农杆菌介导CBFl基因转化安祖花的研究

[目的]为获得耐低温安祖花奠定基础.[方法]利用农杆菌介导CBFl基因侵染安祖花,并研究不同浓度乙酰丁香酮(AS)和侵染时问对转化后安祖花抗性愈伤组织的存活率和抗性芽分化率的影响.[结果]以重组质粒pBI121-CBFl为模板,利用CBFl cDNA全长的引物序列进行PCR扩增,获得约650 bp的片段,表明重组质粒构建成功.在抗性培养基上筛选12周后,部分愈伤组织褐化死亡.用100 μmol/L AS作为诱导物质时,抗性愈伤组织存活率和抗性芽的分化率较高.农杆茵侵染时间对转化后愈伤组织存活率和抗性芽分化率有一定影响.[结论]当AS浓度为100 μmol/L、侵染时间为10min时,抗性愈伤组织的存活率及分化率最高,分别为48.6%和11.46%.     

农杆菌介导类胡萝卜素合成酶基因LycB转化菊花的研究

以菊花愈伤组织为转化受体,通过农杆菌介导法,利用番茄红素β-环化酶基因(LycB)对菊花进行转化,以抗性愈伤率为指标,探讨了侵染时间、共培养时间、农杆菌菌液浓度、乙酰丁香酮(AS)浓度等因素对转化的影响,建立了LcyB基因转化菊花的遗传转化体系。结果表明：农杆菌侵染菊花愈伤组织的最佳时间为5min;农杆菌菌液浓度OD600值0．55;愈伤组织与农杆菌共培养的时间以3d效果最好;添加AS可提高抗性愈伤率,适宜的AS浓度为100μmol／L;采用Hyg浓度由低到高的筛选方式可有效提高抗性愈伤率;PCR分子检测初步证明目的基因LycB已转入菊花愈伤组织中。     

利用正交设计优化百子莲农杆菌转化条件的初探

利用正交试验设计,以百子莲胚性愈伤组织为受体材料,通过GUS染色确定遗传转化率,对农杆菌介导的百子莲遗传转化体系进行了优化。结果表明,百子莲遗传转化优化体系为：愈伤组织预培养7 d、菌液浓度（OD600）为0.9、侵染时间为5 min、预培养培养基中乙酰丁香酮（AS）的浓度为50μmol.L-1、侵染菌液中乙酰丁香酮（AS）的浓度为100μmol.L-1。在优化的转化条件下,可提高农杆菌EHA105菌株介导的百子莲愈伤组织遗传转化率。     

根癌农杆菌法转化康乃馨的条件探索

[目的]为构建高效的康乃馨遗传转化体系奠定基础。[方法]以康乃馨叶片为受体材料,通过抗G418筛选,探讨预培养时间、根癌农杆菌菌液浓度、共培养时间等因素对根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的影响。[结果]20 mg/ml G418是康乃馨叶片转化的适宜浓度。随着预培养时间的增加,康乃馨叶片的存活率降低,预培养2~3 d时抗性芽分化率较高。当根癌农杆菌OD600为0.5~0.8时,抗性芽分化率较高,适合康乃馨转化。共培养2~3 d时,康乃馨叶片生长状态好,抗性芽分化率最高。[结论]预培养、共培养各2~3 d,菌液浓度OD600为0.5~0.8是根癌农杆菌介导康乃馨遗传转化的适宜条件。     

油菜农杆菌介导转化体系的优化

以甘蓝型油菜湘油15号为试验材料,对农杆菌转化体系中外植体预培养时间、培养基中AgNO_3浓度、农杆菌侵染时的菌液浓度、共培养基pH值等进行了优化研究,确立了优化的遗传转化条件。结果表明,外植体在农杆菌侵染和共培养前预培养3 d,可明显提高子叶外植体和下胚轴外植体出愈率和抗性芽苗分化率,有利于获得较高的转化效率;在基因转化中,AgNO_3的最佳使用浓度为30μmol/L,最佳的农杆菌侵染菌液OD_(600)为0.4,共培养基pH值5.4是油菜农杆菌介导转化中优化的转化条件。     

