鸽新城疫灭活疫苗的研制及免疫效果研究

利用近年来分离到的鸽Ⅰ型副黏病毒ND32株进行鸽新城疫油乳剂灭活疫苗的研制,并对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验,结果表明制备疫苗的各项指标均符合生物制品通则的要求,对疫苗的最小免疫剂量、抗体产生及免疫持续期、与同类产品的交叉攻毒保护对比效果进行了进一步试验,结果表明疫苗的最小免疫剂量为0.15 mL/只,疫苗以0.3 mL/只免疫剂量进行一次免疫,免疫持续期为3个月,以0.3 mL/只免疫剂量进行二次免疫,免疫持续期可达6个月.交叉攻毒保护对比试验结果表明所制备的鸽新城疫灭活疫苗对鸽Ⅰ型副黏病毒ND32株和鸡新城疫病毒北京株(CVCC AV1611)的攻毒保护效果均优于鸡新城疫(La Sota株)灭活疫苗.     

禽流感(H5、H9亚型)二价油乳剂灭活疫苗试验研究

本品系用A型禽流感病毒A／Ostrich／Denmark／72420／96(LPAI-H5N2)株及A／Chicken／Shanghai／1／98(H9N2)株分别接种易感鸡胚、收获感染胚液、超滤浓缩后经甲醛溶液灭活，加油佐剂混合乳化制成的油乳剂灭活疫苗。疫苗用4周龄SPF鸡作安全试验，每只鸡肌肉注射2ml，结果表明试验鸡均无全身症状和局部病变，证明疫苗安全性良好。取疫苗一羽份免疫4周龄SPF鸡作效力检验，免疫鸡全部获得保护，对照鸡全部感染或死亡。经不同免疫剂量测定，证明一羽份疫苗中至少含有8个免疫剂量。免疫干扰试验证明两种抗原具有免疫协同作用。     

鸡新城疫-鸡传染性支气管炎-禽流感三联灭活油乳剂疫苗的研制与免疫试验

用鸡新城疫弱毒株Lasota株、鸡传染性支气管炎病毒弱毒株M-H120和禽流感病毒HB1（H9N2）株做为抗原制成油乳剂灭活苗，并对其进行了物理性状、无菌情况、安全性、灭活效果、保存期和免疫效力等方面的检验。证明所制备疫苗完全符合质量标准，鸡体对该疫苗3种抗原均产生了良好的免疫应答。攻毒试验结果证明，免疫鸡能良好地抵抗同种强毒的攻击，所制备疫苗4C放置保存12个月后其免疫效力没有下降。     

新城疫浓缩灭活疫苗的初步研究

以10^3.0、10^4.0、10^5.0 EID503个不同剂量接种非免疫鸡胚,收获鸡胚液,病毒含量测定结果显示,以10^3.0-10^4.0～EID50剂量接种的鸡胚收获的抗原含量高。用该优化方法繁殖了一批新城疫抗原,采用截留分子量为100kD的浓缩滤膜对新城疫抗原进行浓缩,对不同浓缩倍数的新城疫抗原制备疫苗进行了免疫效力试验。结果表明,以新城疫3倍浓缩抗原制备疫苗,以5μL剂量（现有相关产品效力检验的1／4剂量）免疫SPF鸡,即可达到现有同类产品的效力检验质量标准,高抗体水平至少可以维持35d。本研究为进一步研制新城疫灭活浓缩疫苗用于低剂量免疫肉鸡提供了基础。     

H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株灭活疫苗的研制

利用H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株进行灭活疫苗的研制,并对疫苗的免疫效果进行评价,为家禽H7N9亚型流感的防控提供科学数据及手段。将AIV-rGD76株用灭菌生理盐水作104倍稀释后,接种11日龄非免疫鸡胚,37℃孵育72h后收获感染鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后,加矿物油佐剂乳化制成油乳剂灭活疫苗,对制备疫苗的性状、安全性、免疫效力等进行检验。结果显示,制备的3批重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株)均为油包水型,黏度均在50cP以内,对3批疫苗取样,样品经3000r/min离心15min,管底无水相析出。安全性试验结果显示,将疫苗按1mL/只超剂量接种3周龄SPF鸡,试验鸡在观察期内全部健活,未出现局部或全身不良反应,表明疫苗对SPF鸡具有良好的安全性;免疫效力及攻毒保护试验结果显示,用疫苗按0.3mL/只的剂量免疫接种3周龄SPF鸡1次,免疫接种后21d试验鸡血清中rGD76株的HI抗体平均效价可达8log2以上,使用H7N9亚型高致病性禽流感病毒GD16株滴鼻接种0.2mL/只(含100LD50)对免疫鸡进行攻毒,疫苗对免疫鸡的保护率均为100%。在实验室条件下研制出重组禽流感病毒灭活疫苗(H7N9亚型,rGD76株),疫苗的各项指标均符合标准。     

