囊内有一颗折光性极粒，位于窄端，无外残体。测１２０个孢子囊的大小范围为１５．５～１８．５×７．５～１０．０μｍ，平均为１７．３５±０．６６×８．７４±０．５１μｍ。最短孢子化时间为３０小时，潜伏期１４２小时。用此卵囊对鸡作致病性试验，挑选６０羽１３日龄伊莎（ＩＳＡ）公鸡分为１个不感染组和４个感染组，每羽口服感染１万、５万、１０万或２０万个孢子化卵囊。结果所有感染组与不感染组的平均增重差异达到显著（Ｐ＜０．０５）或极显著（Ｐ＜０．０１）水平，整个试验仅在２０万个的感染组出现１６．７％的死亡率，各感染组的肠道病变记分分别为１．３３、１．８３、２．４２和３．０８。