碱性磷酸酯酶基因在鸡胚和人乳腺癌细胞中的表达

通过PCR方法从pSEAP2-control质粒获得人胎盘碱性磷酸酯酶(PLAP)基因,并克隆到鸡输卵管特异性表达载体(pAB-Sig-SV40)卵清蛋白基因调控区下游.pSEAP2-contro1和pAB-Sig-AP-SV40质粒转染鸡胚细胞和乳腺癌细胞(MCF-7),转染48h后以对硝基苯磷酸钠(pNPP)为底物检测PLAP的活性,结果pSEAP2-contro1在鸡胚细胞和MCF-7细胞中表达PLAP,pAB-Sig-AP-SV40在鸡胚细胞中不表达,而在MCF-7细胞中表达.说明鸡胚细胞可以表达有活性的人源糖蛋白,另外也说明在雌激素受体细胞中,鸡卵清蛋白基因启动子可启动外源基因表达.     

鸡W染色体基因CTIF在鸡胚组织中的表达研究

该文对CTIF在胚胎发育过程中的表达进行初步研究。通过设计特异性扩增W拷贝、Z拷贝以及同时扩增W和Z拷贝的引物（CTIF-W、CTIF-Z及CTIF-ZW）,对其在胚胎的不同日龄的组织的mRNA表达量进行分析,并通过FAD(fadrozole)诱导性反转探索其对性别表型的响应。结果显示,CTIF-W在孵化6 d的胚胎性腺中的表达高于尾部,且随胚胎发育表达量逐渐升高,而CTIF-Z和CTIF-ZW的表达趋势相似;而在6 d鸡胚的其他组织中,CTIF-ZW在肾中的表达显著高于其他组织,说明CTIF在发挥某些基础功能的同时可能还与肾脏的发育或功能相关。CTIF-Z在多数组织中表达量均呈现出雄性高于雌性,而CTIF-ZW在雌雄之间的表达量差异则相对较小,表明W拷贝可能在一定程度上调控了雌性中Z拷贝的表达。CTIF-W和CTIF-Z在12 d的胚胎组织中均表达,且均高度表达于脾脏组织中;CTIF-Z在大多数组织中雄性表达高于雌性。此外,CTIF-W表达受雌性向雄性性反转的影响而显著降低,而CTIF-Z则没有响应。综上,CTIF在鸡胚的肾脏和脾脏中高度表达,且其Z拷贝在雌雄组织之间存在剂量效应,而...     

早期鸡胚发育过程中增殖细胞核抗原在法氏囊的表达

法氏囊是鸟类特有的器官,是B淋巴细胞成熟的场所.本研究分析了鸡胚早期发育过程的中法氏囊形态变化及增殖细胞核抗原PCNA表达变化.结果表明鸡胚6.5 d(E6.5)时,法氏囊开始出现在鸡胚泄殖腔的最深处,从最开始E6.5的一些小的囊泡发育成E8的一个大腔,E8～E10,法氏囊继续发育.从E11开始,法氏囊开始出现一些小的皱褶,E11～E18,这些小的皱褶逐渐变得清晰,并贯穿整个法氏囊.在E9时,法氏囊轮廓形成,可以发现在表皮层和基膜层PCNA有着广泛的表达.统计分析表明表皮层的PCNA阳性率在100％左右,在整个发育早期几乎没有变化;而基层的阳性率随着胚胎的发育逐渐下降,在E9、E10、E11、E12、E14和E18表达率分别是97％、93％、71％、55％、56％和20％.     