乙酰丁香酮对不同糯玉米受体系统遗传转化的影响

乙酰丁香酮(AS)对农杆菌介导的遗传转化有着重要的影响,为提高糯玉米遗传转化率,本试验以菜农糯38的茎尖和幼胚愈伤组织为受体材料,比较悬浮培养基的pH,乙酰丁香酮添加方式及浓度对糯玉米遗传转化的影响.结果表明:悬浮培养基pH为5.2,在伤口处滴加2μl浓度为150 μmol/L的AS能显著提高糯玉米茎尖转化的效率.玉米愈伤转化中,在侵染液中添加5 mg/L的AS能显著提高抗性愈伤率.     

农杆菌介导小麦花药遗传转化影响因素的研究

采用农杆菌介导法对小麦花药愈伤组织进行转化,并探讨了影响其转化的因素。结果表明：不同基因型的花药培养力存在显著差异,抗性愈伤组织诱导率、抗性芽分化率、抗性植株获得率在不同的基因型之间也存在着很大差异;除小麦品种石4185外,冀5265也是小麦花药农杆菌转化的良好受体基因型;侵染后的愈伤组织在无茵滤纸上共培养2d,效果最好。     

根癌农杆菌介导的水稻遗传转化体系的研究

[目的]对新疆推广种植的水稻品种进行组织培养,探索适合新疆水稻品种的遗传转化条件,为新疆水稻的遗传改良工作奠定基础.[方法]以新疆3个水稻品种成熟胚诱导的良好胚性愈伤组织为受体,以SiPEBP为目的基因,应用农杆菌介导法对水稻进行遗传转化,同时以抗性愈伤率为依据,对影响转化的愈伤诱导率、农杆菌侵染浓度、时间和共培时间进行优化研究.[结果]在NB培养基中添加2 mg/L的2,4-D的愈伤诱导率高;相比25℃、暗培养,28℃、持续光照培养可使诱导率提高到100;,且缩短了诱导周期;在OD600值为0.3的农杆菌菌液浓度,侵染愈伤30 min,共培养2d,同时添加一张无菌滤纸,有利于提高转化效率;通过培养条件的优化,3个水稻品种的抗性愈伤率均达到40;以上.[结论]新疆水稻农杆菌转化的几个主要因素,建立了农杆菌转化体系.     

农杆菌介导的旱稻遗传转化主要影响因素

以旱稻品种鲲旱1号为材料,对农杆菌介导的遗传转化中愈伤组织的诱导、筛选、分化等的影响因素进行了研究。将PPA抗虫基因和bar抗性基因成功导入旱稻愈伤组织,经过筛选和分化最终获得了抗性植株。结果表明,改良的NB培养基适合于旱稻愈伤组织的诱导;当农杆菌浓度在OD600 nm为0.2~0.3,侵染时间为20 min时,转化效果最好;用40 mg/L的PPT筛选30 d后,可以获得抗性愈伤组织;将已筛选的抗性愈伤组织在预分化培养基上培养5~7 d能有效提高分化率。     

AP70抗病基因转化番茄的研究

[目的]通过基因工程提高番茄抗病性。[方法]通过冻融法将含萝卜抗真菌蛋白基因的质粒AP70转入农杆菌LBA4404中,再用农杆菌介导法将AP70抗病基因对番茄进行遗传转化,研究预培养、侵染时间等因素对AP70转化番茄的影响。[结果]带柄子叶诱导番茄产生不定芽的效率比子叶块效率高。农杆菌浸染番茄子叶前预培养1 d,不仅能提高子叶存活率,而且可降低共培养时外植体的污染率。农杆菌对番茄子叶的侵染时间最好不超过5 min。外植体筛选培养基中Kam的浓度不宜太高或太低,可获得少量转AP70基因的抗性芽。[结论]农杆菌对番茄子叶侵染前要进行稀释,且侵染时间不宜超过5 min,共培养1 d时转化率较高。     