膜分离法纯化浓缩的猪细小病毒灭活疫苗效果研究

为了研究纯化浓缩的猪细小病毒灭活疫苗的免疫效果,应用微滤/超滤管式陶瓷膜分离系统对猪细小病毒细胞收获液进行纯化浓缩,使浓缩液病毒平均含量由10~(4.7)TCID_(50)/mL提高到10~(6.5)TCID_(50)/mL;将纯化浓缩的病毒液经检验合格后,进行甲醛灭活,与注射用矿物白油佐剂制成油包水灭活疫苗;按照猪细小病毒灭活疫苗的质量标准,对制备的灭活疫苗进行检验与免疫效果试验。结果显示:纯化浓缩的猪细小病毒液杂蛋白去除率平均达到71.6%左右;制备的三组灭活疫苗检验均合格;免疫至63 d时,免疫猪体内抗猪细小病毒抗体(HI)水平分别为:纯化浓缩的灭活疫苗平均高达9.62 log_2稀释倍数,常规疫苗平均为8.78log_2稀释倍数,差异显著(P0.05)。试验表明:疫苗病毒细胞收获液进行膜纯化技术处理后,免疫效果显著优于未经纯化的常规灭活疫苗。     

不同禽流感病毒含量的新-流二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平的监测

将未浓缩的新城疫抗原分别与未浓缩的、浓缩3倍、浓缩6倍的禽流感抗原混合,并制备成三组鸡新城疫、禽流感（H9N2 HP株）二联灭活疫苗（简称新-流二联灭活疫苗）,分别免疫21日龄SPF鸡,每羽0.3 mL,同时设置未免疫的空白对照组,免疫组与对照组均在免疫前及免疫后7、14、21、28、35 d进行采血,检测新城疫和禽流感抗体。结果发现,各免疫组在免后不同日龄的新城疫抗体基本一致,禽流感病毒抗原浓缩倍数越高（即禽流感病毒含量越高）的新-流二联灭活疫苗,免后14、21 d的抗体也越高;从免后21 d开始,各免疫组的禽流感抗体水平差异逐渐减小,免疫后禽流感抗体水平的高低可以反映该疫苗的免疫效果。试验结果表明,该疫苗可以通过浓缩提高抗原病毒含量的方法来提高免后早期抗体水平,取得良好的早期免疫效果。     

膜分离法纯化浓缩猪繁殖与呼吸综合征灭活病毒的效果试验

将效力检验不合格的猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)病毒灭活液采用不同孔径的微孔滤膜、超滤膜滤除杂蛋白、超滤浓缩、除菌处理得到纯化浓缩的PRRS灭活病毒液;将检验合格的纯化浓缩的病毒灭活液与注射用矿物白油佐剂制成油包水灭活疫苗;对制备的灭活疫苗进行各项检验及免疫效果试验。结果显示,纯化的PRRS灭活病毒液杂蛋白去除率平均达到66.8%以上;灭活疫苗的物理性状与无菌检验、安全检验、效力检验均合格,免疫猪体内抗PRRS病毒抗体消长幅度比同时期未纯化的常规灭活疫苗明显,其中免疫至63 d时中和抗体效价(ELISA)平均高达245.7稀释倍数,比常规疫苗中和抗体效价平均高出66.3稀释倍数。试验表明,灭活病毒进行膜纯化技术处理后,免疫效果显著高于传统的灭活疫苗。     

鸡传染性鼻炎(三价)和新城疫二联灭活疫苗的研究

利用Page A型、B型、C型副鸡禽杆菌和新城疫病毒La Sota株,研制鸡传染性鼻炎(三价)和新城疫二联油乳剂灭活疫苗。用3个批次疫苗进行单剂量(0.5mL/次)3次接种和大剂量(2.0mL)单次接种的安全性试验、SPF鸡的免疫效力试验、商品鸡的免疫持续期试验和疫苗的保存期试验。结果表明,3批疫苗对试验鸡安全无副作用;免疫接种SPF鸡只30d后对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥80%,用20μL/只疫苗免疫接种SPF鸡21d后新城疫的平均HI抗体24;商品鸡42日龄首免,110日龄二免,二免后9个月对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,对新城疫病毒强毒100%保护;用4℃~8℃保存12个月和15个月的3批疫苗进行了SPF鸡的近期免疫效力试验,结果对A、B、C型副鸡禽杆菌攻毒的保护率≥70%,用20μL/只疫苗免疫SPF鸡,免疫接种后21d新城疫病毒的平均HI抗体24,对新城疫病毒强毒的攻毒保护率70%。说明研制的疫苗安全有效。     

鸡新城疫、禽流感（H9亚型）二联灭活疫苗的安全性和免疫效力试验

将鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗分别以肌肉注射和皮下注射的方式单剂量、单剂量重复、超剂量分别接种28日龄SPF鸡和6月龄产蛋鸡进行安全性试验.同时,将不同剂量疫苗分别接种30日龄SPF鸡,接种后定期采血,分离血清测定HI抗体水平,并于免疫后1、2周从每组试验鸡中抽取10只攻击AIV SY株病毒.结果显示,疫苗以不同剂量接种试验鸡后未见任何不良反应,对产蛋鸡的生产性能基本无影响;试验鸡在免疫后2周即可产生较高水平的HI抗体,其中ND HI抗体几何平均值不低于1∶128,AI HI抗体几何平均值不低于1∶74,攻击AIV SY株病毒后病毒分离率为0,在免疫后20周其HI抗体仍在保护水平以上.表明鸡新城疫、禽流感(H9亚型,SY株)二联灭活疫苗安全性良好,免疫效果确实.