琅琊鸡胚MSX2基因克隆及发育性表达变化

【目的】 克隆鸡Msh同源框2(Msh-homeobox 2，MSX2)基因，并对其进行生物信息学和胚胎期表达模式分析，为进一步研究MSX2基因的结构和功能提供支持。【方法】 对80枚琅琊鸡种蛋进行孵化，分别于孵化期第1、2、3、4、5、6、9、12、15、18天采集样品(1~6胚龄采集整胚，9、12、15、18胚龄分别采集心脏和肝脏)，提取总RNA，利用RT-PCR方法扩增并克隆MSX2基因，对其进行生物信息学分析;利用实时荧光定量PCR技术分析MSX2基因在琅琊鸡鸡胚和组织中的表达水平。【结果】 成功克隆了琅琊鸡胚MSX2基因，序列长度为818 bp，开放阅读框为780 bp，编码259个氨基酸。琅琊鸡MSX2氨基酸序列与日本鹌鹑、秃鹰和仓鸮的相似性最高，均为99.23%，与山羊的相似性最低，为74.54%;系统进化树分析结果显示，琅琊鸡与日本鹌鹑聚为一类。生物信息学分析表明，MSX2蛋白分子质量为28 235.18 u，等电点(pI)为9.71，没有信号肽和跨膜域，为不稳定的亲水性蛋白，主要分布在细胞核(60.9%);存在37个磷酸化位点、8个O-糖基化位点和1个N-糖基化位点;二级结构主要由无规则卷曲(63.32%)和α-螺旋(28.19%)组成。实时荧光定量PCR分析表明，MSX2基因在整胚(1~6胚龄)中的表达水平呈现先上升后下降趋势，且在4胚龄时表达水平最高，极显著高于1、2、3胚龄(P<0.01);MSX2基因在12胚龄鸡心脏中的表达水平极显著低于9胚龄(P<0.01);在9~18胚龄鸡肝脏中的表达量呈逐渐下降趋势，且在9胚龄鸡肝脏中表达水平最高(P<0.05)。【结论】 试验成功克隆了琅琊鸡MSX2基因序列，其表达模式在不同胚龄和同一胚龄不同组织间存在差异，为进一步探索琅琊鸡MSX2基因的结构和功能奠定了基础。     

降钙素基因相关肽在鸭腔上囊胚胎及胚后发育过程中的表达

应用免疫组织化学技术研究降钙素基因相关肽在鸭腔上囊胚胎及胚后发育过程中的表达特征.结果显示,降钙素基因相关肽强阳性细胞出现于20 d胚龄至胚后14周龄的滤泡间上皮,20 d胚龄至胚后17周龄的小结相关上皮,新生雏至胚后14周龄的滤泡皮质,24 d胚龄至胚后14周龄的滤泡髓质,20 d胚龄至胚后14周龄的肌层和小动脉平滑肌.结果说明,降钙素基因相关肽表达于鸭腔上囊的不同部位及不同发育阶段;在腔上囊退化期,降钙素基因相关肽的表达表现出明显的变化特征,这可能是导致腔上囊退化的原因之一;滤泡间上皮与小结相关上皮在神经肽表达方面存在差异.     

鸡胚免疫器官组织学发育过程观察

通过对孵化至12-21日龄鸡胚的免疫器官胸腺、脾及腔上囊进行组织学连续性观察，较为详细地描述了鸡胚免疫器官的组织发育过程。观察结果显示，胸腺的组织结构发育和形成较早，自12日龄起胸腺就已形成原始的胸腺小叶；虽然脾在12日龄时就已初具轮廓，但脾直到18日龄才开始隐约形成形态可辨的红髓和白髓；腔上囊淋巴滤泡自鸡胚发育到17日龄时即渐趋明显，但完整的滤泡皮质和髓质结构在出壳前仍然处于分化成熟阶段。     

鸡胚泌尿生殖器官组织学发育过程观察

正现代家禽的高度集约化生产要求家禽具有繁殖力高、生长迅速、饲料利用率高等特点,因此对家禽自身的生理特点的研究一直被人们重视~([1-2])。虽然鸡胚胎发育的研究历史较长,但详细描写鸡胚发育特别是泌尿生殖器官发育的资料却甚少,基本局限于解剖学资料~([3-5])和少量的鸡胚免疫器官发育的研究。研究以鸡胚的泌尿生殖器官发生发育为主要研究对象,重点观察鸡胚发育各期时泌尿生殖系统发生发育的组织学变化,为动物胚胎学与动物发育生物学理论的     