蝴蝶兰·文心兰遗传转化体系的初步研究

[目的]优化蝴蝶兰和文心兰的遗传转化条件。[方法]以培养3周的蝴蝶兰原球茎和文心兰愈伤组织为试材,以大肠杆菌为生长培养基,研究3种农杆菌菌株的侵染力,以及菌液浓度、侵染时间、酚类诱导物(AS)和共培养时间对转化的影响。[结果]以蝴蝶兰原球茎为农杆菌介导的外植体进行遗传转化的优化条件为:预培养时间3d,菌液侵染浓度OD600=0.3,菌液侵染时间10min,pH值5.4,菌液侵染后,与农杆菌共培养5d并添加100μmol/LAS,此条件下的瞬间表达率最高。将蝴蝶兰遗传转化的条件运用于文心兰,得到的转化率较低。3种农杆菌菌株中,EHA105菌株侵染力最强,其次是AGL1,LBA4404最弱。[结论]该研究为进一步研究蝴蝶兰和文心兰的遗传转化体系提供理论依据。     

提高草木犀遗传转化植株再生率技术的研究

[目的]确定草木犀遗传转化植株的适宜的除草荆选择压力。[方法]分别以草木犀试管苗的子叶、下胚轴和破坏生长点的茎尖为外植体,在含有0、1、3、5、10mg／L除草剂草丁膦的分化培养基Ms＋BA3mg/L＋LAA0．2mg/L中对其进行分化培养,筛选适宜的除草剂选择压力,在此选择压力下,对外植体进行遗传转化,并对转化芽进行分子水平检测。[结果]当除草剂浓度为3mg/L时,所有外植体均无再生芽;转化培养后,子叶、下胚轴和破环生长点的茎尖的再生率分别为0．48％、4．29％和10．1t％;分子水平检测结果显示,外源基因已成功转入草木犀转化芽中。[结论]除草剂对草木犀外植体的适宜选择压力为3mg／L,破坏生长点的草木犀茎尖对外源基因的转化效率较高。     

红掌愈伤组织培养及不定芽分化影响因素的研究

[目的]构建红掌愈伤组织培养再生植株的技术体系.[方法]以红掌叶片和叶柄愈伤组织为继代培养的外植体材料,探讨红掌品种、外植体大小、激素条件对愈伤组织不定芽分化的影响.[结果]红掌品种YNG1叶片愈伤组织的不定芽分化率最高,叶柄愈伤组织的不定芽分化率则以品种YNG2最高,而品种YNG3和YNG5仅叶片愈伤组织能分化不定芽,叶柄愈伤组织均无分化;与细胞分裂素6-BA相比,向分化培养基中添加ZT与TDZ可促进叶片愈伤组织的增殖及不定芽分化;选取直径约1.0～1.5 cm的愈伤组织块进行继代培养,不定芽分化较多,同时可缩短不定芽分化时间.[结论]该研究为构建稳定高效的红掌组培快繁技术体系提供了新的试验依据.     

农杆菌介导大豆萌动种子遗传转化的影响因素研究

[目的]提高农杆菌介导大豆遗传转化效率。[方法]以萌发1 d的半片大豆种子为目标组织,通过GUS瞬时表达检测,研究乙酰丁香酮、菌液的浓度及侵染时间对转化效率的影响。[结果]在共培养基中添加200μmol/L的乙酰丁香酮时,GUS瞬时表达效率最高。当农杆菌生长到对数生长期(D600 nm=0.5)时,转化效率最高,平均每个外植体上出现9.4个蓝色斑点。农杆菌侵染时间不宜过长,以30~60 min较好。[结论]乙酰丁香酮浓度、农杆菌菌液浓度和侵染时间均影响农杆菌介导大豆遗传转化效率。     

