一种适于枯草芽孢杆菌总RNA提取的改良方法

枯草芽孢杆菌分泌多种胞外酶,采用普通试剂盒提取方法难获得完整、有效的RNA.在RNA试剂盒提取法的基础上,通过增加DEPC水洗涤菌体、溶菌酶裂解细胞、液氮冷冻预处理及调整RNA提取试剂添加比例等处理,可得到完整性良好的RNA.电泳检测结果表明,所获RNA条带清晰完整,无降解现象;提取的RNA可满足RT-PCR要求.     

不同植物组织RNA提取方法的比较分析

不同的植物组织都有较优化RNA提取方法。本文针对蜡质的红掌叶片、含糖较多的百合花瓣、含色素较多的万寿菊花瓣,使用改良CTAB法、Trizol法、快速RNA提取试剂盒法提取RNA,比较提取效果,以确定适合几种植物组织的最优RNA提取方法。结果表明:改良CTAB法提取的红掌叶片总RNA,Trizol法提取的百合花瓣总RNA和万寿菊总RNA,28SRNA和18SRNA条带都较清晰,且28SRNA亮度较18SRNA明亮,效果较好,部分RNA提取试验中5SRNA也较明亮,说明提取的总RNA有部分降解,但总RNA质量符合后续试验要求。RT-PCR检验符合上述结论。     

龙眼组织总RNA提取与纯化方法的研究

针对龙眼组织富含多糖、单宁、色素及酚类物质的特点,采用改良的SDS法和CTAB法进行龙眼顶芽、叶片和茎皮3种组织总RNA的提取与纯化研究。结果表明。两种方法提取的总RNA均具有28、18、5S3条清晰、完整的条带,且无降解现象;A260／A280均介于1．8-2．0之间。A260／A230均大于2．0。说明改良的SDS法和CTAB法提取的总RNA具有很高的纯度。可以满足后续分子生物学研究的要求。     

一种无需DEPC提取高质量棉花总RNA的方法

DEPC做为RNAnase抑制剂常用于RNA的提取,但其本身具有毒性,容易对操作者产生伤害并易造成环境污染。该实验以改良CTAB法为基础,提高β-巯基乙醇的浓度到10%,无需DEPC就能提取高质量的RNA。分别以不同陆地棉为材料提取了棉花的总RNA,测得OD260/OD280在1.7~2.1之间,且大部分样品都能清晰看到3条RNA条带,将此RNA反转录获得的cDNA为模板克隆到了棉花ATP合成酶β亚基基因,说明此方法提取的棉花总RNA既能满足分子生物学实验要求又大大地减少了毒害作用。     

葡萄花序总RNA提取方法研究

[目的]为筛选出提取葡萄花序总RNA的最佳方法。[方法]以藤稔葡萄花序为试材,针对葡萄花序中多酚、多糖类物质含量较高的特点,比较了CTAB法、SDS／酚法以及经改良的CTAB法对藤稔葡萄花序总RNA的提取效果。[结果]3种方法均能从葡萄花序中提取到总RNA。其中,经改良的CTAB法能有效抑制酚类物质和多糖对总RNA提取的影响,获得纯度高、完整性好的总RNA。其28srRNA亮度约为18SrRNA的2倍,RT—PCR分析表明：该方法提取的总RNA适合于下一步的研究。[结论]经过改良的CTAB法提取葡萄花序总RNA的效果最佳。     

广藿香不同组织总RNA提取方法的筛选与优化

分别采用Trizol法、改良Trizol法、CTAB法、改良CTAB法和异硫氰酸胍-SDS法等5种方法提取广藿香叶、茎、根及愈伤组织的总RNA,并用琼脂糖凝胶电泳和紫外光谱检测其提取效果。结果表明,Trizol法适用于广藿香叶片总RNA的提取,改良CTAB法适用于广藿香茎和愈伤组织总RNA的提取,而广藿香根总RNA的提取宜用改良Trizol法。RT-PCR检测结果表明,广藿香各组织的总RNA可直接用于分子克隆和基因表达分析等分子生物学试验。     

山葡萄总RNA提取方法的比较

以山葡萄成熟果皮及叶片为材料,对改良CTAB法,SDS法和Trizol法3种不同的总RNA提取方法进行了比较。结果表明,SDS法和Trizol法提取的总RNA均有拖带现象,有部分降解,Trizol法提取的总RNA中有DNA的污染;改良CTAB法提取山葡萄叶片和果皮的总RNA带形完整,28SrRNA和18SrRNA的荧光亮度接近2：1,A260／280值为1．8～2．0,该方法提取的总RNA纯度和提取量最高,提取出的总RNA可用于进行RT-PCR、构建cDNA文库等分子生物学的研究。     

蟠桃果实总RNA提取方法的研究

[目的]筛选获得提取蟠桃果肉中总RNA的适宜方法.[方法]以盛花后100 d的蟠桃为材料,采用Transplant plus植物总RNA提取试剂提取法、RNAisoTM试剂盒法、改良SDS法、改良CTAB法等四种方法提取总RNA.[结果]两种试剂盒法提取的总RNA质量差,有严重的基因组污染;改良SDS法提取物中含有大量的多糖;采用改良CTAB法所得RNA完整性好,条带清晰无降解,无基因组污染.经过RT - PCR和Northern blot检测后,表明该RNA能够满足后续分子生物学操作的要求.[结论]蟠桃果实总RNA适宜提取方法-改良CTAB法的确定为后续果实发育分子生物学的研究奠定了基础.     