利用鸡胚表达谱数据筛选皮肤发育相关基因的研究

家鸡(Gallus domesticus)躯体被覆羽毛而跖部为鳞片状皮肤,代表了比较典型的皮肤结构,是研究皮肤调控机理的理想模型。本研究利用来航鸡胚胎期背部和跖部皮肤的表达谱数据(GSE62882),筛选不同日龄胚胎背部羽毛皮肤上皮(7 d、9 d)、间充质(7 d、9 d)和跖部鳞片皮肤上皮(9 d、11 d)、间充质(9 d、11d)的差异表达基因,探讨胚胎皮肤发育的调控通路。结果显示:羽毛皮肤上皮(7d、9d)鳞片皮肤上皮(9 d、11 d)差异表达显著基因(Padj0.05),分别为28个和116个;对4组极表达差异显著基因(P0.01)进行GO分析,发现富集在单细胞组织发育相关条目的差异基因最多,羽毛上皮(7 d、9 d)部分差异基因富集在细胞黏附;4组差异基因的KEGG分析中,筛选出共同的信号通路黏附斑激酶(FAK)信号通路,该通路介导的细胞黏附活动可能参与鸡胚胎皮肤发育过程。血小板源性生长因子(Platelet Derived Growth FactorSubunitB,PDFGB)、关键基因纤维连接蛋白1(Fibronectin1,FN1)和细胞基质蛋白(Periostin,POSTN)参与FAK信号通路,是值得关注的基因。     

BoLA-Ⅰ类基因在牛体细胞克隆胚早期发育中的表达

体外培养成熟的卵母细胞,通过核移植(Nuclear transfer,NT)技术,构建体细胞克隆(Somatic cell nuclear transfer,SCNT)胚胎,以体外受精胚胎作为对照组。收集MⅡ期卵母细胞、2细胞胚胎、4细胞胚胎、8细胞胚胎、16细胞胚胎、桑椹胚和囊胚,采用实时荧光定量PCR的方法检测经典BoLA-I基因和非经典BoLA-I基因在MⅡ期卵母细胞及各期胚胎中的相对表达量。结果显示,BoLA-I类基因在在牛MⅡ期卵母细胞中的相对表达量显著高于其在其他各时期胚胎的相对表达量(P0.05);BoLA-I类基因在牛SCNT胚和IVF胚中相对表达量随胚胎发育的变化趋势类似,随着第1次及随后的卵裂,经典BoLA-I、NC1、NC2基因mRNA的表达下降到极微的水平;NC3、NC4在整个发育阶段均表达很低甚至难以检测到它们表达。结果表明,本试验通过在体外制备及培养SCNT胚胎,初步建立BoLA-I类基因在其的表达模式,为BoLA-I类基因参与母胎免疫机制的研究奠定基础,为进一步寻找评估胚胎质量的标志物提供依据。     

猪TNNC1基因和TNNC2基因在肌肉组织中的发育性表达研究

为了探明肌钙蛋白不同亚型在肌纤维增殖与类型转变上的作用和分子机理,本研究采用荧光定量PCR技术检测了TNNC1基因和TNNC2基因在25日龄、70日龄和150日龄三个生长阶段的大白猪和山西黑猪的背最长肌、腰肌和股肌中的表达变化。结果表明:这两种基因在大白猪和山西黑猪的三种肌肉组织中均有表达,但存在统计学意义上的极显著差异。TNNC1基因在大白猪的背最长肌和腰肌中的表达存在相似的变化趋势。在大白猪上,TNNC1基因在25日龄时的背最长肌和腰肌中表达量最高,在150日龄时的表达量降到最低水平;在山西黑猪上,TNNC1基因在25日龄时的股肌组织中表达量较低,而在70日龄时的腰肌、70日龄时的股肌组织、150日龄时的股肌组织中表达量最高。在大白猪上,TNNC2基因在25日龄时的背最长肌和150日龄时的股肌中表达量较高;在山西黑猪上,TNNC2基因在70日龄时的腰肌和股肌中表达量较高。说明TNNC1基因与TNNC2基因在肌纤维发育与分化过程中具有重要的调节作用,可作为检测肌纤维类型的分子标记,为探索猪的肌肉发育和改善肉品质的研究提供理论参考。     

鸡膜联蛋白A2在DF-1细胞中的表达及亚细胞定位

根据GenBank已发表的鸡膜联蛋白A2(ANXA2)基因序列,设计合成一对特异性引物从DF-1细胞总RNA的反转录产物中扩增鸡ANXA2基因开放阅读框,通过酶切、连接等方法将其亚克隆到真核表达载体pEGFP-C1,构建重组真核表达载体pEGFP-ANXA2。利用脂质体转染法将pEGFP-ANXA2转染至DF-1细胞,24 h后分别检测融合蛋白EGFP-ANXA2在细胞中的表达及亚细胞定位情况。结果显示:成功构建了鸡ANXA2基因的重组真核表达载体pEGFP-ANXA2;将其转染DF-1细胞后得到与预期大小相符的EGFP-ANXA2蛋白条带,荧光显微镜观察显示EGFP-ANXA2主要定位在细胞质。研究结果为进一步开展鸡ANXA2在相关家禽病毒复制中的作用研究奠定了基础。     