安祖花组织培养和植株再生的研究

[目的]为安祖花幼苗的规模化生产提供依据。[方法]以叶片、叶柄以及组培苗气生根为外植体,进行安祖花愈伤组织的诱导,探索安祖花再生植株规模化生产的最佳途径。[结果]叶片、叶柄以及组培苗气生根均能成功地诱导产生愈伤组织,其中叶片诱导率最高(92%),组培苗气生根诱导率可达82%。诱导愈伤组织分化产生不定芽的最佳培养基为1/2MS+6-BA1.0 mg/L+KT0.1 mg/L。培养基1/2 MS+IBA0.5 mg/L和MS+IBA0.5 mg/L均可诱导不定芽产生根,无明显差异。将珍珠沙和花泥按1∶1(V∶V)混合后作为组培苗移栽的培养基质,经30 d培养,幼苗成活率达91%。[结论]以气生根为外植体,规模化再生植株只需55~60 d,生产成本也大大降低。     

PP333对百合试管苗壮苗和生根的影响

[目的]探索多效唑的适宜浓度,提高百合试管苗的质量和移栽成活率。[方法]研究不同浓度PP333(0.3、0.5、1.02、.0和3.0 mg/L)对百合试管苗的壮苗和生根的影响。[结果]适当浓度的多效唑能明显提高百合试管苗不定芽分化的数量,促进试管苗根的分化,提高生根的数量。多效唑对百合植株有显著的矮化作用。随着PP333浓度的增加,其矮化效果明显加强。1.0 mg/L PP333能有效地壮苗并起到矮化的作用;当PP333浓度为0.3~1.0 mg/L,百合试管苗的生根率和平均根数明显高于对照;当PP333浓度为2.0~3.0 mg/L时,百合试管苗的根变黄、变短。这说明低浓度PP333对百合试管苗的生根有明显促进作用,而高浓度PP333对百合试管苗生根有明显的抑制作用。[结论]适于百合壮苗的最佳PP333浓度为1.0 mg/L。     

农杆菌介导玉米幼胚愈伤组织遗传转化体系的优化

以玉米骨干自交系‘郑58’的幼胚为材料,用农杆菌介导法对诱导培养出的胚性愈伤组织进行三价植物表达载体的遗传转化,同时对影响转化效率的主要因素进行研究.结果表明,当浸染液和共培养培养基中乙酰丁香酮(AS)的浓度为150mg·L-1时,抗性愈伤组织获得率显著提高17.39%;在菌液浓度D600为0.3、浸染时间为20min、共培养时间为60h、共培养温度为22℃、共培养培养基pH为5.4以及头孢霉素浓度为400mg·L-1的试验体系下,有利于提高玉米抗性愈伤组织的获得率,其获得率最高可达17.26%.     

巨型红掌茎尖组织培养及快繁技术的研究

[目的]建立巨型红掌组织快繁体系。[方法]以巨型红掌基部侧芽为外植体,消毒后,接种到舍有不同浓度激素的MS培养基上,培养60d后,从中筛选出分化率最高的培养基;组培苗经过生根培养后,平均长有3-4条根时,移栽到不同的栽植基质上,从中筛选出移栽成活率最高的基质。[结果]培养基配方为6-BA3．0mg／L＋Kr0．3mg/L＋NAA0．3mg／L时,巨型红掌的分化率最高,光照强度和时间分别为2000lx和12h／d时,巨型红掌的分化效果最好,每个侧芽分化芽数达4～5个。培养基配方为1／2MS＋IBA2．0mg/L＋NAA0．2mg/L时,巨型红掌的生根率最高,达95.8％。草炭土＋蛭石（1：1）栽培基质中,巨型红掌组培苗生长良好,移栽成活率达87．0％。[结论]研究建立的巨型红掌组织快繁体系可为红掌规模化生产种植提供技术支撑。