烟草不同组织总RNA的提取方法初探

【研究目的】寻找烟草各个组织总RNA最佳的提取方法。【方法】以烟草K326的根、茎、叶、蕾、花和种子为材料,分别采用试剂盒法、Trizol法和CTAB法提取烟草6个组织总RNA进行对比。【结果】烟草不同组织总RNA提取方法有所不同,试剂盒法和Trizol法只能提取出根、茎、叶、蕾和花的总RNA,而不能提取种子总RNA;CTAB法能提取出6个组织的RNA。3种方法提取的RNA质量好,均能满足RT-PCR以及后续实验的要求。【结论】试剂盒法较Trizol法和CTAB法简单、快捷,适合于烟草除种子以外其余组织总RNA快速提取,CTAB法适合烟草所有组织总RNA提取。     

一种牡丹花瓣总RNA的提取方法

利用CTAB改良法,以富含花青素类物质的牡丹花瓣为材料提取总RNA,经紫外光谱分析A260/A280比值为1.9~2.0;电泳检测到28S,18S和5S rRNA3条清晰的带,带的亮度强,且28S是18S亮度的2倍左右,说明提取的RNA完整、未降解。     

用改良的TRIZOL法快速提取仿刺参和中间球海胆的总RNA

用改良的TRIZOL法和普通TRIZOL法分别提取仿刺参Apostichopus japonica体壁、肠、体腔液和中间球海胆Strongylocentrotus intermedius的管足、性腺、齿间肌的总RNA。结果表明:用普通TRIZOL法提取时间长,电泳条带不很清晰,存在降解且各个组织提取的状况不稳定,杂质量多;而用改良TRIZOL法能够快速提取仿刺参、海胆组织的总RNA,电泳后得到的28S rRNA和18S rRNA条带清晰、完整性好、纯度高、得率高,其A/A为2.04².14,总RNA浓度为44.962.14,总RNA浓度为44.96¹15.02 ng/μL。     

用改良的TRIZOL法快速提取仿刺参和中间球海胆的总RNA

用改良的TRIZOL法和普通TRIZOL法分别提取仿刺参Apostichopus japonica体壁、肠、体腔液和中间球海胆Strongylocentrotus intermedius的管足、性腺、齿间肌的总RNA。结果表明:用普通TRIZOL法提取时间长,电泳条带不很清晰,存在降解且各个组织提取的状况不稳定,杂质量多;而用改良TRIZOL法能够快速提取仿刺参、海胆组织的总RNA,电泳后得到的28S rRNA和18S rRNA条带清晰、完整性好、纯度高、得率高,其A/A为2.04~2.14,总RNA浓度为44.96~115.02 ng/μL。     

草莓不同组织RNA提取方法的改良研究

探讨一种适于草莓不同组织的RNA提取的改良方法。通过增加裂解液震荡强度、离心柱多次吸附、增加去蛋白液温育次数及漂洗次数等步骤对EASYspin RNA提取总RNA操作方法进行改进。结果表明,改良方法提取的草莓根、茎、叶、果实、花中的总RNA,电泳检测都出现清晰的28S和18S两条明显的条带,表明总RNA完整性较好;紫外分光计分析其OD260/OD280值在1.88至2.06之间,OD260/OD230值均大于2.0,RNA浓度含量为310~500μg/mL,表明提取的总RNA纯度好、含量高;基于RNA中mRNA反转录的RT-PCR扩增Actin基因分析结果表明,改良方法提取的草莓不同组织的总RNA质量高。总之,经过电泳、紫外、反转录分析结果证实,改良EASYspin适于草莓果实等不同组织总RNA的提取,是草莓类似果树种类总RNA提取的首选借鉴方法。     

辣椒不同组织总RNA提取方法的比较

采用3种不同方法分别提取辣椒不同组织部位的总RNA,以期筛选适合于辣椒总RNA提取的材料与方法。1.2%琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测结果表明,方法二提取的辣椒叶片和茎总RNA样品的28 S和18 S条带明亮,质量好,产率高;对于辣椒幼果,方法三的提取效果最好;辣椒总RNA的提取效果具有组织特异性,不同组织部位RNA提取需有不同方法。     