消化道嗜银细胞在红嘴相思鸟胚后发育过程中的分布规律

用嗜银染色法研究1、5、9日龄和成年红嘴相思鸟的消化道各段内嗜银细胞的分布规律。结果显示:嗜银细胞形态多样,呈蝌蚪形、圆形、锥形等;消化道中嗜银细胞数量由多到少依次为腺胃、直肠、回肠、空肠和十二指肠,且随日龄增长呈增加趋势。表明红嘴相思鸟消化道嗜银细胞的分布可能与其种属有关,根据其分布与形态推测其有内分泌、外分泌和旁分泌3种功能。     

二氧化碳对鸡胚发育和孵化的影响

长期以来人们认为高CO2水平对家禽孵化是有害的,但近年来的研究显示在孵化的某些阶段高碳酸血对发育的胚胎是有利的.本文综述CO2对家鸡胚胎发育和孵化的影响,认为胚胎在发育的某些关键期需要CO2来增加胚胎的生长,刺激早期出雏,改善孵化率,提高出雏后生长.然而,不同孵化阶段对CO2耐受程度不同,需要进一步研究有利水平的适宜阶段和限度,以确定实际孵化生产中最佳的气体条件.     

HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达

比较分析HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同组织中的发育性表达规律,以探讨HSL和PPARγ基因与湘西黄牛脂肪酸代谢的关系。利用实时荧光定量PCR技术检测HSL和PPARγ基因在6,18,30月龄湘西黄牛的肝脏、肌肉组织(背最长肌)、脂肪组织(皮下脂肪和腹腔脂肪)中mRNA的相对表达量。结果表明:HSL基因在湘西黄牛肝脏、背最长肌、皮下脂肪和腹腔脂肪的4个部位中的表达量随月龄增长依次极显著减少(P0.01),而PPARγ基因正好相反。6月龄时,肝脏中HSL基因的表达量显著高于其他3个组织(P0.05),PPARγ基因皮下脂肪表达量显著高于肝脏(P0.05); 18月龄时,HSL基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为肝脏≈背最长肌皮下脂肪腹腔脂肪; PPARγ基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为皮下脂肪肝脏≈腹腔脂肪背最长肌; 30月龄时,HSL基因在4个组织中的表达量按大小关系依次为肝脏背最长肌皮下脂肪≈腹腔脂肪; PPARγ基因在4个组织间的表达呈现两两差异显著(P0.05),其表达量依次为肝脏皮下脂肪腹腔脂肪背最长肌。30月龄的粗脂肪(EE)含量和饱和脂肪酸(SFA)含量显著高于6月龄和18月龄的(P0.05),18月龄和30月龄湘西黄牛肉多不饱和脂肪酸(PUFA)含量显著高于6月龄的(P0.05); 30月龄时单不饱和脂肪酸(MUFA)的含量较高,但显著低于18月龄的(P0.05)。由此可见,HSL和PPARγ基因在湘西黄牛不同部位脂肪组织和肌肉组织中均有表达且随月龄与部位的不同表达不同,存在月龄和组织差异性,且二者的表达规律呈负相关。在动物生产应用中,建议湘西黄牛在30月龄左右再屠宰食用,口感及营养价值更好。     

鸡传染性支气管炎病毒S1基因在昆虫细胞中的表达

将含有传染性支气管炎病毒（ＩＢＶ）广东地方分离株Ｄ４１的Ｓ１基因ｃＤＮＡ（从ＡＴＧ到Ｓ前体蛋白裂解位点）的片段克隆到具有多角体启动子（ＰＸＩＶ）和人工合成启动子（Ｐｓｙｎ）的杆状病毒转移载体质粒ｐＳＸ－ＩＶＶＩ＋Ｘ３中，构建了重组转基因载体质粒ｐＳＸＩＶＶＩ＋Ｘ３－Ｓ１．Ｄ４１。用该重组转移质粒与无包涵体的粉纹夜蛾核型多角体病毒ＴｎＮＰＶ－ＳＶＩ－ＧＤＮＡ（ｏｃｃ－，ｇａｌ＋）共转染草地夜蛾（Ｓｆ９）细胞，筛选并纯化出既能表达Ｓ１基因又能形成多角体的重组病毒ＴｎＮＰＶ－ＩＢＶＳ１－ｏｃｃ＋（ｏｃｃ＋，ｇａｌ－）。通过间接ＥＬＩＳＡ和Ｗｅｓｔｅｒｎ－ｂｌｏｔ等方法在感染了重组病毒的Ｓｆ９细胞中成功地检测到分子量约６２０００的Ｓ１基因表达产物。虽然该重组Ｓ１糖蛋白可能由于Ｎ－糖基化不完全而分子量小于天然蛋白，但它可以像正常病毒粒子一样，被鸡抗ＩＢＶＤ４１株血清特异识别。     

绿色荧光蛋白在鸡胚成纤维细胞中的表达

应用阳离子脂质体介导法,将含绿色荧光蛋白(GFP)基因的质粒pEGFP-C1转染到培养至第二代的鸡胚成纤维细胞(CEF)中,同时使用活体DNA染料Hoechst3334(2H342)对CEF细胞核荧光染色,通过荧光倒置显微镜和RT-PCR方法检测GFP的表达产物。在荧光倒置显微镜下可见CEF的胞质和核均呈现绿色荧光,且细胞核的绿色荧光强度强于细胞质,在H342作用下,细胞核呈现蓝色荧光;转染细胞中转录产物经RT-PCR扩增后,在凝胶上可见与GFP基因片段分子量大小一致的条带。可见,GFP基因可以被转染至CEF中,并在CEF中表达。     

Ghrelin免疫反应阳性细胞在鸡外周器官中的定位分布与发育性变化

本试验应用免疫组织化学方法和显微图像分析技术,研究了2、16、30、44、58日龄岭南黄鸡外周器官中Ghrelin免疫反应阳性细胞的定位分布与发育性变化。结果表明,在鸡腺胃、肠、心、肝、脾、肺、肾、胰、脑垂体、肾上腺、胸腺、法氏囊中均可观察到Ghrelin免疫阳性反应。其阳性细胞类型包括:腺胃腺小管的内分泌细胞,肠道黏膜上皮和肠腺内的内分泌细胞,肠道黏膜下层和肌层间的神经丛,心内膜下层的蒲肯野纤维,肝血窦中的枯否氏细胞,脾的巨噬细胞和网状细胞,肺的巨噬细胞,肾脏肾小囊壁层的扁平上皮细胞和脏层的足细胞、球内系膜细胞和球旁复合体,胰腺的胰岛细胞,腺垂体的部分嗜酸性细胞和嗜碱性细胞,肾上腺的嗜铬细胞,胸腺上皮细胞、胸腺小体和巨噬细胞,法氏囊黏膜上皮和小结相关上皮内的内分泌细胞、囊小结的网状细胞、巨噬细胞、皮质髓质交界处的上皮细胞等。2~30日龄鸡,随着日龄的增长,各器官中的Ghrelin表达量增加,44、58日龄则有所下降。     

鸡白细胞介素18成熟蛋白基因真核表达质粒的构建及其在鸡胚成纤维细胞中的表达

通过PCR方法自含鸡白细胞介素18（Chicken interleukin-18，ChlL-18）成熟蛋白（mature ChIL-18，mChIL18）基因的克隆质粒中扩增mChlL-18基因，并将其克隆到真核表达载体pcDNA3．1／V5-His-TOPO中。阳性克隆鉴定后，在脂质体作用下转染鸡胚成纤维细胞（CEF），通过问接免疫荧光试验（IFA）检测到了mChIL-18在CEF中的表达。     

鸡全胚成纤维细胞在鸡痘细胞活疫苗生产中的应用

采用鸡胚全部组织(全胚法)制备鸡胚成纤维单层细胞和采用鸡胚部分组织(常规法)制备鸡胚成纤维单层细胞生产了鸡痘细胞活疫苗,接毒后均产生大量的感染多核细胞和典型细胞融合性病变(胡椒粒样).鸡胚效价检测表明,鸡痘细胞苗和鸡痘组织苗均可引起鸡胚绒毛尿囊膜水肿、增厚或痘斑,但鸡痘细胞苗产生痘斑数量明显高于鸡痘组织苗.鸡体刺种结果表明,鸡痘细胞苗诱发的免疫反应(发痘)好于鸡痘组织苗;与常规法相比,全胚成纤维单层细胞制备方法可提高鸡胚利用率2倍以上.全胚法也可应用于制备其他鸡成纤维细胞疫苗.