Trizol试剂法快速高效提取3种作物不同组织总RNA

[目的]建立适用于禾本科作物不同组织总RNA的快速、高效提取方法,为进行后续的分子生物学研究奠定基础.[方法]采用Trizol试剂法,通过改变抽提上清液吸取量、沉淀方法及沉淀漂洗次数,对甘蔗、玉米和水稻的叶片、茎尖和根尖的总RNA提取方法进行优化.[结果]与吸取0.4 mL上清液相比,吸取0.2 mL上清液的总RNA OD260/OD280、OD260/OD230值分别在1.95~2.00和2.11~2.44,所获得的总RNA纯度较高.沉淀漂洗两次的OD260/OD230值(2.11~2.47)明显高于沉淀漂洗1次的总RNA OD260/OD230值(1.01~1.61),总RNA纯度较高.经异丙醇沉淀所得的各材料的总RNA 28S、18S和5S谱带清晰,无拖尾现象,总RNA完整性较好;LiCl沉淀法的RNA条带较模糊粘连,5S条带明显弥散,总RNA产率相对较低.以Trizol-异丙醇法提取的甘蔗总RNA为模板进行GAPDH基因片段扩增,所获甘蔗的叶片、茎尖和根尖的GAPDH基因表达丰度很强,无特异扩增,目的片段长度为153bp.[结论]改良Trizol-异丙醇法提取甘蔗、玉米和水稻不同组织的总RNA带型清晰、完整性好、纯度和产率高,适用于快速、高效提取禾本科植物不同组织总RNA.     

非洲菊不同组织总RNA提取

以非洲菊为材料,采用Trizol试剂法、改良的异硫氰酸胍法、CTAB法和尿素—氯化锂法,提取非洲菊的花、花蕾、叶、花梗和根的总RNA。所得RNA经1%琼脂糖凝胶电泳以及紫外分光光度计分析,结果表明Trizol法和改良的异硫氰酸胍法适用于花和根组织,尿素-氯化锂法对花蕾和叶组织RNA有较好的提取效果,而花梗组织RNA最好采用CTAB法。     

一种自制的RNA分离试剂及其在鱼组织总RNA提取中的应用

【目的】尝试自制一种价格低廉的RNA分离试剂,并检验其应用效果。【方法】以商业化的TRizol Reagent为对照,使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA,采用分光光度计法、变性琼脂糖凝胶电泳法和RT-PCR检测其品质,并用提取的总RNA合成草鱼皮肤cDNA。同时使用自制RNA分离试剂提取斑马鱼总RNA,通过RT-PCR进行E2F5基因全长（1 092 bp）的克隆,构建其真核和酵母表达载体并测序。【结果】使用自制RNA分离试剂提取草鱼皮肤组织总RNA的品质与用TRizol Reagent提取的总RNA品质相当,用之成功地合成了草鱼皮肤cDNA。使用自制RNA分离试剂提取得到了更高品质的斑马鱼总RNA,用之成功地克隆了斑马鱼E2F5基因,构建了其真核表达载体pcDNA3.1-flag-Zf E2F5和酵母表达载体pGAD GH-Zf E2F5。【结论】自制RNA分离试剂能够用于鱼类组织总RNA的提取,提取的总RNA能满足后续cDNA合成及RT-PCR克隆特定基因的需要。     

仙人掌总RNA 提取方法的改进与分析

利用亚硫酸钠分别与TRIzol试剂、RNA plant plus Reagent试剂、BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂、艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂和OMEGA Plant RNA试剂结合的方法,均可获得高质量的仙人掌茎总RNA。反转录成cDNA,RT-PCR结果显示,5种方法提取的总RNA反转录后均能特异性扩增到matK基因。使用TRIzol试剂盒、RNA plant plus Reagent试剂盒和艾德莱EASY spin Plus植物RNA快速提取试剂盒提取RNA质量相对较高,在cDNA以1∶100稀释时能检测到matK基因;而使用BioTeke多糖多酚植物总RNA提取试剂盒或OMEGA Plant RNA试剂盒时,灵敏度稍低,在cDNA以1∶10稀释时,能检测到目的基因。利用亚硫酸钠结合不同植物总RNA提取试剂盒进行比较研究,为后续制备仙人掌茎高质量cDNA文库及其分子生物学研究奠定基础。     

菠萝果实不同部位总RNA提取方法比较

以不同发育时期和不同部位的菠萝果实为材料,比较了改良SDS法、改良CTAB法和Trizol试剂盒法提取RNA的效果。结果表明:3种方法提取的RNA差异明显,其中改良SDS法的效果最佳,其提取的RNA质量较好,无DNA污染,OD260/OD280和OD260/OD230接近2.0,产量达到464.3μg/g.FW以上,该方法提取的RNA能满足RT-PCR、Northern blot和cDNA文库建立等分子生物学研究的需要。